一、慢性心肌冬眠动物模型的建立（论文文献综述）
黄薇[1]（2021）在《UCP2通过调控NLRP3炎症小体通路改善脓毒症心肌损伤的机制研究》文中进行了进一步梳理研究目的:临床部分:探讨血清解偶联蛋白2（UCP2）和核苷酸结合寡聚化结构域样受体3（NLRP3）水平在脓毒症患者中的相关性及应用价值。基础部分:在脓毒症心肌细胞中探索UCP2调控NLRP3炎症小体介导的焦亡经典通路的相关机制。研究方法:临床部分:UCP2-入组患者分为三组:ICU对照组:n=15;脓毒症非休克组:n=20;感染性休克组:n=53。收集入组患者入ICU24h内的外周血,对于septic shock组,还将收集患者转出ICU（或死亡）时的外周血。NLRP3-入组患者分为五组:健康对照组:n=30;ICU对照组:n=22;感染对照组:n=19;脓毒症非休克组:n=33;感染性休克组:n=83。收集入组患者入ICU24h内的外周血,健康人群标本为当天体检后检验中心剩余血清标本。血清UCP2和NLRP3的水平均由酶联免疫吸附剂测定（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）进行检测。同时收集如急性生理与慢性健康（acute physiology and chronic health evaluation,APACHE）Ⅱ评分、序贯器官功能衰竭（sequential organ failure assessment,SOFA）评分、乳酸等临床资料和相关检查检验结果。基础部分:首先,建立脓毒症离体和在体模型,将AC16细胞用1mg/L的脂多糖（LPS）刺激12h,而小鼠用盲肠结扎穿孔术（CLP）进行造模。在细胞水平,通过质粒上调/siRNA沉默UCP2,在动物水平,通过京尼平（genipin）抑制UCP2从而实现对UCP2的调控,进而研究UCP2对NLRP3炎症小体的调控作用。研究过程中,还对各组心肌细胞形态、线粒体损伤、NLRP3炎症小体通路关键蛋白（NLRP3/GDSMD（gasdermin）/cleavedcaspase-1）及通路相关促炎症因子（IL-1 β/IL-18）进行检测。结果:临床部分:感染性休克组及脓毒症非休克组的血清UCP2水平明显高于对照组（263.21±29.99 vs 115.96±32.99 vs 60.56±10.05pg/mL,P<0.001）。入 ICU 时的血清UCP2水平在诊断脓毒症及感染性休克方面,其曲线下面积（AUC）高于APACHEⅡ评分、SOFA评分、降钙素原及白细胞计数。入ICU血清UCP2水平对28d病死率的预测AUC为0.704,高于APACHE Ⅱ评分、SOFA评分。高血清UCP2水平的患者（>246.52pg/mL）,其28d病死率明显高于低血清UCP2水平的患者（<246.52 pg/mL）。入ICU时血清NLRP3水平在感染性休克组显着升高（431.89,386.61-460.21pg/mL）,相比健康对照组（23.24,9.38-49.73pg/mL）,ICU 对照组（74.82,62.71-85.93pg/mL）,感染组（114.34,99.21-122.56pg/mL）,及脓毒症非休克组（136.99,128.80-146.98pg/mL;P<0.001）。在诊断感染性休克方面,血清NLRP3的诊断价值并不亚于SOFA评分。高血清NLRP3水平的患者（>147.72pg/mL）具有明显升高的30d病死率。脓毒症心肌病患者具有更高的血清NLRP3水平。入ICU时血清UCP2与 NLRP3 水平（n=88）具有高相关性（r=0.966,P<0.001）。基础部分:通过LPS及CLP进行脓毒症造模后,UCP2的基因及蛋白水平的表达均明显升高。抑制UCP2导致NLRP3炎症小体的激活,反映在NLRP3/GSDMD/cleaved caspase-1蛋白表达的增多、促炎症因子IL-1 β/IL-18水平的升高、心肌细胞焦亡比例的增高。重要的是,上调UCP2的表达在细胞水平可以抑制以上情况。另外,我们也发现沉默或抑制UCP2可导致线粒体膜电位的下降、ROS产生增多、ATP生成减少、细胞内mtDNA拷贝数减少,提示UCP2对线粒体的保护作用。结论:1.上调UCP2保护线粒体,抑制NLRP3炎症小体激活,可改善脓毒症的器官损伤（心脏）和炎症反应。2.UCP2与NLRP3从临床到基础的密切相关性,体现线粒体与NLRP3炎症小体的密切关系。3.脓毒症时UCP2升高可能是机体的代偿反应。4.UCP2可作为脓毒症治疗的潜在靶点,具体干预方式和时机需进一步探索。5.血清UCP2、NLRP3水平可协助诊断脓毒症/感染性休克。6.血清UCP2、NLRP3水平与脓毒症严重程度、器官功能正相关,高血清水平提示预后不良。
