一、混合型生物人工肝治疗急性肝衰犬的研究（论文文献综述）
潘晨燕[1]（2021）在《仿生生物人工肝的构建及其治疗急性肝衰竭的作用研究》文中认为目的:基于肝细胞微载体与半透膜微管构建仿生肝小叶结构单元;基于肝小叶结构功能单元构建肝脏芯片;肝脏芯片应用于仿生生物人工肝（Bionic bioartificial liver system,BBALS）治疗急性肝衰竭的效果研究。方法:第一部分:构建基于肝小叶结构功能单元的肝脏芯片。通过对肝细胞微载体进行肝功能评估,验证其模拟肝脏微环境以及作为体外生物反应器单元可能性,并与半透膜微管结合构建肝小叶结构功能单元。将其与双向循环体系结合构建肝脏芯片,通过对双向循环体系不同流速进行优化,优选出最适合肝细胞微载体培养的流速,能够维持肝细胞微载体最强活性、及最佳细胞功能。实验分为对细胞进行二维平板培养组和肝细胞微载体模拟3D培养组,使用过碘酸雪夫染色法（Periodic Acid-Schiffstain,PAS）观察糖原合成情况,同时使用吲哚青绿（Indocyanine green,ICG）染色观察摄取及排泄能力,通过检测尿素（Urea）、白蛋白（Album,ALB）水平评估合成及分泌能力,检测细胞色素P-450表达（Cytochrome P-450,CYP-450）情况,通过细胞增殖及肝功能水平检测确定最佳流速。第二部分:通过使用构建的仿生生物人工肝,对其治疗急性肝衰竭的作用进行研究。使用3D肝脏芯片作为新型生物反应器应用于BBALS中,通过过滤D-氨基半乳糖诱导（D-galactosamine,D-Gal）形成急性肝衰竭（Acute liver failure,ALF）兔模型,对其进行血浆置换,研究BBALS治疗ALF的作用。实验分为正常组、ALF组以及BBALS治疗组,观察丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（Aspartate aminotransferase,AST）、尿素和白蛋白水平,并用H&E、Ki-67和Tunel染色检测炎症反应、增殖和凋亡程度。结果:第一部分:肝细胞微载体3D培养组与细胞平板培养组相比,肝糖原合成更多,ICG摄取和释放速度更快,尿素合成、白蛋白分泌水平增高,CYP-450水平增高。得到了优化后的最佳流速,证明肝脏芯片在5mL/h时能够保持较高的细胞活性,维持其特异性功能。第二部分:与未治疗的ALF组相比,BBALS治疗组的ALT和AST显着降低,尿素和血浆生成明显改善,炎症浸润、肝细胞凋亡和肝细胞增殖显着减少。结论:1.肝细胞在微载体上3D培养与细胞平板培养相比有更好的肝储备、合成、分泌、代谢能力,将其与半透膜微管组装构建了模拟肝脏肝小叶结构的功能单元。发现肝小叶结构功能单元结合双向循环体系构建的肝脏芯片能够在0.5mL/h流速下使细胞达到最佳生长活性,有较好的肝脏特异性功能。2.仿生生物人工肝治疗急性肝衰竭后,肝脏损伤程度减轻,解毒和合成功能得到一定程度的恢复,显示了其在组织工程中的应用前景。
柴玲姗[2]（2020）在《血浆置换与双重血浆分子吸附系统治疗肝衰竭的疗效观察》文中认为研究背景肝衰竭（liverfailure）是指在多种因素单独或者共同作用下,导致肝脏结构、功能严重损伤,继之出现合成、代谢、解毒等严重的功能障碍,临床常表现为出血、感染、黄疸、肝性脑病、腹水等。肝衰竭发生的具体机制仍不清楚,“免疫损伤-缺血缺氧-内毒素血症”被认为在肝衰竭的发生及发展中起重要作用。传统意义上,肝脏被认为是一个参与代谢、营养、解毒的场所,目前研究发现,肝脏也是一个复杂的免疫器官,其发挥免疫功能的细胞有:kupffer细胞（kupffer cells,KCs）、肝星状细胞、自然杀伤细胞、肝脏2型天然淋巴样细胞、粘膜相关恒定T细胞等。同时,肝脏具有特殊的供血系统,肝动脉提供约25%的入肝血流量,门静脉提供约75%入肝血流量,而门静脉收集的来自胃肠道的血液经过肝窦与肝脏免疫细胞接触,使肝脏会不断受到一系列具有炎症潜能的饮食和共生细菌及其产物的攻击。正常情况下,这些来自内脏的抗原分子产生的病原体相关分子模式（pathogen-associated molecular patterns,PAMPs）、衰老坏死细胞产生的损伤相关分子模式（damage-associated molecular patterns,DAMPs）,被肝脏细胞及kupffer细胞等产生的模式识别受体（pattern recognition receptors,PRRs）结合,在肝脏中被去除、降解,此过程即为免疫耐受;同时,肝脏也会对致病性病原体、恶性细胞等进行免疫监视。在健康的肝脏中,虽然需要进行不断变化的代谢和组织重建活动及需要经常接触微生物及其产物和食物源性抗原等,但机体通过严格调控,产生受控制的持续的炎症反应。当各种致病因素及诱因作用于肝脏时,导致肝脏结构及功能严重损害,进而导致肝脏实质及非实质细胞的减少,使肝脏对各种抗原等的清除能力下降,在肝衰竭在早期阶段,各种细胞因子信号通路相互作用,使肝脏免疫细胞及血液循环中的B淋巴细胞、T淋巴细胞被过度激活,产生过度免疫反应,进而导致大量急性期蛋白、细胞因子、补体等在短时间内大量释放,导致促炎、抗炎失衡,进而导致肝脏局部及全身的免疫紊乱。如果不能及时清除这些危险的刺激并解除炎症,就会导致慢性感染、自身免疫或肿瘤生长等。这不可避免地与慢性病理性炎症和组织稳态紊乱有关,肝脏逐渐产生纤维化、肝硬化,甚至导致肝功能衰竭。目前,肝衰竭的治疗,最有效的方法之一是肝移植,但是由于国内肝源缺乏、移植后的并发症、需长期服用免疫抑制剂、费用高昂等而受限制,人工肝治疗联合内科综合治疗仍是肝衰竭治疗的常用方法。其中,近几年出现的双重血浆分子吸附系统（double plasma molecules adsorption system,DPMAS）,因具有BS330胆红素吸附柱及HA330-II中性树脂结构,被认为可以在有效清除胆红素等内毒素的同时降低炎症因子水平。本文拟观察血浆置换（plasma exchange,PE）与双重血浆分子吸附系统单独及联合治疗肝衰竭的疗效及其对肝衰竭患者短期生存率的改善作用。目的对比血浆置换、双重血浆分子吸附系统单独及联合治疗肝衰竭的疗效,观察其对短期生存状态的影响,及影响短期生存状态的因素。方法收集2018年6月1日至2019年10月31日收入郑州大学第一附属医院的肝衰竭患者,共179例。所有患者在内科综合治疗的基础上,给予人工肝支持治疗,其中,78例行血浆置换治疗（A组）,56例行血浆置换+双重血浆分子吸附系统治疗（B组）,45例行双重血浆分子吸附系统治疗（C组）,统计所有患者的临床资料,包括一般资料、血常规、电解质、肝功能、凝血功能、炎症因子、影像学检查、短期（2周、4周、8周）生存状态,并采用SPSS21.0软件进行数据分析。结果1.临床症状 3组患者在人工肝治疗结束后的临床症状（乏力、腹胀、纳差、恶心等）均得到改善,好转率分别为:82.0%、83.9%、80.0%,3组间比较,差异无统计学意义（χ2=0.263,P=0.877）。