一、日本奥林巴斯光学工业公司的荧光测色装置（论文文献综述）
李尚志[1]（2021）在《基于多重动态共价键构建自愈合透明质酸水凝胶》文中提出组织损伤是影响生活质量的因素之一,传统配体移植治疗策略受限于配体来源、匹配度低、免疫反应的原因,而成功率低。具有三维网络结构的水凝胶被应用于组织工程,成为理想的组织修复材料。然而,常规水凝胶因不具有动态可逆的性质,无法在损伤后恢复其结构与性能,从而丧失其应有的功能。因此具有自愈合性能的水凝胶被开发出来,用于改善这一缺点。本论文的主要工作是以透明质酸为原料,利用“Schiff”点击反应,通过可逆亚胺键/酰腙键构建水凝胶网络,以期获得一种可快速自愈合、可注射的透明质酸自愈合水凝胶。为此,从以下三个方面展开工作:（1）醛基化透明质酸（AHA）/胱胺盐酸盐（Cys）水凝胶体系。在酸性环境下,通过AHA和Cys的亚胺交联制备了AHA/Cys水凝胶体系。由于动态可逆亚胺键的引入,这种水凝胶具有p H响应性和自愈合性,在室温下,水凝胶能在10min内实现100%的愈合。这种快速的自愈合性能也使得水凝胶网络在被破坏后能够快速重组。但是弱的交联方式也导致水凝胶不够稳定,在PBS 7.4水溶液中会快速水解,而影响其应用。（2）醛基化透明质酸（AHA）/3,3`-二硫代双（丙酰肼）（DTP）水凝胶体系。通过DTP的酰肼基团和AHA的醛基进行缩合,制备了AHA/DTP水凝胶。水凝胶在20s内成型,这使得水凝胶的体内植入成为可能。酰腙键和二硫键的存在也使得水凝胶具有快速自愈合性能（25℃,30min内,100%愈合）和多重响应性（pH和氧化还原响应性）。此外,水凝胶的稳定性也得到提升,在PBS 7.4水溶液中能够稳定存在10天以上。同时,水凝胶也对小鼠成纤维细胞（L929）和小鼠神经干细胞（NE-4C）表现出良好的细胞相容性。（3）醛基化透明质酸（AHA）/酰肼化透明质酸（DHA）水凝胶体系。以透明质酸为原料,分别对其进行醛基化改性和酰肼化改性,得到AHA和DHA,并利用不同的酰肼基团和醛基基团的配比,制备了AHA/DHA水凝胶。25℃环境中,水凝胶在酰腙键和二硫键的影响下,60min内能实现100%愈合,并且对p H和氧化还原表现出敏感性。水凝胶也在PBS 7.4水溶液中更加稳定,能稳定存在至少20天。此外,L929和NE-4C细胞的培养,也展示出水凝胶良好的细胞相容性。总之,一种基于“Schiff”反应的多重动态共价键策略被用于制备快速自愈合水凝胶。水凝胶具有高效的自愈合性能、良好细胞相容性、多重响应性和可注射性,有望在药物释放、伤口止血、软体机器人和神经修复等生物医学领域得到广泛应用。
陈清敏[2]（2020）在《反复冻融牛肉品质变化评价技术的适用性研究》文中指出冷冻肉是目前国际肉类贸易、国家战略储备和企业生产储备的重要形式之一[1]。随着我国牛肉消费量的提高,冷冻牛肉的品质也逐渐受到人们的关注。目前,冷冻牛肉在最终到达消费者手里前的长时间贮藏、长途运输或多次周转不可避免带来温度的大幅波动,导致反复冻融现象频频发生。许多研究表明反复冻融加速肉类品质的劣变,表现为气味、持水能力（WHC）、颜色、质构、氧化（脂质和蛋白质）等多个指标的恶化[2]。因此,对冷冻肉类食品品质的监控已经成为食品行业生产过程中的重要部分。然而,目前传统的肉类品质检测主要包括物理、化学、感官和生物评价方法。这些方法是重要的标准和推荐方法,但由于存在对样品的破坏性、繁琐、分析耗时长等特点,较难满足现代肉类工业的发展需求。开发无损、快速、精确和在线的肉品品质评价技术已经成为肉类工业发展的迫切需求。因此,本文主要研究光谱、核磁共振和电子鼻等技术在评价反复冻融牛肉品质变化的适用性,包含五部分的研究内容:1、利用拉曼光谱和电子自旋共振（ESR）技术表征反复冻融牛肉脂质氧化过程。