高万里[2]（2020）在《慢性冬眠心肌与心源性猝死发生机制的研究》文中认为背景:中国心血管病患病率及死亡率仍处于上升阶段,推算心血管病现患人数2.9亿,心血管病死亡率仍居首位,占居民疾病死亡构成的40%以上。心源性猝死,占全部心血管死亡的50%以上,但因骤然发生、不可预料,存活率仅5%～10%,使其成为21世纪心血管疾病防治的重要挑战。心源性猝死多由恶性心律失常引起,尤以室性心律失常为主,例如室速、室颤。冬眠心肌广泛存在于缺血性心肌病患者中,其通过功能、代谢的适应性减低以维持生存,却获得了心源性猝死的易感性,因此,有必要对冬眠心肌引起心源性猝死的机制进行研究,为恶性心律失常的预防及治疗提供理论基础。目的:阐明冬眠心肌与正常心肌跨室壁三层细胞离子流变化的差异及探索其与心源性猝死的关系。方法:健康成年比格犬16只,分为A组（冬眠心肌组,8只）和B组（假手术组,8只）。A组采用开胸丝线结扎法造成左前降支狭窄（75%）,术后每日保持室外活动4 h,靶血管供血区域慢性缺血,制备慢性冬眠心肌模型;B组将丝线穿过前降支下方,但不结扎,其余同A组。两组均于术后12周终止实验。各组年龄、体重匹配,均在相同的环境下饲养12周。获取心肌组织进行HE染色,masson染色,观察各组心肌细胞的形态及胶原纤维分布。全细胞膜片钳技术测定酶解分离的Epi、M、Endo细胞膜离子流IKs、AP;结果:1.模型制备概况本实验A组和B组共16只比格犬,均顺利完成实验,且A组造模成功,各项数据基本符合预期要求,无麻醉意外,无心肌梗死、感染等术后并发症。2.超声心动图结果2.1 A组超声心动图多巴酚丁胺负荷试验A组行超声心动图多巴酚丁胺负荷试验时,左室前间壁（冬眠心肌区域）与左室后壁（正常心肌区域）进行比较。随着多巴酚丁胺剂量增加,左室前间壁（冬眠心肌区域）收缩期室壁增厚率（WT%）明显降低,且出现双向运动,即室壁运动随多巴酚丁胺剂量增加,先出现室壁运动增强,而后室壁运动减弱（均P<0.01）。随多巴酚丁胺剂量增加,左室后壁（正常心肌区域）室壁运动持续增强（均P<0.01）,冬眠心肌模型成功。2.2静息时室壁运动分析结果A组有较多节段出现室壁运动异常,B组未见明显室壁运动异常,差异有统计学意义（P<0.01）2.3左心室整体收缩功能测定A组术后左室收缩功能降低,表现为射血分数显着减少,B组术前左室收缩功能与术后比较未见明显变化,差异有统计学意义（P<0.01）3.A、B两组病理检测结果3.1心肌组织HE染色A组（图3a）心肌细胞体积增大,心肌细胞水肿、断裂,排列紊乱呈漩涡状或波浪状或杂乱无章,心肌间裂隙明显增宽且杂乱;B组（图3b）心肌细胞成束紧密排列,排列整齐,细胞外间质无明显增生。3.2心肌组织Masson染色A组（图4a）心肌细胞蓝染区增多,胶原纤维排列紊乱,纵横交错,且数量增多;B组（图4b）心肌细胞胶原纤维均匀分布,排列整齐,数量较A组少4.心肌细胞电生理记录结果4.1三层心肌细胞的Iks电流密度的变化:内层心肌细胞Iks电流密度的变化:膜电压为60mv时,A组IKs电流密度较B组减小（3.011±0.772 vs 4.232±1.645）,但无统计学意义（P>0.05）;中层心肌细胞Iks电流密度的变化:膜电压为60mv时,A组IKs电流密度较B组减小,（2.622±0.842 vs 5.045±1.680）,有显着统计学意义（P<0.01）;外层心肌细胞Iks电流密度的变化:膜电压为60mv时,A组IKs电流密度较B组减小,（4.475±2.831vs 9.804±5.903）有统计学差异（P<0.05）。组内比较:假手术组:M层IKs电流密度较Endo层和Epi层电流密度小,有统计学意义（P<0.05）;Endo层与Epi层有统计学差异（P<0.05）冬眠心肌组:M层IKs电流密度较Endo层和Epi层电流密度减小,无统计学差异（P>0.05）。Endo层与Epi层比较无明显差异4.2三层心肌细胞动作电位时程（APD）的差异在基础周长800ms刺激下,内层心肌细胞APD90变化:A组较B组延长（245.14±44.447 vs 289.76±53.360）,但无统计学意义（P>0.05）;中层心肌细胞APD90变化:A组较B组延长,（307.34±36.116 vs 580.75±8.553）有统计学意义（P<0.05）外层心肌细胞APD90变化:A组较B组延长（275.70±78.022 vs 481.38±1.720）,有统计学意义（P<0.05）组内比较:假手术组（control）:M>Endo,M>Epi（P<0.05）。冬眠心肌组（model）:M>Epi>Endo（P<0.05）TDR:冬眠心肌组与假手术组相比,跨室壁复极离散度（TDR）明显增加结论:1.开胸丝线结扎,术后辅以规律室外运动的方法制备犬冬眠心肌模型,模型制备方法简单,成功率高,对实验人员技术要求低,实验安全无射线,是一种简单可行的冬眠心肌模型的制备方法。2心肌冬眠时,三层心肌细胞的IKs明显减小,APD延长,且心肌细胞的这种变化呈现不均一性,进一步增加了跨室壁复极离散度,为恶性心律失常的发生提供了电生理基础,可能使冬眠心肌成为心源性猝死的一个独立危险因素。