2.实验室结果 3组患者治疗后24h内的实验室结果较基础值相比:A组治疗后,血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）水平降低,白蛋白（ALB）、血小板（PLT）、钠离子（Na+）水平及凝血酶原活动度（PTA）值升高,凝血酶原时间（PT）缩短,差异有统计学意义（P均<0.05）;B组治疗后,血清ALT、AST、TBIL、DBIL、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-6、IL-8水平降低,ALB、PLT、Na+水平升高,PT缩短,差异有统计学意义（P均<0.05）,PTA值变化差异无统计学意义（P=0.338）;C 组治疗后,血清 ALT、AST、TBIL、DBIL、TNF-α 白介素-6（IL-6）、白介素-8（IL-8）水平降低,PLT、Na+水平升高,差异有统计学意义（P均<0.05）,而ALB、PT、PTA的变化差异无统计学意义（P=0.849、0.059、0.842）。3组治疗后,各项指标的差值比较:3组ALT、AST、IL-6、IL-8差值比较,差异无统计学意义（P 均>0.05）,TBIL、DBIL、ALB、PLT、Na+、PT、PTA、TNF-α差值比较,差值有统计学意义（P均<0.05）。对P<0.05的指标,进行两两比较,TBIL差值:B组>A组,差异有统计学意义（P=0.008）;DBIL差值:B组>C组>A组,差异有统计学意义（P均<0.05）;ALB差值:A组、B组>C组,差异有统计学意义（P均<0.001）;PLT差值:B组、C组>A组,差异有统计学意义（P均<0.05）;Na+差值:C组>A组,差异有统计学意义（P=0.004）;PT差值:A组>B组、C组,差异有统计学意义（P均<0.001）;PTA差值:A组>B组、C组（P均<0.001）,B组>C组（P=0.005）,差异有统计学意义;TNrF-α差值:C组>B组,差异有统计学意义（P<0.001）。3.临床疗效 3组总体有效率对比,差异无统计学意义（χ2=2.691,P=0.260）。4.生存率比较 3组患者2周、4周生存率比较,差异无统计学意义（P均>0.05）;3组间8周生存率差异有统计学意义（P=0.010）,B组生存率>A组、C组,差异有统计学意义（P=0.005、0.015）,A组与C组生存率比较,差异无统计学意义（P=0.978）。5.预后因素分析 影响肝衰竭患者8周生存率的独立危险因素有:血清TBIL、PTA 及 IL-6 的水平。结论1.影响肝衰竭患者8周生存率的独立危险因素有:血清TBIL、PTA及IL-6的水平。2.血浆置换及双重血浆分子吸附系统联合治疗降低血清IL-6、IL-8水平的效果优于后者单独应用。3.血浆置换及双重血浆分子吸附系统联合治疗8周生存率分别高于单独治疗;而单独应用时的8周生存率对比,差异无统计学意义。
黄月月[3]（2019）在《血浆吸附联合半量血浆置换与血浆置换治疗肝衰竭的临床对比研究》文中进行了进一步梳理目的:通过对血浆吸附联合半量血浆置换治疗肝衰竭的疗效分析,探讨其使用价值,以及在临床应用及推广的可能性。方法:1.根据2015亚太肝衰竭诊治指南,且剔除晚期妊娠、合并严重感染、脓毒血症、严重心肺肾功能不全、活动性出血、恶性肿瘤患者,将84名肝衰竭患者,分为实验组（n=30）和对照组（n=54）,均使用相同一致的内科综合治疗,实验组辅以血浆吸附联合半量血浆置换人工肝治疗,对照组辅以血浆置换人工肝治疗;2.所有患者均股静脉置管,按2007人工肝支持系统操作指南进行;3.留取两组患者人工肝治疗前后多时段静脉血,检测分析两组患者血清总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、白蛋白（ALB）、白细胞（WBC）、国际标准化比值（INR）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、肿瘤细胞坏死因子-α（TNF-α）值的变化百分比。结果:1.人工肝治疗前后两组的TBIL和DBIL下降百分比均有统计学差异（P<0.05）,实验组疗效更好;人工肝治疗前后两组的ALT、AST和INR下降百分比均没有统计学差异（P>0.05）,疗效相当;人工肝治疗前后两组的ALB上升百分比没有统计学差异（P>0.05）,疗效相当;人工肝治疗前后两组的WBC上升百分比有统计学差异（P<0.05）,实验组升高更明显。2.人工肝治疗前后两组的IL-1β、IL-6和TNF-α变化百分比均没有统计学差异（P>0.05）;人工肝治疗后和人工肝治疗后72h两组的IL-6变化百分比有统计学差异（P>0.05）,对照组下降更明显;人工肝治疗后和人工肝治疗后72h两组的IL-1β和TNF-α变化百分比均没有统计学差异（P>0.05）。3.实验组人工肝治疗后肝功能逐渐好转,TBIL、DBIL、ALT、AST均呈现下降趋势,TBIL下降最明显,尤其在人工肝治疗后测量的值下降最显着,在吸附4h时ALT、AST、TBIL、DBIL值均明显出现下降。结论:新的组合型人工肝血浆吸附联合半量血浆置换治疗肝衰竭有效,在降低TBIL和DBIL方面优于单纯血浆置换,在对ALT、AST、ALB、INR、TI-1β、TNF-α方面两组疗效近乎相同。
蔡磊[4]（2017）在《基于微囊化猪肝细胞的生物人工肝治疗食蟹猴急性肝衰竭的实验研究》文中指出第一章食蟹猴急性肝功能衰竭模型的建立及评价目的:稳定的、重复性好的大动物急性肝衰竭（ALF）模型是人工肝研究不可或缺的平台。本章研究旨在建立一种药物和外科食蟹猴ALF模型。方法:1、16只食蟹猴随机分为4组（A,B,C,D）,分别经外周静脉注射0.30,0.25,0.20 + 0.05（间隔 24 h）,0.20 g/kg 的 D-氨基半乳糖（D-gal）;给药后观察受试猴的临床表现,生存时间,生化、凝血、颅内压（ICP）和肝脏的病理变化;2、6只食蟹猴行袖套式插管门静脉-右肾静脉转流联合胆总管结扎、切断术（PRRS+CBDLT）,术后观察动物的临床表现,生化、凝血和肝脏的病理和组织学变化。结果:1、给药后受试猴均出现不同程度的精神萎靡,进食减少、黄疽等表现,生存时间ABC三组分别为56±8.7h、95±5.5h和99±2.2h,D组除1只136h死亡外,其余猴全部存活。血清肝酶、TBiL、Cr、BUN、血Amm等明显升高,ALB水平降低,PT明显延长,ICP增高等,病理学鉴定有明显肝细胞片状坏死、伴出血。2、术后实验猴血清AST、ALT、CK、LDH、ALP、TBiL、DBiL等明显升高,PT明显延长,ALB水平降低,术后第10天肝标本病理学和组织学检测出明显的肝细胞坏死、变性、凋亡等炎症反应。结论:成功构建了 D-gal诱导的药物性食蟹猴ALF模型和PRRS + CBDLT诱导的简化外科食蟹猴ALF模型。