ESR监测自由基变化的结果显示,随着反复冻融次数的增加,自由基信号产生的时间提前。同时,随着冻融次数的增加,自由基信号强度逐渐增强,说明脂质氧化程度越高。拉曼光谱结果显示,反复冻融过程中1655 cm–1处峰强度出现明显下降,主要涉及C=C双键伸缩振动ν（C=C）。同时,与脂质不饱和度相关的拉曼峰强度比值I1655/I1442（ν（C=C）/δ（CH2））和I1655/I1745（ν（C=C）/ν（C=O））,也随着反复冻融次数的增加而下降。最后,综合脂质氧化常规指标、ESR自由基信号强度值和拉曼光谱数据的相关性分析结果显示,拉曼数据与常规指标之间的相关性系数r介于-0.791到-0.928之间（P<0.01）,ESR数据和常规指标之间的相关性系数r介于0.826到0.914之间。说明利用拉曼光谱或ESR在表征反复冻融期间牛肉脂质氧化过程具有很好的潜力。2、利用傅里叶变换衰减全反射红外（ATR-FTIR）和拉曼光谱原位追踪反复冻融牛肉蛋白质氧化/变性过程。结果显示,随着牛肉反复冻融次数的增加,ATR-FTIR和拉曼光谱拟合定量的蛋白质二级结构组分中均发生α-螺旋含量减少,β-折叠含量增加的显着变化。此外,拉曼850 cm–1和830 cm–1处的峰强度比值表明冻融期间蛋白质的酪氨酸残基暴露于极性环境中。相关性分析结果表明,蛋白质的羰基含量、Ca2+-ATP酶活性和肌球蛋白变性热焓（ΔH1）与蛋白质二级结构变化具有很好的相关性。尤其是ATR-FTIR的β-折叠含量和拉曼光谱的β-折叠/α-螺旋比值与ΔH1分别呈高度负相关（r分别为-0.841和-0.906）。说明利用ATR-FTIR和拉曼光谱拟合计算的蛋白质二级结构含量变化可以作为原位追踪肌球蛋白热性质的良好指标。3、利用拉曼和傅里叶近红外（FT-NIR）光谱预测反复冻融牛肉的质构品质属性。结果显示,基于偏最小二乘（PLS）算法模型,利用拉曼光谱能够获得精确度很好的反复冻融牛肉嫩度（RP2=0.81,RMSEP=2.57 N）、咀嚼性（RP2=0.80,RMSEP=942 g.s）、紧实度（RP2=0.81,RMSEP=11.5 g）和坚实度（RP2=0.82,RMSEP=12.8 g）质构预测模型。FT-NIR光谱则对反复冻融牛肉咀嚼性（RP2=0.73,RMSEP=1110 g.s）、紧实度（RP2=0.81,RMSEP=12.6 g）和坚实度（RP2=0.74,RMSEP=13.2 g）的预测有较好的精确度。研究发现,拉曼光谱对牛肉质构预测模型的变量贡献主要位于1000 cm–1、1420cm–1和1550–1680 cm–1区域。这些区域涉及反复冻融期间蛋白质二级结构和侧链氨基酸残基极性微环境的变化。FT-NIR光谱的主要变量贡献位于6600–7700 cm–1和8500–9000cm–1区域,显示了反复冻融期间水吸收、蛋白质和脂质成分变化对牛肉质构属性具有重要作用。4、采用拉曼光谱和核磁共振技术评价反复冻融牛肉颜色和水分相关属性的研究。结果显示,基于PLS模型拉曼光谱在预测反复冻融牛肉的颜色L*值（R2P=0.72,RMSEP=12.72）和解冻损失（RP2=0.70,RMSEP=4.25%）上表现良好。对颜色a*值、颜色b*值和水分含量预测效果一般。研究发现,蛋白质酰胺I带(1600–1700 cm–1)变化对颜色a*值和解冻损失的预测贡献较大,说明反复冻融期间蛋白质二级结构变化对肉的红度和解冻损失起重要影响。此外,低场核磁共振技术监测反复冻融牛肉微观结构水分迁移和分布变化。结果显示,经过7次反复冻融循环后,横向弛豫时间T21发现显着降低（P<0.05）,而水分的横向弛豫时间T2b和T22并未发现规律性变化。