张宜乾[3]（2016）在《PEDF/PEDF-R诱导急性缺血心肌细胞进入“冬眠状态”的作用及相关机制研究》文中指出研究背景急性心肌梗死（acutemyocardial infarction,AMI）是指冠状动脉血流中断,受累区心肌细胞严重而持久缺血导致的一系列综合征。AMI发生后,如果心肌缺血持续存在,梗死区大部分心肌细胞将难免死亡的命运,有部分心肌细胞可在慢性持续缺血状态下,逐渐进入“冬眠状态”,形成冬眠心肌而维持自身存活。然而,近年来的研究表明,这部分冬眠心肌细胞的数量,恰恰与血运重建治疗后心脏的受益程度及预后密切相关。色素上皮细胞衍生因子（pigment epithelium-derived factor,PEDF）属于丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族,具有抗血管生成、抗血管渗透、抗炎和营养神经细胞等多种生物学活性。我们在前期研究中发现,心脏缺血区早期,血浆及缺血区心肌的PEDF表达都显着下降;局部心肌转染PEDF后,可以显着减少缺血区心肌细胞的凋亡和程序性坏死,显着保护AMI模型大鼠的心脏功能。研究过程中我们进一步发现体外培养条件下的原代心肌细胞受PEDF蛋白干预后,缺氧时,存活的原代心肌细胞在形态及功能上有别于非干预细胞,进一步的机制研究背景下,我们提出假设:在急性缺血状态下,PEDF能够通过调节代谢和功能重塑,使心肌细胞处于类似于冬眠心肌的“冬眠状态”,从而有效保存了更多心肌细胞,为后续治疗提供了细胞学基础。PEDF是一种分泌性蛋白,须通过细胞膜受体介导才能发挥生物学作用。近年来的研究已经确认心肌细胞上存在一个80kDa的PEDF膜受体,称之为PEDF受体（PEDF receptor,PEDF-R）。PEDF-R具有磷脂酶A2和脂肪酶活性,PEDF与其结合后,能够激活上述两种酶活性而发挥脂解作用,生成的游离脂肪酸（free fatty acids,FFAs）、甘油二酯（diglyceride,DAG）和溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid,LPA）作为第二信使发挥生物学作用。细胞内FFAs,LPA作为细胞内信号分子,在抗氧化、调节血糖及细胞保护等方面的作用已经被认识;DAG通过激活蛋白激酶C（protein kinase,PKC）在细胞内发挥广泛的作用。综上所述,我们推测:在急性心肌缺血发生时,PEDF通过激活PEDF-R酶活性,释放出FFAs、DAG、PLA,参与了心肌细胞代谢和功能重塑,促使其进入类似于冬眠心肌的“冬眠状态”,暂时性降低心肌细胞的能量消耗,最大限度的提供存活条件。这部分细胞将为心肌梗死后的再血管化提供细胞储备。第一部分预转染目的基因的非开胸大鼠急性心肌梗死模型的建立目的开胸结扎冠脉血管并局部注射转基因动物模型,由于存在基因表达延迟性,在研究急性心肌梗死的基因治疗时具有局限性,因此,设计了一个非二次开胸可实现结扎/松解冠脉血管的动物模型,目的基因病毒预注射,检测基因表达后,再实行非二次开胸的心肌缺血/再灌注损伤,本部分验证动物模型的可行性及有效性,为后续研究提供动物模型基础。方法选择SD大鼠,麻醉后经左侧第四肋间开胸。在冠状动脉左前降支预置结扎线和松解线,同时在其血供区（预测结扎后缺血区）,心肌注射携带绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）基因的慢病毒。术后第1、3、5、7d检测转染区心肌GFP的蛋白表达,检测炎性因子肿瘤坏死因子-α（tumornecrosis factor,TNF-α）和白介素-1（interleukin-1,IL-1）的变化,检测血清中C反应蛋白（C reactive protein,CRP）、血管紧张素 Ⅱ（angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ）、抗利尿激素（antidiuretic hormone,ADH）的变化,并通过心脏超声检测动物心率（HR）、心输出量（CO）、射血分数（EF%）和左室短轴缩短率（FS%）。术后第7dGFP组和sham组都实施缺血/再灌注,Evan’s/TTC染色检测动物心肌梗死区面积比。结果预置线并转染携带GFP基因的慢病毒后,转染区GFP表达持续升高,5d后达到稳定状态。转染区TNF-α、IL-1及血清中CRP在术后1-3d逐渐升高,第7d恢复正常水平;血清中Ang II、ADH在术后1-3d逐渐升高,第Sd恢复正常水平。术后第Id HR升高,CO下降,至第5d恢复正常水平;EF%和FS%在术后第Id降低,至第7d恢复正常水平。术后第7d实施缺血再灌注后GFP组动物心肌梗死区与缺血危险区比率与sham组（也实施了I/R）相比,无统计学差异。第二部分PEDF诱导急性心肌梗死大鼠心肌细胞进入“冬眠状态”目的检测PEDF对发生AMI后心脏收缩功能以及心脏储备功能的影响,推断冬眠心肌的形成情况,探究PEDF是否可诱导急性缺血心肌细胞快速进入“冬眠状态”,方法前期动物模型下,冠状动脉左前降支预置结扎线,局部心肌内注射携带PEDF基因的慢病毒,7日后在非二次开胸状态下实施AMI,心脏彩超分别于AMI后第1、2、4、6、8周检测心脏功能,8周后进行多巴酚丁胺负荷试验,心脏彩超检测心脏储备功能。结果AMI后1～2周,PEDF组EF%、FS%降低（与GFP组相比,P<0.05）;急性心肌梗死6-8周,PEDF组EF%、FS%升高（与GFP组相比,P<0.05）。急性心肌梗死8周后,多巴酚丁胺负荷试验示:PEDF组心脏储备功能（△EF%、AFS%）显着增高（与GFP组相比,P<0.05）。