第二章基于微囊化猪肝细胞的生物人工肝安全性及有效性的评估目的:以具有自主知识产权的往返翻转灌注型生物反应器为核心,装载微囊化的猪肝细胞,组建生物人工肝（BAL）,通过对食蟹猴ALF模型的救治实验对其安全性和有效性进行评价,为其进一步临床试验奠定基础。方法:采用D-gal分次诱导建立食蟹猴药物性ALF模型,离体胶原酶两步灌流法分离西藏小型猪原代肝细胞,制备海藻酸钠-聚赖氨酸（APA）裹肝细胞微囊,装入往返翻转灌注型生物反应器中,构建BAL,用于ALF食蟹猴的治疗。15只ALF食蟹猴随机分为三组:（1）ALF组（空白对照）:模型猴仅观察不治疗;（2）BAL组:模型猴接受装载微囊化猪肝细胞的BAL治疗;（3）Sham组（设备对照）:模型猴接入BAL系统体外循环6小时,反应器内装载不含细胞的APA空微囊。比较三组实验猴治疗前后的生存时间、生化指标、PT及ICP等变化。结果:治疗过程中实验猴均耐受良好。与两个对照组相比,BAL组受试猴生存时间分别延长14小时、16小时。BAL可以显着降低受试猴血清肝酶、TBiL、血Amm等浓度和ICP,具有明显的肝支持作用。结论:基于微囊化猪肝细胞的生物人工肝系统能够改善ALF食蟹猴的血生化指标和ICP,延长生存时间。
胡玮[5]（2012）在《胶原/丝素纳米纤维材料肝细胞培养与多功能生物人工肝研究》文中认为人工肝主要分为非生物型人工肝、生物型人工肝。生物反应器是生物人工肝支持系统的核心部分,其性能直接关系到人工肝支持的效率和效果,生物反应器设计必须满足两个基本功能,一是为肝细胞提供良好的生长、代谢环境；二是为肝衰竭患者血液或血浆与肝细胞作用,进行物资交换提供理想的场所。体外肝细胞理想的培养条件应尽可能模拟体内肝细胞生长微环境,天然细胞外基质的胶原蛋白纤维尺寸为50～500nm.因此纳米尺度、具有合适的孔尺寸、高孔隙率支架能最大程度地仿生体内细胞外基质的特点。静电纺丝技术制备的纳米级材料比表面积大、孔隙率高,纳米纤维支架与细胞外基质在形态结构上非常相似,作为组织工程支架材料不仅能够起到支撑细胞的作用,还能发挥模板功能,为细胞提供黏附、生长、分化和增殖的场所。本研究采用静电纺丝的方法,制备胶原/丝素电纺纳米纤维膜,观察其对肝细胞体外培养的作用,为其在人工肝生物反应器中的应用提供理论依据；同时设计完成制作多功能生物人工肝支持系统,使其既具备血浆置换、血液灌流、血液滤过、血液透析、连续性血液透析滤过、白蛋白透析等非生物人工肝功能,又能与生物反应器配合使用,具备生物型人工肝功能。研究内容如下：1,以HFIP为溶剂,以胶原蛋白、丝素蛋白为材料,通过静电纺丝方法制备人工肝支架,研究静电纺丝的参数设定,并对材料进行物理、生物性能鉴定,主要包括交联后材料表面、交联特性、力学特性等；同时进行大鼠皮下植入实验,考察材料生物学性能。2,分离提取新鲜大鼠原代肝细胞,以胶原/丝素电纺纳米纤维膜作为基底材料进行体外肝细胞培养,考察肝细胞在材料界面上生长增殖情况。3,用已经成熟的肝细胞系HepG2细胞进行胶原/丝素电纺纳米纤维支架材料体外肝细胞培养,考察已经成熟的肝细胞株在材料界面上的生长情况。4,通过超声振荡方法制备胶原/丝素纳米纤维微载体,将微载体与胶原凝胶细胞培养技术结合,观察纳米纤维载体/胶原凝胶复合体系对肝细胞体外培养的作用。5,按照三重循环方式设计多功能生物人工肝支持系统,划分出功能单元分模块进行设计。进行样机制作,制定产品标准,完成样机检测。研究结果显示：1,以HFIP为溶剂,在溶液浓度为10%,电压为16kV,喷速为2ml/h,接收距离为12cm的条件下,胶原蛋白与再生丝素比例分别为10：0,7：3,5：5,3：7,0：10,电纺五种配比的胶原/丝素溶液,制备的复合纤维直径在550-1100nm之间,其中纯胶原和纯丝素的纤维平均直径分别为569±99nm和1058±240nm,纤维平均直径随着丝素含量的增加而增加。2,大鼠原代肝细胞培养结果显示,常规培养组在第二天细胞数量与细胞功能达到高峰,之后迅速下降,而胶原/丝素纳米纤维支架组在第二天达到高峰后,之后3-5天内维持平稳缓慢下降状态,其尿素合成、蛋白分泌与常规培养组有明显差别。3, HepG2细胞培养结果显示细胞在材料表面生长状态良好并与支架材料紧密结合。随培养时间延长,常规培养组细胞在第5天后逐渐死亡,失去细胞功能,胶原/丝素纳米纤维支架组细胞在4-9天内能够维持稳定状态,其尿素合成、蛋白分泌与常规培养组有明显差别,其中丝素含量为50%组的细胞状态和细胞功能高于其它组。4,纳米纤维载体/胶原凝胶复合培养观察结果显示,培养12d,纳米纤维载体/胶原凝胶复合培养组白蛋白分泌功能稳定,持续增高,于第9天达到峰值,之后缓慢下降；而胶原凝胶培养组培养液中白蛋白含量至第3天达到峰值,之后迅速下降,至第6天大部分细胞死亡,失去白蛋白分泌功能。镜下观察纳米纤维载体/胶原凝胶复合培养组细胞聚集于纳米纤维载体周围生长,形成聚集体,细胞维持稳定状态至12d；胶原凝胶培养组中细胞均匀分布,至培养第3天细胞数量到达峰值,之后细胞逐渐萎缩死亡。5,多功能生物人工肝设计图、产品标准见文章第三部分。综上所述,采用静电纺方法能够制备出纳米级别胶原/丝素复合纤维膜,而肝细胞在胶原/丝素电纺纳米纤维膜表面贴附牢固,生长状态良好并维持功能,部分细胞向膜材料表面孔径内迁移,较之常规培养细胞增殖效果明显,维持功能表达时间延长,丝素含量为50%组细胞活性最好,电纺胶原/丝素纳米纤维制备成微载体后,与胶原凝胶培养方式结合,能够进一步增强细胞培养功能,复合培养组细胞围绕微载体聚集生长,形成细胞聚集体,依附于微载体上肝细胞微囊包载体肝细胞形态,12d培养周期内细胞生长状态良好,12d后依然维持三维形态,细胞形态良好。胶原/丝素纳米纤维材料有望用于改善人工肝生物反应器中的细胞活性,维持细胞功能表达。多功能生物人工肝支持系统,既具备多种非生物人工肝功能,又能与生物反应器配合使用,具备生物型人工肝功能。
周鹏程[6]（2012）在《微囊悬浮型流化床式生物人工肝治疗急性肝衰竭猪的血清代谢组学研究》文中提出第一部分猪急性肝衰竭过程中血清代谢物的动态变化模式目的：探索急性肝衰竭发生发展直至死亡过程中血清代谢物的动态变化模式,建立急性肝衰竭病情严重程度评估模型。方法：用D-半乳糖胺对猪（n=8）行急性肝衰竭造模,分别在给药前（0h）给药后18h、24h、36h,死亡前12h内取血清样本行超高效液相色谱-质谱检测。用Simca-P等软件进行多元统计分析,用Matlab进行模式识别和构建线性判别分析模型。结果：急性肝衰竭过程中血清代谢物至少存在3种上升的动态变化模式和1中下降的动态变化模式。每种模式在不同的时间段的变化趋势和程度不同。芳香族氨基酸（模式1）和溶血卵磷脂（模式4）可以作为急性肝衰竭严重程度的评估指标,而一些结合胆汁酸和长链肉毒碱（模式2）及甘氨胆酸（模式3）可以在早期检测到肝损伤。基于急性肝衰竭病情的严重程度可以在代谢组学水平上体现的事实,我们建立了包含苯丙氨酸和溶血卵磷脂18：1的线性判别分析模型来分期评估急性肝衰竭的严重程度。