相关性结果显示,T21这部分水与解冻损失关联性很强（r=-0.775,P<0.0001）。说明反复冻融促进T21部分水向自由水转化并最终以汁液形式损失掉。结合上述蛋白质振动信息在解冻损失预测上的重要贡献,推测导致该结果的原因与反复冻融期间肌原纤维蛋白网络被破坏和蛋白质变性从而导致蛋白质结合水的能力下降有关。5、采用电子鼻技术辨别新鲜/反复冻融牛肉的研究。电子鼻的主成分分析和判别因子分析结果显示,新鲜牛肉和反复冻融牛肉之间存在明显差异,但是不同反复冻融循环组之间的样品辨别较为困难。常规气质色谱分析结果显示,新鲜和反复冻融牛肉存在挥发性有机物种类和含量上的差异。最后,冻融循环后牛肉的挥发性盐基氮（TVB-N）值和菌落总数均变化较小且处于安全限值内,基于与硫代巴比妥酸值的高相关性（r=0.821）,己醛可被视为反复冻融期间脂质氧化后牛肉气味劣变的重要挥发性标志物。综上所述,本研究的结果表明,拉曼光谱在监测反复冻融牛肉脂质分子振动信息、蛋白质二级结构和侧链氨基酸变化表现出很好的敏感性,对质构属性预测也表现出很好的预测精确度,但对于反复冻融牛肉颜色和水分含量的预测效果一般。核磁共振技术可以补充拉曼光谱在水分相关属性研究上的相对劣势,表现出对反复冻融期间牛肉水分迁移和分布变化很好的敏感性。红外光谱对反复冻融期间蛋白质二级结构变化也很敏感。同时,近红外光谱能在质构属性的预测上提供反复冻融期间水和脂质等肌肉组分的贡献。此外,整个冻融循环的解冻过程是在4℃冷藏条件下进行,经过7次冻融后牛肉的TVB-N值和菌落总数仍处于安全限值内,电子鼻依然表现出对新鲜/反复冻融牛肉一定的区别能力。最后,关于拉曼光谱、红外光谱、核磁共振和电子鼻等技术的研究结果,为未来这些技术在评价冷冻肉品质方面提供理论和应用性的基础数据借鉴。
杨池玉[3]（2020）在《中国高温高压合成钻石的电学与磁学性质研究》文中进行了进一步梳理高温高压合成钻石（简称HPHT合成钻石）是具有优异物理性质的半导体材料和信号探测材料,在高新科技领域具有极大的应用潜力。但宝石学对HPHT合成钻石展开的研究较为局限,对其电学、磁学性质的关注基本为零,相关数据信息缺失。为此本文对国产HPHT合成钻石的电学和磁学性质进行了系统完整的研究,弥补了相关内容的空白,并为其实验室检测提供了新思路。本次研究选用具有代表性的不同颜色的国产HPHT合成钻石,利用超景深显微镜、激光共聚焦显微镜、偏光显微镜、体视显微镜对HPHT合成钻石的内外部特征进行了观察;利用X射线荧光能谱、光致发光光谱、霍尔效应测试系统、傅里叶变换显微红外光谱等测试技术,对HPHT合成钻石中的包裹体成分、晶格缺陷、杂质元素的含量和分布及其对导电性的影响等进行了系统研究;并利用超导量子干涉仪磁学测量系统对钻石的磁学性质进行了定量分析,得出以下结论:宝石级钻石的导电性主要取决于硼元素的含量及分布特征,无色HPHT合成钻石中硼元素的含量为00.1ppm,随着硼元素浓度的增高,钻石的导电能力增强。硼元素在钻石晶格中优先占据（111）晶面,且富集在表面,硼元素的分布分区导致了导电性的不均一。无色HPHT合成钻石、天然钻石、CVD合成钻石的电阻率分别为:2.7×105、4.17×1012、1.9×1012Ω·cm,无色HPHT合成钻石的导电性明显优于天然钻石和CVD合成钻石,可作为鉴定HPHT合成钻石的依据。由于含有金属触媒残余,HPHT合成钻石显示铁磁性,且净度级别较差的能够被手持磁铁吸引。天然钻石、CVD、HPHT合成钻石的磁化率均为3.403.80×10-8。天然钻石和CVD合成钻石显示抗磁性,无磁滞现象。HPHT合成钻石的磁性特征受内部磁性包裹体影响,净度级别为VVS以上的HPHT合成钻石显示抗磁性,VS及以下则显示铁磁性。随着净度级别降低,其饱和磁化强度增大,可达到10-1 emu/g;矫顽磁场增高,可达到102Oe;剩余磁化强度也增大,可达到10-2emu/g。但不同净度级别的HPHT合成钻石均具有磁滞现象,根据是否具有磁滞现象能有效区分HPHT合成钻石和天然钻石、CVD合成钻石。