第三部分PEDF/PEDF-R诱导缺血心肌细胞进入“冬眠状态”的相关机制目的使用离体培养的H9c2细胞和大鼠乳鼠原代心肌细胞,在对细胞线粒体密度、自噬、Ca2+水平、收缩力等可能与PEDF诱导缺血心肌细胞进入“冬眠状态”有关的条件进行检测,并使用siRNA敲减PEDF-R来探讨相关机制,进一步验证PEDF是否能够诱导急性缺氧心肌细胞收缩力下调,其机制是否与PEDF激活心肌细胞膜上的PEDF-R有关。方法D-Hank’s液和缺氧培养模拟心肌缺血;在培养基中加入重组PEDF蛋白;siRNA敲减PEDF-R。Mito-Tracker（?）Red线粒体探针标记线粒体,使用荧光显微镜和流式细胞分析仪检测细胞线粒体密度;Western blot检测细胞中线粒体自噬相关蛋白Atg5表达;透射电镜观察细胞自噬小体的密度,气相色谱-质谱联用（GC-MS）分析检测细胞内游离FFAs水平;ELISA法检测细胞内DAG水平;Fura2-AM钙离子探针检测各组原代心肌细胞Ca2+水平;视频监测系统观察心肌细胞收缩变化。结果与缺氧对照组相比,加入PEDF后,缺氧条件下H9c2细胞的线粒体密度下降（P<0.05）,细胞内自噬小体增多（P<0.05）;加入PEDF后,在缺氧不同时间点（6h,12h,18h,24h）检测Atg5蛋白均高于单纯缺氧组（P<0.05）;siRNA-PEDF-R可阻断发生（P<0.05）。H9c2细胞缺氧条件下,PEDF组棕榈酸（palmitic acid,PA）和DAG显着增多;siRNA-PEDF-R可阻断发生（P<0.05）。与正常培养的原代心肌细胞相比,缺氧对照组细胞内Ca2+水平升高（P<0.05）,PEDF组细胞内Ca2+水平较缺氧对照组低（P<0.05）,siRNA-PEDF-R可阻断发生（P<0.05）。缺氧条件下,各组心肌细胞收缩力都随时间延长而下降,与缺氧对照组比,PEDF组心肌细胞收缩力下降速度加快（P<0.05）;siRNA-PEDF-R 可阻断发生（P<0.05）。结论:1.本研究AMI动物模型,实现了外源性目的基因充分表达后,非二次开胸实施AMI,提高了缺血心脏基因转染实验研究的科学性。2.PEDF-R介导PEDF增加缺氧心肌细胞脂质分解,经FFAs及DGA信号通路,增加缺氧心肌细胞线粒体自噬、减少肌浆网Ca2+释放,降低心肌收缩力及能量消耗,诱导缺血心肌细胞进入“冬眠状态”。
卢志强,张艳军,崔广智,庄朋伟,张金保[4]（2012）在《心肌缺血模型的制作方法研究进展》文中研究说明心肌缺血（myocardial ischemia）是心脏的血液灌注减少,导致心脏的供氧减少,心肌能量代谢异常,不能支持心脏正常工作的一种病理状态。心血管疾病康复机制研究的关键技术之一是复制心肌缺血动物模型。建立适当的动物模型,不仅为该病的发病机制和病理生理改变提供重要的资料,更重要的是能促进新药的开发,推进临床诊断和各种治疗方法的进步。该文全面总结归纳了急性心肌缺血、慢性心肌缺血、可控性心肌缺血和离体心肌缺血四类心肌缺血模型的制作方法以及各自的特点,为该疾病模型的制作与选择提供参考。
王亮[5]（2008）在《犬急性心梗早期冠脉搭桥对冬眠心肌及室壁运动的影响》文中指出目的长期以来,心肌缺血是否引起心肌坏死被认为是“全或无”的关系。缺血轻或时间短,心肌没有损害,功能很快恢复,反之,则会出现心肌坏死,心功能不能恢复,其收缩功能丧失,表现为室壁节段性运动异常,对于冠心病的患者来说,只要有节段性运动异常存在,则相应心肌就无存活（坏死或瘢痕）。进入缺血性心肌病血管重建时代以后,人们发现心肌在缺血条件下,不仅只有缺血坏死的结局,而且还有心肌缺血后心肌冬眠这一特殊时期。心肌冬眠是指由于长期持续冠状动脉供血减少产生的可逆性功能障碍状态,表现为局部心肌收缩功能持续低下,冠脉血流一旦恢复,该心肌的功能即可完全或部分恢复,它是心肌功能为适应降低的血流而发生的匹配性下降,是生存心肌在低灌注下为防止自身坏死的自我保护。在心肌冬眠研究中重要的是了解心肌冬眠可维持多长时间,而不发生广泛的心肌坏死或纤维化,因为心肌冬眠可能与合并有不稳定心绞痛或非Q波型心肌梗死的患者有很大的关系,在这些患者中可能存在着严重的冠脉狭窄,静息冠脉血流下降所导致的室壁运动障碍。因此本研究以外科手段致犬急性心肌梗死,分别在不同时间段行冠脉搭桥手术恢复冠脉血流,观察犬急性心梗早期冠脉搭桥对室壁运动的影响,探讨急性心梗早期冠脉搭桥对唤醒冬眠心肌的意义。方法结扎犬冠状动脉前降支（LAD）制备心梗模型（30只）。分别在心梗后1、2、4、6周行冠脉搭桥作为实验组,其中第2周4只,其余每组6只;对每个实验组分别设立心梗不搭桥对照组,每组2只。实验组分别在搭桥前及搭桥8周后开胸用多巴酚丁胺超声负荷试验（DSE）结合组织多普勒成像（DTI）技术标记冬眠心肌,并测定室壁运动记分:对照组在相同时间点同样的方法标记冬眠心肌并测定室壁运动记分。每只犬处死后分别测定心肌梗死面积。取材（标记冬眠心肌的部分）,免疫组化方法检测GLUT4在各组冬眠心肌中的表达情况。结果每个实验组各存活4只,对照组均存活。1、2周实验组较4、6周实验组及对照组梗死区心肌室壁运动记分明显减小（P＜0.05）,所有实验组较对照组搭桥后心肌室壁运动记分明显减小（P＜0.05）,所有实验组较对照组唤醒更多的冬眠心肌（P＜0.05）。1、2周实验组较4、6周实验组及对照组心肌梗死范围明显减小（P＜0.05）。冬眠心肌中GLUT4的表达要明显高于正常心肌,GLUT4在搭桥后的冬眠心肌中的各层表达不一致。1周搭桥可以改善内层冬眠心肌的供血,2周搭桥可以改善冬眠心肌内层及中层心肌的供血,4—6周搭桥可以改善冬眠心肌中层心肌的供血,而对照组只能靠侧枝循环改善冬眠心肌外层心肌的供血。结论犬急性心梗早期冠脉搭桥可以明显改善心肌室壁运动,唤醒更多的冬8民心肌,尤其2周内冠脉搭桥可以最大限度减少梗死心肌对室壁运动的影响,并可以减少心肌梗死范围。