弃一法交叉验证显示该模型对于训练样本的判断准确率为91.67%,对于外部验证数据集的预测精确度为92.31%。结论：D-半乳糖胺诱导的猪急性肝衰竭发生发展直至死亡过程中血清代谢物至少有4种动态变化的模式,每种模式都有着相对独特的临床意义。急性肝衰竭病情的严重程度可以用代谢组学模型来评估。第二部分微囊悬浮型流化床式生物人工肝对急性肝衰竭猪血清代谢物的影响目的：从代谢组学角度揭示微囊悬浮型流化床式生物人工肝（FBBAL）治疗急性肝衰竭的机制,评估其安全性和疗效,以获得改进FBBAL的有用信息。方法：用D-半乳糖胺行急性肝衰竭造模,18h后21头猪分为以下3组分别处理6小时：FBBAL组,急性肝衰竭猪给予包含微囊化原代猪肝细胞的FBBAL治疗；假治疗组,急性肝衰竭猪给予包含空微囊的FBBAL治疗；肝衰竭对照组（n=7）,不给予任何外部处理,只观察动物的一般状态。分别在给药前（0h）、给药后治疗前（18h）、治疗结束时（24h）和治疗结束后24h（48h）取血清样本行超高效液相色谱-质谱检测。用Simca-P和Matlab等软件进行多元统计分析。结果：FBBAL组的生存时间（70.4±11.5h）显着长于假治疗组（51.6±7.9h）肝衰竭对照组（49.3±6.6h）。治疗前（0h、18h）各组代谢谱没有明显不同。治疗后,FBBAL组的代谢谱和其他两组明显不同,并且后两组的代谢谱没有明显不同。经过FBBAL治疗胆汁酸进一步升高,而卵磷脂、溶血卵磷脂、脂肪酸和鞘磷脂进一步降低。结论：壳聚糖-海藻酸钠微囊对急性肝衰竭猪的血清代谢谱的短期影响较小。FBBAL具备一定的肝脏功能,能改变急性肝衰竭猪的血清代谢谱,从而延长受试猪的生存时间。然而FBBAL的作用不一定使得代谢物都靠近正常水平,其结构和功能仍需进一步完善。
简国登[7]（2011）在《新型人源细胞混合型生物人工肝构建和评价》文中进行了进一步梳理急性肝功能衰竭（acute liver failure ALF）是临床急危重征之一,病情危重,进展迅速,预后凶险,尽管近年来内科综合治疗措施取得了较大进展,患者病死率依然高达80%,是临床亟待解决的难题。目前,唯一有效的治疗是原位肝移植,然而,供体的日益短缺、围手术期成本高和手术复杂,使得绝大多数患者得不到最有效的治疗。基于此种前提下,国内外学者设计、构建了不同类型的人工肝系统,希冀借助一种体外的机械、理化或者生物的装置,清除患者体内蓄积的各种有害物质,补充必需物质,改善内环境,暂时替代衰竭肝脏的部分功能,为肝脏再生创造条件,作为通向肝移植的桥梁,从而降低患者病亡率。经过50余年的发展,目前人工肝治疗技术已逐渐成熟,其发展过程中先后经历了人-动物血液透析、体外离体肝灌注、人-人交叉循环、游离肝细胞移植到肝细胞悬液透析、混合型型生物人工肝支持系统等。其中,混合型生物人工肝（hybrid bioartificial liver, HBAL）代表着人工肝的发展方向。肝细胞作为HBAL的其核心原材料,对肝功能衰竭患者的肝支持作用几乎完全依赖于所用肝细胞的生物学功能。肝细胞来源种类较多,但目前尚未有一种可以完全满足临床的需要,如人肝细胞来源的匾乏、胎肝细胞的伦理问题、肝细胞株的瘤源性等原因、猪肝细胞潜在的异种细胞免疫反应、合成的蛋白质种属差异和猪体内普遍存在着内源性反转录病毒（procine endogenous retroviral,PERV）。我们的前期研究发现,中国人肝细胞系1细胞（CL-1 Cells）分化程度高且生物代谢功能良好,并且CL-1细胞组织学上来源于正常肝组织,较其他来源于肿瘤源性的肝细胞系更为安全,但是目前尚未对CL-1细胞作为种子细胞的HBAL进行研究。HBAL的另一核心则是生物反应器。理想的生物反应器应能为肝细胞提供较好的生长代谢环境,并达到较好的物质交换目的。我研究所与中国科学院电工研究所共同研制了一种全接触灌流型生物反应器,其采用双进口和双出口的透明有机塑料制成,进行治疗时能做180度的往返旋转运动,生物反应器中的肝细胞与血浆直接接触,可以充分的发挥肝细胞的代谢和生物转化功能,并且生物反应器有独立的供给氧气的装置,氧气通过膜式氧合器进入血清中,供给反应器中的肝细胞,以保证生物反应器中的肝细胞得到充分的氧气供应。本研究中,我们以这种全接触灌流型生物反应器接种微载体微重力CL-1细胞,结合非生物部分的膜型血浆分离器、血浆灌流器、蠕动泵等构建了一种简单、新颖的人源细胞混合型生物人工肝,并用食蟹猴急性肝功能衰竭模型对其进行安全性及有效性评价。具体包括以下两部分研究内容：一：食蟹猴急性肝功能衰竭模型的建立；二：新型人源细胞混合型生物人工肝的安全性及有效性评价。第一部分食蟹猴急性肝功能衰竭模型的建立目的构建一种稳定的具有潜在可逆性和良好重复性的非人灵长类大动物急性肝衰竭模型,为下一步开展新型人源细胞混合型生物人工肝的安全性与有效性评价奠定基础。方法选取雄性食蟹猴作为模型动物。15只食蟹猴随机分为3组：第一组为高剂量组（n=5）,给药剂量为0.45g/kg；第二组为中等剂量组（n=5）,给药剂量为0.3g/kg；第三组为低剂量组（n=5）,给予D-氨基半乳糖0.15g/kg。在速眠新Ⅱ和氯胺酮复合麻醉下把D—氨基半乳糖溶液经颈外静脉注入食蟹猴体内。给药后动态观察肝功能、肾功能、血糖、血氨、凝血项、支链氨基酸和芳香族氨基酸比等,记录动物存活时间。死亡动物立即尸检,动物死后作详细尸检并取肝脏、肾脏、脾脏、胰腺、心脏、肺、胃肠和脑组织标本,光镜及电镜下观察上述组织的病理学变化。统计学方法：采用SPSS13.0统计学软件进行数据处理。计量资料以均数±标准差（X±S）表示,各指标采用重复测量方差分析,生存时间采用Kaplan-Meier法。P≤0.05,有显着性差异或差异有统计学意义。结果高剂量组的平均存活时间是（56.1±8.1）h,有4/5的病食蟹猴死亡前出现肝昏迷,不能站立。中剂量组的平均存活时间为（109.8±11.2）h,其中3/5的病食蟹猴出现肝昏迷。低剂量组以剂量为0.15g/kg D-氨基半乳糖胺引导的5只食蟹猴中,除1只98h后死亡外其余全部存活,在第4d开始好转,之后全部指标渐恢复正常。中剂量组两只食蟹猴的存活时间分别为105和120 h,血清的转氨酶在给药后12 h开始升高,并随病程进展越来越高,血中的胆红素、胆酸、氨、乳酸也逐渐上升。而血小板则越来越低,凝血酶原时间越来越长。所有实验食蟹猴的血液电解质和酸碱度一直保持在正常的范围内。血气分析的结果也在正常范围,没有明显的变化。直线相关分析显示注射D-gal的动物存活时间与D-gal剂量呈显着负相关。Kaplan-Meier生存分析表明各组实验猴生存时间比较,（X2=21.933,P<0.001）差异有显着性。尸检发现所有给予D-gal的动物肝脏体积缩小,边缘变锐,表面色泽斑驳,散在针尖至米粒大小出血点,肝脏切面有暗红色淤血,黄色乳靡状坏死物质溢出,胆囊形态、大小正常,肠管有轻度到中度胀气,肠壁充血水肿,有散在出血点,肾脏、脾脏、肺脏肉眼未见异常。脑组织重度水肿,以血管周围间隙与星状细胞周围明显。