李伟华[4]（2020）在《高速缝纫线无水硅蜡整理剂研究》文中认为随着缝纫机机速的快速提升,常规涤纶缝纫线因纤维熔融阻碍针眼和断头率增多的问题越来越突出,无法满足高速缝纫的要求。添加后整理润滑油剂是提高缝纫线耐摩擦性能的有效方法,而硅蜡整理剂是目前缝纫线领域公认的有效改善缝纫线品质的后整理剂。硅蜡整理剂具有优异的润滑效果、较低的上油率和较小的渗油量等优点,然而新型的高品质硅蜡整理剂基本依赖进口、价格昂贵。为此,本课题以表面活性剂和有机概念图的相关知识为基础,自主研制了具有良好润滑性且与涤纶基底具有高结合牢度的硅蜡整理剂产品,并深入研究表面活性剂在硅蜡油-油体系中的作用机理以及提高硅蜡膜在涤纶基底上结合作用的内在规律。主要研究工作和结果如下:首先,研究了硅油和石蜡的基本理化性能,包括硅油的生理惰性、热屏蔽性能和润滑性能,石蜡的成膜性和润滑性能。通过对不同熔点石蜡与不同粘度硅油的相容度研究制备出在最大相容度下的无水硅蜡乳液二元体系,并研究了二元体系的贮存稳定性以及硅蜡膜与涤纶基底的结合状况。结果表明:在一定范围内,固体石蜡的号数越低,分子量越小,和二甲基硅油的结合点越多,即与二甲基硅油的最大相容度越高;二甲基硅油的粘度越低,分子链越短,单位量二甲基硅油与石蜡的结合量也越大,即与固体石蜡的最大相容度越高;在不加表面活性剂的情况下,硅蜡二元体系在贮存稳定性、成膜性和硅蜡膜与基底的结合牢度等指标均较差,不能达到应用要求。继而,通过对无水硅蜡乳液所需各组分的优选,以及各组分配比和乳化工艺的研究,制备出具有优异的贮存稳定性和加热稳定性及低粒度的无水硅蜡乳液,并研究了表面活性剂在体系中的作用机理和模型。结果表明:以R1和R2组成的复合表面活性剂R适用于硅油/石蜡无水乳化体系,其中R2作为主体,它具备一端亲硅油一端亲石蜡的结构,而R1能插入到在硅油/石蜡界面上较紧密排布的R2分子之间,起到提高界面膜强度的作用,即通过R1和R2的协同作用提高无水硅蜡乳化体系稳定性;优化的高温型硅蜡整理剂配方和制备工艺为:1000CS二甲基硅油89%,46号固体石蜡5.5%,复合乳化剂R5.5%;采用“剂在油中法”进行乳化,乳化温度80℃,乳化速度4000r/min,乳化时间20min;优化的常温型硅蜡整理剂配方和制备工艺为:500CS二甲基硅油90.8%,高粘度液体石蜡3.5%,58号固体石蜡1.2%,复合表面活性剂R4.5%;采用“剂在油中法”进行乳化,乳化分两次进行,第一次乳化剪切速度为4000r/min,乳化温度80℃,乳化时间40min,第二次乳化剪切速度为1500r/min,乳化时间20min,在第二次剪切的同时以水浴降温;在上述配方和工艺下制备的高温型和常温型无水硅蜡乳液的贮存稳定性好,应用效果均明显优于常规硅油整理剂。最后,研究了经优化配方和工艺下自制无水硅蜡体系整理缝纫线的性能,包括摩擦系数、纱线毛羽系数和缝纫线色变情况等,并对硅蜡膜与涤纶基底间结合作用的内在规律做了分析探讨。结果表明:在优化工艺下制得的硅蜡整理剂（高温型和常温型）均能显着提高涤纶缝纫线的耐摩擦性能,减少毛羽,降低断头率,综合性能与目标产品性能基本一致。硅蜡多元体系因其低界面张力以及富含酯基、羧基等与涤纶纤维有较好结构相似性的基团,使其能够“植入”于涤纶基底,增加硅蜡膜与基底的接触面积,并提高膜层与纤维间的分子间作用力,进而提高硅蜡膜与涤纶基底的结合牢度。