陈艳,孙伏清,钟慧颖,张飞龙,陈良龙[6]（2007）在《家兔慢性冬眠心肌模型的建立》文中研究说明目的:建立家兔慢性心肌冬眠模型。RA方法:实验于2006-02/12在福建省冠心病研究所完成。实验分组:选择健康家兔30只,按随机数字表法分为模型组（n=18）和假手术组（n=12）。模型组采用开胸不全结扎冠状动脉左前降支中段,关胸后继续喂养1个月,造成心肌慢性缺血,构建家兔慢性冬眠心肌模型。假手术组仅开胸不作冠状动脉左前降支中段结扎。实验评估:①采用冠状动脉造影观察冠状动脉左前降支中段狭窄程度。②超声心动图、多巴酚丁胺超声心动图负荷实验观察慢性缺血心肌室壁运动情况。③氯化三苯基四氮唑染色检测心肌坏死程度。④苏木精-伊红常规染色利用光学显微镜观察心肌组织结构变化。⑤苦味酸-天狼猩红胶原纤维染色观察心肌间质胶原纤维增生情况。结果:术后模型组家兔15只和假手术组12只进入结果分析。①狭窄程度:模型组冠状动脉左前降支中段直径平均狭窄率为（84.90±4.24）%,假手术组未见明显狭窄。②左心室整体收缩功能:模型组左室射血分数、短轴缩短率显着低于假手术组,差异有显着性意义（t=10.314,11.938,P<0.01）。③心肌室壁运动情况:静息时模型组左室壁异常运动节段47个。多巴酚丁胺超声心动图负荷实验34个节段出现室壁运动障碍程度先加重而后改善的典型冬眠心肌的双相反应。④心肌坏死程度:氯化三苯基四氮唑染色显示模型组3只家兔出现小灶性透壁心肌坏死,其余12只家兔均未发现心肌坏死。假手术组12只家兔均未发现心肌坏死。⑤心肌组织结构变化:苏木精-伊红染色显示模型组心肌纤维肿胀,染色不均匀,横纹模糊,核周水肿;假手术组心肌纤维排列整齐、连接紧密。⑥心肌间质胶原纤维增生情况:苦味酸-天狼猩红胶原纤维染色显示模型组心肌间质、血管周围可见大量胶原纤维,呈不规则网状或团块状;假手术组心肌间质、血管周围见零星分布的胶原纤维。结论:采用开胸不全结扎冠状动脉左前降支中段建立家兔慢性心肌冬眠模型是可行的。
陈建华,林朝贵,李金国,张飞龙,陈良龙[7]（2007）在《慢性冠状动脉狭窄及慢性心肌冬眠模型的制作研究》文中研究指明目的建立慢性冠状动脉狭窄及慢性心肌冬眠的动物模型。方法采用球囊扩张及内膜剥脱技术造成冠状动脉左前降支（LAD）中段狭窄、心肌慢性缺血,建立小型猪慢性心肌冬模型。24只小型猪分成慢性心肌冬眠4周组（CHM4W组,6例）、假手术4周组（6例）、慢性心肌冬眠12周组（CHM12W组,6例）和假手术12周组（6例）。分别于球囊扩张及内膜剥脱术或假手术后4周和12周终止研究。冠脉造影观察LAD中段狭窄程度,超声心动图观察左心室壁运动。结果CHM4W组及CHM12W组动物LAD直径平均狭窄率（91.9±5.2）%,病变平均长度（13.4±2.8）mm;共检出46个左室壁异常运动节段,腺苷负荷超声心动图实验39个节段出现室壁运动障碍程度先加重而后改善的典型冬眠心肌的双相反应。结论通过球囊扩张及内膜剥脱技术成功建立了猪慢性心肌冬眠模型,模型制作方法简单,成功率高,动物死亡率低。
陈艳[8]（2007）在《家兔慢性心肌冬眠后心室重塑与氯沙坦干预的实验研究》文中认为目的在建立家兔慢性心肌冬眠模型的基础上,观察慢性冬眠过程中心肌细胞及心肌间质胶原纤维的变化并探讨其可能机制,观察这些变化对心功能的影响及氯沙坦的干预结果。方法51只清洁级健康家兔随机分为模型组（n=39）和假手术组（n=12）,采用开胸不全结扎冠状动脉左前降支（LAD）中段的方法,造成心肌慢性缺血,构建家兔慢性冬眠心肌模型;假手术组仅开胸不作LAD结扎。术中模型组死亡3只,假手术组全部存活。将模型组存活的36只家兔随机分为3组,慢性冬眠心肌组（CHM组,n=12）,小剂量氯沙坦干预组（LT1组,10mg.kg-1.d-1,n=12）、大剂量氯沙坦干预组（LT2组, 30mg.kg-1.d-1,n=12）。存活的假手术组（SO组,n=12）作为对照组。术后1个月分别采用下列方法检测模型制作是否成功:冠脉造影观察LAD中段狭窄程度,超声心动图、多巴酚丁胺负荷超声心动图试验（DSE）观察左室整体功能及慢性缺血心肌节段室壁运动,肉眼观察心肌大体形态学改变,HE染色观察心肌组织形态学改变,7天肌钙蛋白I检测心肌梗死。在鉴定模型成功的基础上,以苦味酸天狼星红染色（PSR）染色检测心肌细胞间质胶原纤维容积百分数（ICVF）,PSR偏振光显微镜下观察间质胶原纤维类型和比例改变、并计算I/III胶原纤维异常比例积分（PI/III）,免疫组化法及Western blot测定基质金属蛋白酶-2、9（MMP-2、MMP-9）及其抑制剂（TIMP-2）的表达情况,TUNEL法检测心肌细胞凋亡率（Rapo）,二维超声心动图观察左室射血分数（LVEF）及短轴缩短率（LVFS）。结果1、慢性心肌冬眠模型的鉴定CHM组12只家兔完成了所有实验步骤。