光镜检查发现对照组动物肝小叶结构完整,无肝细胞坏死征象。而注射D-gal的动物均出现肝细胞片状坏死,伴有明显的出血,肝细胞弥漫性肿胀,肝窦受压变窄。肝细胞胞浆疏松化、空泡变性,部分肝细胞内可见脂肪空泡。部分肝细胞核碎裂、溶解。部分汇管区可见中性粒细胞和淋巴细胞浸润。高剂量组的动物肝细胞呈现大片坏死,肝小叶结构不清,出血严重。电镜检查未注射D-氨基半乳糖胺时,肝脏超微结构示食蟹猴肝细胞胞浆内糖原颗粒丰富,内质网丰富无扩张,线粒体丰富无肿胀,嵴清晰,线粒体膜清楚,细胞核染色质均匀,核膜核仁清晰。注射D-氨基半乳糖胺时,细胞浆内糖原颗粒均质化,粗面内质网脱颗粒,线粒体肿胀,嵴模糊,部分线粒体溶解,细胞间毛细胆管微绒毛减少明显,细胞核染色质集聚,核变形,核内假包涵体形成。结论1.成功建立了D-gal诱导的ALF模型及摸索出最佳药物剂量；2. D-gal诱导的食蟹猴ALF模型具有与人类ALF相似的临床、生化和病理学特征。3. D-gal诱导的食蟹猴ALF模型具有潜在可逆性和良好的重复性,动物死于ALF,且具有合适的治疗时间“窗口”,适合应用于人工肝临床前评价研究。第二部分新型人源细胞混合型生物人工肝安全性与有效性评价目的本研究旨在设计一种新型人源细胞混合型生物人工肝,并通过对食蟹猴急性肝功能衰竭的救治评价其安全性与有效性,探讨其临床应用的可行性。材料和方法整个HBAL的设计采用血浆灌流+生物人工肝模式,非生物部分通过血浆分离后进入血液灌流器中,经过灌流后的血液在通过蠕动泵部分进入生物反应器中,生物反应器部分置于37.5℃的恒温环境中,生物部分通过膜式氧合器供给反应器中肝细胞,氧气和二氧化碳气体时间比约为110：10（即2分钟内通氧气110s,通二氧化碳10s）,食蟹猴肝衰竭血浆经过肝细胞代谢后,再通过二次分浆回流至非生物部分,整个系统的预冲量约为800ml.其中灌流型生物反应器的预冲量约为300ml,整个系统通过旭化成血液净化用血液回路和自制聚乙烯胶管构成一个封闭的环路。选用中国人肝细胞系1（CL-1）作为肝细胞供体,采用微载体微重力肝细胞共培养方法培养至第五天,灌入反应器中,制成生物部分（细胞总量约为2.0×109,细胞密度4.0×108/ml）。选取雄性食蟹猴（体质量6.5～7kg）作为模型动物,采用D-gal 0.3g/kg颈外静脉注射法,诱发食蟹猴ALF模型。注射D-gal 48h后,15只ALF食蟹猴随机分成2组,即（1）ALF对照组（n=5）：食蟹猴仅予水与食物,未给予任何治疗措施；（2） HBAL治疗组（n=10）：动物接受HBAL治疗6h,生物反应器内接种2.0×109 CL-1细胞。观察治疗期间循环管路密闭性,以及治疗过程中不良反应情况和混合型生物人工肝治疗前、治疗中及治疗后观察食蟹猴生命体征变化；记录动物生存时间,动态检测天冬氨酸转氨酶、白蛋白、总胆红素、总胆汁酸、尿素氮、肌酐、血氨及计算Fischer指数等；食蟹猴死亡后立即作详细尸检并取肝脏、肾脏、脾脏、胰腺、心脏、肺、胃肠和脑组织标本,光镜及电镜下观察上述组织的病理学变化。此外,于HBAL治疗开始前及结束后取样计数反应器中肝细胞数量和肝细胞的状态,MTT法检测肝细胞活性。治疗结束后,取二次分浆后培养液镜检,同时取生物反应器中的CL-1细胞,以2.5g/L胰蛋白酶消化后离心,加DMEM调至细胞密度为1.0×1010/L,-70℃反复冻溶三次,使细胞裂解,将0.2ml含细胞碎片的溶液分别接种到5只裸鼠的颈部、后背部皮下（n=10）)。以0.2ml,密度为1.0×1010/L的CL-1细胞接种到5只裸鼠的颈部、后背部皮下（n=10）,苔盼蓝拒染试验计数活细胞率为97%,作对照,观察皮下细胞致瘤情况。4周后切取注射部位瘤组织及肝、肺、脑组织标本,苏木精-伊红（HE）染色镜检,观察细胞形态、排列及细胞核染色及是否有侵犯周边组织等情况。统计学方法：计量资料采用均数±标准差X±S表示。计量资料组间比较采用t检验及重复测量数据的方差分析,组间生存率的比较采用X2检验。动物存活时间采用Kaplan-Meier （KM）法生存分析及Log-Rank检验。所有资料的分析均采用SPSS 13.0 for Windows统计软件。P≤0.05,有显着性差异或差异有统计学意义。结果10只进行救治的急性肝衰竭食蟹猴无一于治疗过程中死亡。整个治疗过程中未发现循环管路中有液体渗漏,未发生明显的出血、过敏、高热及其他严重的不良反应,耐受良好。生命体征监测方面,除开始引血时出现一过性心率和血压波动,治疗全程心率、血氧饱和度、呼吸及平均动脉压都能保持稳定。治疗结束后,HBAL治疗组食蟹猴保持清醒,此后5只食蟹猴逐渐出现乏力、活动减少、反应迟钝、嗜睡、昏迷,并于注射D-gal 108-123h后死亡。但与ALF对照组比较,HBAL治疗组食蟹猴无出现呕吐、抽搐等严重消化道及神经系统症状。HBAL治疗组中5只食蟹猴存活,其余5只死亡,存活时间为128±3；ALF对照组食蟹猴全部死亡,存活时间为112±2。Kaplan-Meier （KM）法生存分析提示HBAL治疗可显着延长受试动物的生存时间（p<0.01）注射D-gal 48h后,全部食蟹猴均出现血清天冬氨酸转氨酶、总胆红素、总胆汁酸、尿素氮、肌酐、血氨浓度急剧升高,白蛋白、Fischer指数显着降低。HBAL治疗后,HBAL治疗组血清天冬氨酸转氨酶、总胆红素、总胆汁酸、尿素氮、肌酐、血氨浓度明显较ALF对照组降低。HBAL治疗开始前CL-1细胞活度为97-99%,治疗结束后,结束后CL-1细胞活度可保持为85-90%。二次分浆后取培养液镜下未见CL-1细胞。CL-1细胞接种至裸鼠的颈部、后背部皮下后4周时,实验组未见接种部位出现种植瘤,对照组共有10个接种部位出现肿瘤,致瘤率为100%。瘤体呈光滑的圆球型,界限清楚,有完整的包膜,肝、肺、脑等组织器官中未发现转移瘤。结论：1.构建了一种新型灌流型生物反应器。该生物反应器中的CL-1细胞能够保持较高的活性和良好的功能,同时CL-1细胞可以安全的作为HBAL细胞材料。2.构建了一种新型混合生物型人工肝。该型人工肝可以显着降低受试动物血清中天冬氨酸转氨酶、总胆红素、总胆汁酸、尿素氮、肌酐、血氨浓度,改盖Fischer指数,并延长动物存活时间,提示其具有明显的肝支持作用。
简国登,张志,汪艳,周焕城,赵逸超,潘明新,高毅[8]（2011）在《新型人源细胞混合型生物人工肝的安全性》文中进行了进一步梳理背景:目前原位肝移植是惟一有效治疗急性肝衰竭的方法,但其存在供体匮乏的问题。人工肝可作为肝移植过渡支持手段。目的:观察新型人源细胞混合型生物人工肝的安全性。方法:在全接触灌流型生物反应器接种微载体微重力中国人肝细胞系1细胞,结合血浆灌流对D-氨基半乳糖诱发急性肝功能衰竭模型食蟹猴进行治疗,治疗过程中观察循环管路的密闭性、不良反应及监测动物的生命体征变化,治疗结束后取灌流型生物反应器中的中国人肝细胞系1细胞,把细胞碎片与细胞分别接种至裸鼠的颈部、后背部皮下进行比较。结果与结论:对急性肝功能衰竭食蟹猴模型的治疗过程中未发现循环管路中有液体渗漏,未发生出血、过敏、高热及其他严重的不良反应,生命体征平稳。接种后4周时,细胞碎片接种裸鼠未见接种部位出现种植瘤,细胞接种裸鼠共有10个接种部位出现肿瘤,致瘤率为100%。说明新型人源细胞混合型生物人工肝是安全可靠的,可进一步探讨其有效性,有望用于各种动物实验研究及各期临床实验研究。