林惠敏[5]（2018）在《小鼠次级运动皮层长程投射类神经元解剖学形态的研究》文中认为大脑是高级神经活动的物质基础,主导体内一切活动过程。大脑的损伤或结构、功能上的异常会对机体运作产生不同的影响。了解大脑的解剖学结构及生理功能对于脑损伤疾病的治疗有着重要的意义。次级运动皮层位于大脑前部背外侧,参与大脑的认知和执行过程,例如:决策、目标导向行为、技能学习和空间记忆。次级运动皮层的损伤或者失活会导致运动和运动学习过程产生障碍,但并不会影响机体的基本运动机能。现今的大多数研究集中在次级运动皮层与不同脑区间单一功能的研究。而在次级运动皮层整体投射研究方面,缺乏单神经元水平神经元形态和投影模式的描述。本论文致力于研究次级运动皮层单神经元的解剖学结构,从单神经元层面揭示该区域神经元的形态特性。本论文选取Cre依赖的重组腺相关病毒在小鼠次级运动皮层中神经元的稀疏高亮度标记。在全脑图像获取上,对比光透明处理和fMOST成像两种方式获取的数据质量,选用fMOST系统用于后续次级运动皮层神经元的形态获取。至此,确定了以重组腺相关病毒进行神经元标记,以fMOST获取全脑数据,手动追踪和重建神经元的解剖学形态的实验流程。利用以上实验方法,获取了一套次级运动皮层标记的高分辨全脑数据集（分辨率:0.2×0.2×1μm）。在该套数据中,选取分别位于次级运动皮层第5层、次级运动皮层第2/3层、前边缘皮层第2/3层以及内侧轨道皮层第2/3层的总共38个神经元进行追踪和重建。并进一步对获得的不同区域、不同层神经元的投射组和纤维长度进行分析。主要发现如下:（1）本论文重建的第2/3层神经元的轴突长度多集中在60～80mm,第5层连合投射类神经元长度多大于200mm,重建出的最长轴突为318.43mm,这是迄今为止文献报告过的最长的轴突长度。（2）次级运动皮层及其周边区域如:前边缘皮层和内侧轨道皮层中第2/3层中皮质内投射神经元的投射模式均不相同。但第2/3层神经元的轴突及树突长度相似,可见其信号输入、输出量大致相似,但参与不同大脑活动。从侧面印证次级运动皮层功能上的复杂性。（3）次级运动皮层第5层联合投射类神经元其轴突长度是第2/3层神经元的3～4倍。所有神经元在纹状体区域均有很密集的轴突投射,这可能与次级运动皮层在顺序学习上的功能相关。虽然第5层的神经元在纹状体均有很强投射,但在其他大脑皮层间的投射模式却是相差甚远。本论文重建的所有神经元中并不存在任何两个投射完全相同的神经元。本论文基于全脑数据获得次级运动皮层及其临近区域38个锥体神经元的完整形态,并分析这些神经元的投射模式。这是首次次级运动皮层中单神经元完整形态的重建。本论文揭示了相同脑区单个神经元投射模式的多样性以及该区域神经元投射的复杂性,有助于进一步了解次级运动皮层在单神经元水平的连接方式,为进一步探索次级运动皮层的功能奠定坚实的基础。
韦佼君[6]（2018）在《聚合物短纤维作为可注射药物载体和细胞球培养支架的研究》文中进行了进一步梳理药物筛选和组织修复是生物医学领域中的重要研究课题。在药物筛选方面,体外检测药物的药效和毒性是药物进入临床研究前的一个重要环节。细胞二维（2D）培养是目前常用的体外药物筛选模型,但通过该模型得到的检测结果与动物实验结果,甚至是临床实际效果相差甚远。在组织修复领域,通常采用器官移植的方式来实现组织或器官修复,而大部分替代的组织器官主要来源于器官捐献、自身组织或动物组织等。然而采用器官移植的方法修复组织,常常受限于器官供体的数量有限,移植后与宿主发生免疫排斥反应以及使用自身组织修复容易造成机体的二次伤害等。因此构建具有与组织器官相似功能结构的类组织,则能够为药物筛选提供理想的体外模型以及替代器官移植实现组织修复。因此本论文旨在一方面以短纤维作为支架培养肝细胞球体、肿瘤细胞球体以及间充质干细胞球体,用于药物筛选、类肿瘤组织模拟、软骨修复和治疗关节炎,另一方面以可注射短纤维作为药物控释载体通过瘤内注射的方式治疗肿瘤,并且实现药物的局部缓释。