在此12只动物中,LAD中段直径平均狭窄率84.90%±4.24%;静息超声心动图示LVEF及LVFS显着降低（P<0.01）并检出38个左室壁异常运动节段;这些节段在DSE中被检测出27个节段呈典型冬眠心肌“双相反应”,即在低剂量DSE时室壁运动功能先改善、而后在中高剂量DSE时室壁运动功能又减低;HE染色显示CHM组心肌纤维肿胀、横纹模糊、细胞间质成分增加而未见心肌坏死灶。大体标本观察未见大片心肌坏死。2、慢性冬眠心肌间质胶原纤维含量的变化及氯沙坦干预后的变化术后28天,PSR染色定性分析显示假手术组心肌间质、血管周围见零星分布的胶原纤维;CHM组心肌间质、血管周围可见大量胶原纤维,呈不规则网状或团块状;两种剂量氯沙坦组心肌间质、血管周围有少量胶原纤维。定量分析显示,与假手术组比较,CHM组ICVF明显增加（P<0.01）;与CHM组比较,两种剂量氯沙坦组ICVF明显降低（P<0.01）,且大剂量组明显低于小剂量组（P<0.05）。3、心肌间质Ⅰ型、Ⅲ型胶原纤维比例的变化及氯沙坦干预后的变化术后28天,偏振光显微镜下观察假手术组见少量Ⅰ型、Ⅲ型胶原纤维;CHM组黄红色双折光Ⅰ型胶原大量聚集,排列紊乱,少量绿色弱双折光Ⅲ型胶原,Ⅰ/Ⅲ胶原比例增高;两种剂量氯沙坦组Ⅰ型胶原较之CHM组明显减少,Ⅰ/Ⅲ胶原比例有所降低。半定量分析结果显示:与假手术组比较,CHM组PI/III明显增加（P< 0.01）;与CHM组比较,两种剂量氯沙坦组PI/III明显减少（P<0.01）,且大剂量组明显低于小剂量组（P<0.05）。4、心肌组织MMP-2、MMP-9、TIMP-2表达情况及氯沙坦干预后的变化术后28天,免疫组化及Western blot均显示CHM组术后MMP-2、MMP-9表达较假手术组明显升高,TIMP-2表达较假手术组明显降低。与CHM组比较,两种剂量氯沙坦组MMP-2、MMP-9表达明显降低,TIMP-2表达明显升高,且大剂量组改变程度高于小剂量组（P<0.05）。5、慢性冬眠心肌细胞凋亡及氯沙坦干预后的变化术后28天,与假手术组比较,CHM组心肌细胞Rapo显着增加（P<0.01）;与CHM组比较,两种剂量氯沙坦组心肌细胞Rapo显着降低（P<0.01）,且大剂量组明显低于小剂量组（P<0.05）。6、慢性冬眠心肌心功能的变化及氯沙坦干预后的变化术后28天,与假手术组比较,CHM组左心室整体收缩功能明显减退,表现为LVEF、LVFS显着降低（P<0.01）;与CHM组比较,两种剂量氯沙坦组LVEF、LVFS均明显改善,两种剂量组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论1.开胸不全结扎冠状动脉左前降支中段术,成功建立了慢性心肌冬眠模型。2.慢性心肌冬眠过程发生的心肌间质胶原重塑及心肌细胞凋亡是心室重塑及心功能减退的重要机制之一。3.慢性心肌冬眠过程中,氯沙坦干预可降低心肌细胞凋亡,抑制间质胶原纤维增生,减少心室重塑,进而可改善左室功能。
付作林[9]（2006）在《去甲肾上腺素在急性冬眠心肌中的释放和作用》文中研究指明目的：冬眠心肌是缺血性心肌病冉灌注治疗后心功能恢复的主要组成部分，再灌注前维持冬眠心肌的存在对于心肌的存活和再灌注后心功能的恢复都是非常重要的。目前认为，心肌冬眠是以心脏对心肌的缺血适应为特征的一种内源性保护机制，然而，触发和维持心肌冬眠的机制仍不清楚。去甲肾上腺素在心肌缺血过程中起了重要的作用，而它在心肌冬眠中的作用尚未明确。本实验拟采用离体鼠心急性冬眠模型，对急性心肌冬眠时心脏去甲肾上腺素的释放和去甲肾上腺素在急性心肌冬眠形成中的作用进行探讨。方法：建立大鼠离体心脏Langendorf等容收缩灌注模型，观察低灌120分钟过程中左心室内压力、心室率、冠脉流量、乳酸脱氢酶的漏出和心肌的超微结构改变，并观察了心脏去甲肾上腺素的自发性释放和电场刺激引起的释放及盐酸酪胺和去甲内咪嗪对释放的影响，同时观察了利血平或生理盐水处理或灌流液中加入去甲肾上腺素的心脏低灌120分钟时冠脉流量、乳酸脱氢酶漏出、心肌三磷酸腺苷、磷酸肌酸、糖原含量、Bcl-2、Bax表达产物的平均吸光度值、心肌细胞凋亡和心肌的超微结构，并用酪胺试验评价心脏交感神经末梢去甲肾上腺素的耗竭情况。结果：1、低灌开始后，冠脉流量、压力心率乘积和乳酸脱氢酶的漏出分别迅速降至低灌注前水平的8.5％、12.2％和23.7％，在随后120分钟的低灌过程中，以上指标没有进一步显着的降低或升高，复灌后冠脉流量和压力心率乘积迅速升高至低灌前水平；低灌120分钟后，心肌的超微结构未出现明显的改变，多巴酚丁胺引起心脏的收缩压明显增加（由20.5±3.9mmHg增加至65.0±10.2mmHg，P＜0.01）。2、低灌1分钟、120分钟和加入去甲丙咪嗪后冠脉流出液中去甲肾上腺素的含量之间差异没有显着性（P＞0.05）；电场刺激引起的心脏去甲肾上腺素的溢出在低灌120分钟时明显少于低灌前（P＜0.05），复灌30分钟时与低灌前相比无显着差异（P＞0.05）。