高森[9]（2010）在《新型混合性生物人工肝体外功能和安全性研究》文中认为急性肝衰蝎,病情危笃,进展迅速,预后凶险,是临床亟待解决的治疗难题。尽管近年来内科综合治疗措施取得了较大进展,患者病死率依然高达50-80%。肝移植可以显着降低肝衰竭患者病死率,但由于供肝严重短缺,事实上仅有不足1／3的患者接受了肝移植手术,而大多数患者在等待供肝的过程中死亡。基于此种前提下,国内外学者设计、构建了不同类型的人工肝系统,希冀借助一种体外的机械、理化或者生物的装置,清除患者体内蓄积的各种有害物质,补充必需物质,改善内环境,暂时替代衰竭肝脏的部分功能,为肝衰竭患者肝细胞再生及肝功能恢复创造条件,或等待供肝进行肝移植,从而降低患者病亡率。经过50余年的发展,目前人工肝支持系统（artificial liver support system,ALSS）治疗技术你逐渐成熟,基本形成三大类十几种方法,国外多数学者按照人工肝的组成和性质分为以下三类：（1）非生物型人工肝（2）生物型人工肝（bioartificial liver, BAL） （3）混合型生物人工肝（hybrid bioartificial liver, HAL）。其中,HAL代表着人工肝的发展方向.无论是BAL还是HAL,肝细胞都是其核心原材料,对肝功能衰竭患者的肝支持作用几乎完全依赖于所用肝细胞的生物学功能。BAL和HAL细胞来源种类较多,但目前尚未有一种可以完全满足临床的需要,如人肝细胞来源的匾乏、胎肝细胞的伦理问题、肝细胞株的瘤源性等原因、猪肝细胞潜在的异种细胞免疫反应、合成的蛋白质种属差异和猪体内普遍存在着内源性反转录病毒（procine endogenous retroviral, PERV）。我们的前期研究发现,中国人肝细胞系CL-1细胞分化程度高且生物代谢功能良好,并且CL-1细胞组织学上来源于正常肝组织,较其他来源于肿瘤源性的肝细胞系更为安全,但是目前尚未对CL-1细胞作为种子细胞的BAL和HAL进行研究。迄今已有4种BAL或HAL系统业已开始进行Ⅱ—Ⅲ期临床验证,其中大多采用中空纤维管型生物反应器,氧合的血浆流经中空纤维内腔以供应肝细胞氧气和营养物质。初步结果证明这些治疗是安全、有效的,没有明显的不良事件出现。但是,由于血浆携氧能力不足全血的10%,因此,这些系统的氧供远不能满足肝细胞的需要,很大部分的肝细胞可能处于缺氧状态,进而导致肝细胞活性降低和肝细胞功能不良,最终导致这些人工肝系统的疗效降低,并且中空纤维反应器中肝细胞分布不均匀,细胞粘附能力差,膜的污染和堵塞,细胞生长或过量气体产生会破坏纤维,既影响细胞功能的发挥又影响对生物反应器内细胞功能状态的观察。为解决生物反应器中肝细胞缺氧问题,我们与中科院共同研制了一种全接触灌流型生物反应器。该反应器采用双进口和双出口的透明有机塑料制成,并且这种反应器在治疗时做180度的往返旋转运动,生物反应器中的肝细胞与血浆直接接触,可以充分的发挥肝细胞的代谢和生物转化功能,并且HAL系统的生物部分有独立的共给氧气的装置,氧气通过膜式氧合器进入血清中,供给反应器中的肝细胞,以保证生物反应器中的肝细胞得到充分的氧气供应。本研究中,我们以这种全接触灌流型生物反应器接种微载体微重力肝细胞共培养至第五天的CL-1细胞,结合非生物部分的血浆灌流器,生物反应箱、蠕动泵、膜式氧合器等构建了一种简单、新颖的HAL,并用模拟肝衰竭血清（专利公开号：CN101556275）对其进行疗效和安全性评价。具体包括以下三部分研究内容：一；配置一种可以在常温下稳定保存的、能够反映部分肝衰竭患者血清成分变化的组合物；二：混合型生物人工肝的构建和评价；三：CL-1细胞作为种子细胞安全性的研究。第一部分模拟肝衰竭血清的配置及其稳定性研究目的：依据临床上肝功能衰竭时血清成分变化的主要特点,研制一种可用于体外检测混合型生物人工肝支持功能的组合物方法：（1）以未结合胆红素,鹅去氧胆酸,胆酸和氯化铵为组合物中的主要成分,将其先后溶解胎牛血清浓度为10％DMEM细胞培养基中,并使未结合胆红素,鹅去氧胆酸,胆酸和氯化铵的浓度分别在171-342μmol／L、80-160μmol／L、20-40μmol／L和240-400μmol／L范围内；（2）先将未结合胆红素制备成胆红素二钠后,再将其与鹅去氧胆酸,胆酸、氯化铵按照上述同样浓度范围先后溶解在DMEM细胞培养基中。上述两种不同方法配制的组合物放置在37.5℃的环境中,分别检测其在0,24和48小时组合物中各物质的浓度。结果：在37.5℃时,按上述两种方法配置的组合物中各物质在0、24和48h性质稳定,浓度变化无显着性差异（P>0.05）。结论：所配置的组合物性质稳定,能够在同一基线水平检测生物人工肝的体外功能。第二部分目的：本研究旨在设计一种新型混合型生物人工肝,并通过对模拟肝衰竭血清的净化作用评价其疗效,探讨其临床应用的可行性。材料和方法：整个HAL的设计采用血液灌流+生物人工肝模式,非生物部分通过血浆分离后进入血液灌流器中,经过灌流后的血液在通过蠕动泵部分进入生物反应器中,生物反应器部分置于37.5℃的恒温环境中,生物部分通过膜式氧合器供给反应器中肝细胞,氧气和二氧化碳气体时间比约为110：10（即2分钟内通氧气110s,通二氧化碳10s）,模拟肝衰竭血清经过肝细胞代谢后,在通过二次分浆回流至非生物部分,整个系统的预冲量约为800m1.其中灌流型生物反应器的预冲量约为300m1.,整个系统通过两套聚乙烯胶管构成一个封闭的环路。选用中国人肝细胞系1（CL-1）作为肝细胞供体,采用微载体微重力肝细胞共培养方法培养至第五天,灌入反应器中,制成生物部分（细胞总量约为4.0×109,细胞密度约为4.0×107／ml）。观察整个治疗过程中有无液体渗漏,动态监测模拟肝衰竭血清中未结合胆红素、鹅去氧胆酸,胆酸和血氨浓度的变化以及肝细胞对利多卡因代谢产物的检测,此外每过24h取样计数反应器中肝细胞数量和肝细胞的状态,MTT法检测肝细胞活性。结果：整个治疗过程中未发现管路中有液体渗漏；循环前24h内,模拟肝衰竭血清中未结合胆红素、鹅去氧胆酸,胆酸和血氨的浓度呈直线型下降,与Oh相比有统计学意义（P<0.05）,24h后浓度下降较平稳；循环48h后,CL-1细胞功能发生变化,生物反应器中模拟肝衰竭血清中的ALT、AST和LDH水平明显升高,与0h相比有统计学意义（P<0.05）；并且整个反应器中肝细胞的数量和活力在循环48h后也呈现显着性下降（P<0.05）。结论：1、构建了一种新型灌流型生物反应器。该生物反应器中的CL-1细胞能够保持较高的活性和良好的功能。2、构建了一种新型混合生物型人工肝。该型人工肝可以显着降低模拟肝衰竭血清中的毒性物质的浓度,提示其具有明显的肝支持作用。第三部分CL-1细胞及其细胞碎片致瘤性研究目的：探讨CL-1细胞的安全性方法：取培养至第五天的CL-1细胞,以2.5g／L胰蛋白酶消化后离心,加DMEM调至细胞密度为1.0×1010／L,-70℃反复冻溶三次,使细胞裂解,将0.2ml含细胞碎片的溶液分别接种到5只裸鼠的颈部、后背部皮下（n=10）)。以0.2ml,密度为1.0×1010／L的CL-1细胞接种到5只裸鼠的颈部、后背部皮下（n=10）,苔盘蓝拒染试验计数活细胞率为97%,作对照,观察皮下细胞致瘤情况。4周后切取注射部位瘤组织及肝、肺、脑组织标本,苏木精-伊红（HE）染色镜检。结果：接种后4周后,实验组未见接种部位出现种植瘤,对照组共有10个接种部位出现肿瘤,致瘤率为100%.切下裸鼠皮下的种植瘤,大体标本显示：瘤体呈光滑的圆球型,界限清楚,有完整的包膜。肝、肺、脑组织切片染色未发现有转移.结论：CL-1细胞可以安全的作为HAL细胞材料。