3、酪胺试验证明利血平组心脏交感神经末梢的去甲肾上腺素被耗竭，低灌120分钟时利血平处理的大鼠心脏的左心窒压力心率乘积、冠脉流量、乳酸脱氢酶漏出、心肌三磷酸腺苷、磷酸肌酸、糖原含量、Bcl-2、Bax表达产物的平均吸光度值和凋亡心肌细胞数与被生理盐水处理者无明显差异（P＞0.05），但灌流液中加入去甲肾上腺素低灌120分钟时，心室压力心率乘积、冠脉流量、心肌三磷酸腺苷、磷酸肌酸、糖原含量、Bcl-2表达产物的平均吸光度值均明显降低，而乳酸脱氢酶的漏出、Bax表达产物的平均吸光度值和凋亡心肌细胞数明显增加（P＜0.05），心肌的超微结构明显破坏。结论：1、此模型符合急性心肌冬眠的特征，提示大鼠离体心脏的急性冬眠模型被成功建立。2、离体鼠心急性冬眠时不伴有心脏去甲肾上腺素白发性释放的明显增加，电场刺激引起的心脏去甲肾上腺素的释放明显减少，再灌注30分钟时电场刺激引起的心脏去甲肾上腺素的释放完全恢复，提示在急性心肌冬眠的形成过程中，心脏的交感神经可能也经历了一个冬眠的过程，再灌注治疗可能有利于心脏交感神经功能的恢复。3、外源性的去甲肾上腺素可以引起心功能进行性的降低，这可能与冠脉流量的降低、心肌细胞的坏死和凋亡有关，提示外源性的去甲肾上腺素可能是加速冬眠心肌结构和功能恶化的一个重要因素，而心脏本身的去甲肾上腺素可能并没有参与急性心肌冬眠的形成。
吴涛,励建安[10]（2006）在《心肌缺血动物模型制备方法》文中提出
二、慢性心肌冬眠动物模型的建立（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、慢性心肌冬眠动物模型的建立（论文提纲范文）
（1）UCP2通过调控NLRP3炎症小体通路改善脓毒症心肌损伤的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一章 引言 |
| 参考文献 |
| 第二章 血清解偶联蛋白2在脓毒症患者中的应用价值 |
| 背景 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 血清NLRP3水平对高危脓毒症患者的识别 |
| 背景 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第四章 UCP2通过抑制NLRP3炎症小体通路改善脓毒症心肌细胞损伤 |
| 背景 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第五章 抑制UCP2表达加重脓毒症小鼠心肌细胞的焦亡 |
| 背景 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 脓毒症心肌病的病理生理机制 |
| 参考文献 |
| 文献综述 重症超声与血流动力学治疗 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（2）慢性冬眠心肌与心源性猝死发生机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文对照表 |
| 1 引言 |
| 2 冬眠心肌动物模型的构建 |
| 2.1 实验材料与方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.2.0 动物的饲养 |
| 2.2.1 动物分组 |
| 2.2.2 实验动物模型的建立 |
| 2.2.3 超声心动图检测 |
| 2.2.4 取出心脏 |
| 2.2.5 心肌组织苏木精-伊红(HE)染色 |
| 2.2.6 心肌组织Masson染色 |
| 2.2.7 统计学分析方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 模型制备概况 |
| 2.3.2 超声心动图检查 |
| 2.3.3 心肌组织HE染色 |
| 2.3.4 心肌组织Masson染色 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 3 跨室壁三层细胞离子流差异表达在正常和冬眠心肌中的作用及其机制 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.2 研究方法 |
| 3.2.1 获取犬左室灌流组织块和用于组织学检测的左室心肌 |
| 3.2.2 获取单个左心室内中外三层心肌细胞 |
| 3.2.3 心肌细胞复钙 |
| 3.2.4 电生理记录 |
| 3.2.5 统计学分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 心肌细胞电生理记录结果 |
| 3.4 讨论 |
| 4 全文结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 跨室壁三层细胞离子流差异变化在正常和冬眠心肌中的作用及其机制 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间成果 |
（3）PEDF/PEDF-R诱导急性缺血心肌细胞进入“冬眠状态”的作用及相关机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 预转染目的基因的非开胸大鼠急性心肌梗死模型的建立 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 PEDF诱导急性心肌梗死大鼠心肌细胞进入“冬眠状态” |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 PEDF/PEDF-R诱导缺血心肌细胞进入“冬眠状态”的相关机制 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 文献综述 冬眠心肌的概念、检测及临床意义 |