王凯[10]（2006）在《非生物型组合人工肝治疗急性肝衰竭动物高颅压的实验研究》文中研究说明目的：临床上由于各种病因所致的急性肝衰竭，由于肝细胞广泛破坏、功能衰竭，引起体内毒素蓄积，死亡率高，一直是临床上亟待解决的难题。由于广泛的肝损伤及严重的代谢紊乱及毒性物质堆积，可形成恶性循环，造成大部分患者死于并发症。肝性脑病是急性肝功能衰竭患者晚期严重并发症，以意识水平的快速恶化，颅内压增高和中枢灌注压降低为特征，神经病理学改变为脑水肿，而发展至颅内压增高的脑水肿、脑疝是急性肝功能衰竭病人死亡的重要原因。故颅内压是反映脑水肿、肝性脑病及病情严重程度的一个重要指标，尤其在动物实验中，颅内压的测定对反映病情、评价治疗效果及判断预后有十分重要的意义。目前对急性肝功能衰竭的治疗手段中，传统内科药物治疗疗效有限，常不能有效遏制病情的急剧进展；近年来肝移植使急性肝衰竭患者5年存活率提高到55～75％，但目前该治疗方法由于供体短缺而受到一定限制，90％的急性肝功能衰竭患者在等待肝移植期间发展成不可逆脑损伤而最终死亡。 研究表明急性肝功能衰竭并发脑水肿、颅内压增高可能的原因包括：（1）氨相关神经毒性；（2）脑血流自主调节功能丧失导致脑水肿；（3）循环炎症反应等。急性肝衰竭患者体内堆积的大量毒性物质，如：血氨、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6、白细胞介素-1、内毒素、一氧化氮、中分子物质等，可破坏血脑屏障、造成脑血流动力学紊乱并对神经细胞产生毒性作用，从而产生血管源性脑水肿及细胞毒性脑水肿。人工肝能够清除由于肝功能障碍造成的体内大量毒性物质的堆积，补充有效成份，阻断恶性循环导致的肝脏进一步损伤，降低急性肝衰竭患者的高颅压，延长患者的生存期，促进患者肝脏自发恢复，或为进一步肝移植赢得时间。
二、混合型生物人工肝治疗急性肝衰犬的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、混合型生物人工肝治疗急性肝衰犬的研究（论文提纲范文）
（1）仿生生物人工肝的构建及其治疗急性肝衰竭的作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1. 中医学对急性肝功能衰竭的认识 |
| 1.1 中医病名探究 |
| 1.2 中医病因病机研究 |
| 1.3 中医辨证分型 |
| 1.4 中医治疗及预后 |
| 2. 西医学对急性肝功能衰竭的研究进展 |
| 2.1 定义及分类 |
| 2.2 病因及发病机制 |
| 2.3 临床表现及诊断 |
| 2.4 治疗及预后 |
| 2.5 生物人工肝的研究进展 |
| 第二部分 实验研究 |
| 一、基于肝小叶结构功能单元的肝脏芯片的构建 |
| 1. 微载体球的肝功能评估研究 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.4 讨论 |
| 2. 肝小叶结构功能单元的构建 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 3. 肝脏芯片的构建 |
| 3.1 材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 二、仿生生物人工肝治疗急性肝衰竭的作用研究 |
| 1. 材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（2）血浆置换与双重血浆分子吸附系统治疗肝衰竭的疗效观察（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词 |
| 前言 |
| 研究对象与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 人工肝治疗肝衰竭的国内外应用现状 |
| 参考文献 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 |
| 致谢 |
（3）血浆吸附联合半量血浆置换与血浆置换治疗肝衰竭的临床对比研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文对照 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 实验材料 |
| 第3章 实验方法 |
| 第4章 实验结果 |
| 第5章 讨论 |
| 第6章 结论 |
| 第7章 展望 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（4）基于微囊化猪肝细胞的生物人工肝治疗食蟹猴急性肝衰竭的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 食蟹猴急性肝功能衰竭模型的建立及评价 |
| 第一节 食蟹猴药物性急性肝功能衰竭模型的建立及评价 |
| 1 引言 |
| 2 材料 |
| 3 方法 |
| 4 结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 参考文献 |
| 第二节 食蟹猴外科急性肝功能衰竭模型的建立及评价 |
| 1 引言 |
| 2 材料 |
| 3 方法 |
| 4 结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 参考文献 |
| 第二章 基于微囊化猪肝细胞的生物人工肝系统安全性及有效性的评估 |
| 1 引言 |
| 2 材料 |
| 3 方法 |
| 4 结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| References |
| 中英文缩略词简表 |
| 攻读博士期间的成果 |
| 致谢 |
（5）胶原/丝素纳米纤维材料肝细胞培养与多功能生物人工肝研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 目录 |
| 符号/缩略语 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、胶原/丝素纳米纤维的制备与性能 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 纤维直径检测结果 |
| 1.2.2 材料孔径检测结果 |
| 1.2.3 交联度观测 |
| 1.2.4 力学性能检测结果 |
| 1.2.5 皮下埋植结果 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、胶原丝素纳米纤维体外肝细胞培养研究 |
| 2.1 胶原丝素电纺膜大鼠原肝细胞培养 |
| 2.1.1 材料和方法 |
| 2.1.2 结果 |
| 2.1.3 讨论 |
| 2.2 胶原丝素电纺膜体外肝细胞培养 |
| 2.2.1 材料与方法 |
| 2.2.2 实验结果 |
| 2.2.3 讨论 |
| 2.3 胶原丝素纳米纤维微载体体外肝细胞培养 |
| 2.3.1 材料和方法 |
| 2.3.2 实验结果 |
| 2.3.3 讨论 |
| 2.4 结论 |
| 三、多功能生物人工肝支持系统设计研究 |
| 3.1 生物人工肝治疗模式讨论 |
| 3.1.1 循环模式 |
| 3.1.2 硬件配置 |
| 3.2 生物人工肝应用范围讨论 |
| 3.2.1 血浆置换 |
| 3.2.2 血浆或血液吸附 |
| 3.2.3 血液透析、滤过加吸附 |
| 3.2.4 MARS |
| 3.2.5 单纯BAL |
| 3.3 生物人工肝硬件设计 |
| 3.3.1 血液净化装置部分 |
| 3.3.2 人工肝装置部分 |
| 3.4 多功能生物人工肝支持系统标准研究 |
| 3.5 总结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 附录 |
| 综述 人工肝支持装置综述 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
（6）微囊悬浮型流化床式生物人工肝治疗急性肝衰竭猪的血清代谢组学研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩写、符号清单和术语表 |
| 目录 |
| 前言 |
| 第一部分 猪急性肝衰竭过程中血清代谢物的动态变化模式 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 材料和方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 第二部分 微囊悬浮型流化床式生物人工肝对急性肝衰竭猪血清代谢物的影响 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 全文总结 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 附录1 |
| 参考文献 |
| 附录2 |
| 作者简介 |
（7）新型人源细胞混合型生物人工肝构建和评价（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 食蟹猴急性肝功能衰竭模型的建立 |
| 1 材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第二章 混合型生物人工肝的安全性与有效性评价 |
| 1 材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 在读期间论文发表情况 |
| 致谢 |
| 统计学证明 |
（8）新型人源细胞混合型生物人工肝的安全性（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 实验动物数量分析 |
| 2.2 大体情况 |
| 2.3 CL-1细胞碎片安全性 |
| 3 讨论 |
（9）新型混合性生物人工肝体外功能和安全性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一章 模拟人肝衰竭血清的研制及其稳定性研究 |
| 1.1材料与试剂 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二章 混合型生物人工肝的体外功能的研究 |
| 2.1 材料与试剂 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 混合型生物人工肝安全性研究 |
| 3.1 材料与试剂 |
| 3.2 方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 中英文名词对照与缩写 |
| 致谢 |
| 统计学证明 |
（10）非生物型组合人工肝治疗急性肝衰竭动物高颅压的实验研究（论文提纲范文）
| 论文部分 |
| 非生物型组合人工肝治疗急性肝衰竭动物高颅压的实验研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 综述部分 |
| 急性肝衰竭并发脑水肿的发病机制及其治疗 |
| 参考文献 |
| 缩写索引 |
| 致谢 |
| 发表文章 |
四、混合型生物人工肝治疗急性肝衰犬的研究（论文参考文献）
- [1]仿生生物人工肝的构建及其治疗急性肝衰竭的作用研究[D]. 潘晨燕. 南京中医药大学, 2021(01)
- [2]血浆置换与双重血浆分子吸附系统治疗肝衰竭的疗效观察[D]. 柴玲姗. 郑州大学, 2020(02)
- [3]血浆吸附联合半量血浆置换与血浆置换治疗肝衰竭的临床对比研究[D]. 黄月月. 南华大学, 2019(01)
- [4]基于微囊化猪肝细胞的生物人工肝治疗食蟹猴急性肝衰竭的实验研究[D]. 蔡磊. 南方医科大学, 2017(11)
- [5]胶原/丝素纳米纤维材料肝细胞培养与多功能生物人工肝研究[D]. 胡玮. 天津医科大学, 2012(12)
- [6]微囊悬浮型流化床式生物人工肝治疗急性肝衰竭猪的血清代谢组学研究[D]. 周鹏程. 浙江大学, 2012(10)
- [7]新型人源细胞混合型生物人工肝构建和评价[D]. 简国登. 南方医科大学, 2011(05)
- [8]新型人源细胞混合型生物人工肝的安全性[J]. 简国登,张志,汪艳,周焕城,赵逸超,潘明新,高毅. 中国组织工程研究与临床康复, 2011(12)
- [9]新型混合性生物人工肝体外功能和安全性研究[D]. 高森. 南方医科大学, 2010(04)
- [10]非生物型组合人工肝治疗急性肝衰竭动物高颅压的实验研究[D]. 王凯. 郑州大学, 2006(11)