| 参考文献 |
| 附录 缩略词 |
| 攻读学位期间成果及发表文章情况 |
| 致谢 |
（4）心肌缺血模型的制作方法研究进展（论文提纲范文）
| 1 急性心肌缺血模型 |
| 1.1 开胸手术法 |
| 1.1.1 冠脉结扎法 |
| 1.1.2 冠脉夹闭法 |
| 1.1.3 微量直流电刺激法 |
| 1.1.4 冠脉局部滴敷药物法 |
| 1.2 闭胸手术法 |
| 1.2.1 球囊堵塞法 |
| 1.2.2 血栓堵塞法 |
| 1.3 药物造模法 |
| 2 慢性心肌缺血模型 |
| 2.1 冠脉外慢性收缩法 |
| 2.2 冠脉内慢性狭窄法 |
| 2.2.1 冠脉栓塞法 |
| 2.2.2 冠脉内膜增殖法 |
| 2.3 冠脉缩窄法 |
| 2.4 高脂饮食法 |
| 3 可控心肌缺血模型 |
| 3.1 水囊压迫法 |
| 3.2 气囊压迫法 |
| 4 离体心肌缺血模型 |
| 5 结语 |
（5）犬急性心梗早期冠脉搭桥对冬眠心肌及室壁运动的影响（论文提纲范文）
| 一、摘要 |
| 中文论着摘要 |
| 英文论着摘要 |
| 二、英文缩略语 |
| 三、论文 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 四、本研究的创新性和自我评价 |
| 五、参考文献 |
| 六、附录 |
| 综述 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（7）慢性冠状动脉狭窄及慢性心肌冬眠模型的制作研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 实验动物分组 |
| 1.4 观察指标及方法 |
| 1.4.1 冠状动脉狭窄程度分析 |
| 1.4.2 超声心动图检查 |
| 1.4.2.1 左心室整体收缩功能测定 |
| 1.4.2.2 静息时室壁运动分析 |
| 1.4.2.3 腺苷负荷超声心动图实验 (ASE) 时室壁运动分析[4] |
| 1.4.2.4 室壁增厚率 (%WT) [5] |
| 1.5 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 冠状动脉造影 |
| 2.2 超声心动图检查 |
| 2.2.1 左心室整体收缩功能测定 |
| 2.2.2 静息时室壁运动分析 |
| 2.2.3 ASE时室壁运动分析 |
| 3 讨论 |
（8）家兔慢性心肌冬眠后心室重塑与氯沙坦干预的实验研究（论文提纲范文）
| 主要英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 正文 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
（9）去甲肾上腺素在急性冬眠心肌中的释放和作用（论文提纲范文）
| 一、中文摘要 |
| 二、英文摘要 |
| 三、前言 |
| 四、正文 |
| 第一部分 离体鼠心急性冬眠模型的建立 |
| 第二部分 离体鼠心急性冬眠时心脏去甲肾上腺素的释放 |
| 第三部分 去甲肾上腺素在急性心肌冬眠形成中的作用及作用机制 |
| 五、综述 |
| 六、致谢 |
| 七、附录 |
| 附录1 英文缩略词及英汉对照 |
| 附录1 攻读博士学位期间发表的论文 |
四、慢性心肌冬眠动物模型的建立（论文参考文献）
- [1]UCP2通过调控NLRP3炎症小体通路改善脓毒症心肌损伤的机制研究[D]. 黄薇. 北京协和医学院, 2021(02)
- [2]慢性冬眠心肌与心源性猝死发生机制的研究[D]. 高万里. 河南大学, 2020(03)
- [3]PEDF/PEDF-R诱导急性缺血心肌细胞进入“冬眠状态”的作用及相关机制研究[D]. 张宜乾. 南京医科大学, 2016(01)
- [4]心肌缺血模型的制作方法研究进展[J]. 卢志强,张艳军,崔广智,庄朋伟,张金保. 中国药理学通报, 2012(08)
- [5]犬急性心梗早期冠脉搭桥对冬眠心肌及室壁运动的影响[D]. 王亮. 中国医科大学, 2008(08)
- [6]家兔慢性冬眠心肌模型的建立[J]. 陈艳,孙伏清,钟慧颖,张飞龙,陈良龙. 中国组织工程研究与临床康复, 2007(34)
- [7]慢性冠状动脉狭窄及慢性心肌冬眠模型的制作研究[J]. 陈建华,林朝贵,李金国,张飞龙,陈良龙. 中国心血管病研究, 2007(07)
- [8]家兔慢性心肌冬眠后心室重塑与氯沙坦干预的实验研究[D]. 陈艳. 福建医科大学, 2007(01)
- [9]去甲肾上腺素在急性冬眠心肌中的释放和作用[D]. 付作林. 华中科技大学, 2006(02)
- [10]心肌缺血动物模型制备方法[J]. 吴涛,励建安. 中国康复医学杂志, 2006(02)