建立一种可靠的,肝细胞球状体大小可控的以及可适用于高通量筛选的体外肝模型用于药物筛选仍存在巨大的挑战挑战性。本论文设计将短纤维作为支架,用于制备尺寸可控的,且具有肝特异性功能和表型的肝细胞球体。短纤维的长度、半乳糖和RGD的接枝密度能够调控细胞球体的大小及功能,长度为50 μm、PSMA混纺比例为95%、半乳糖和RGD接枝密度分别为135.7±4.5 nmol/mg和14.8±0.5 pmol/mg的短纤维培养得到的肝细胞球体具有最佳的肝特异性功能表达。短纤维分布在整个细胞球体中,与肝细胞紧密地相互作用从而形成较为致密的细胞球体。与不含支架的肝细胞球体相比,在对五种药物（甲苯磺丁脲、S-华法林、咪达唑仑、睾酮和对乙酰氨基酚）代谢清除率的考察过程中,含短纤维的细胞球体作为药物模型具有更高的代谢清除率,能够更好地预测体内药物清除率,其体内体外相关值（R2）为0.886。此外,这些肝细胞球体的药物代谢能力还表现在对药物代谢酶的诱导剂和抑制剂具有高度敏感,并且在20天的培养过程中一直保持对药物的响应性,为确定药物-药物的相互作用提供了一种有效的体外模型。因此,通过与短纤维共培养得到的肝细胞球体是一种能够在体外长时间维持肝细胞功能的简便操作方法,可推广至传统的多孔板和微芯片设备中培养,后用于高通量药物筛选。肝脏能够调节葡萄糖代谢和脂代谢。利用半乳糖修饰的PSMA/PS短纤维（gSF）作为支架分别与小鼠原代肝细胞（rPH）和肝癌细胞系（HepG2）共培养获得肝细胞球体模拟肝组织用于糖脂代谢的研究。与HepG2细胞球体相比,rPH细胞球体在葡萄糖消耗、糖原合成、糖异生、对胰岛素和胰高血糖素等葡萄糖调节激素的敏感性方面,表现出较强的葡萄糖代谢能力。HepG2细胞球体则显示出比rPH细胞球体更强的胆固醇和甘油三酯合成水平。通过对磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）和腺苷5’-单磷酸激活的蛋白激酶（AMPK）的活性表征,验证了上述实验结果。采用该模型研究药物的敏感性,含半乳糖修饰的短纤维肝细胞球体对升血糖药物（地塞米松）、降血糖药物（二甲双胍）、胰岛素增敏剂（吡格列酮）以及降脂药物（二甲双胍和洛伐他汀）均表现出较好的响应性。因此rPH和HepG2细胞球体可分别用作体外葡萄糖和脂质代谢研究模型,并且可用于筛选代谢紊乱疾病（如糖尿病和肥胖症等）的治疗药物。在全身性给药后,只有一小部分药物进入肿瘤,有许多障碍因素阻止药物向肿瘤内渗透。为克服这些障碍,通过在瘤内注射含抗癌药物的载药短纤维,使药物在靶点部位积累,从而达到治疗效果。制备了 5（FF-5）、20（FF-20）和50 μm（FF-50）的载HCPT短纤维,分散到2%海藻酸钠溶液中,注射性好。FF-5、FF-20和FF-50的药物释放曲线趋势相似,但纤维长度越长药物释放速度越慢。体外细胞毒性实验表明,FF-5和FF-20比FF-50会引起更高的细胞毒性和细胞凋亡率。短纤维瘤内注射小鼠H22皮下肿瘤后,长度越长的短纤维在瘤内的滞留效果更好。然而,载HCPT的纤维膜虽然在瘤内的滞留效果最好,但其抗肿瘤活性较低。与FF-5和FF-50相比,FF-20在瘤内释放HCPT在肿瘤内具有最佳的空间分布效果,这对动物存活、肿瘤生长抑制和肿瘤细胞凋亡诱导等具有显着的影响。上述结果表明肿瘤内注射载药短纤维是一种有效的治疗实体肿瘤的策略,通过调控载药短纤维在肿瘤内的滞留效果以及释放药物在肿瘤组织内的空间分布,来降低药物的全身毒性并提升治疗效果。为构建类肿瘤模型,以聚乳酸-聚乙二醇共聚物/聚环氧乙烷（PELA/PEO）混纺短纤维作为支架,携载促乳腺癌细胞系（MCF-7）增殖的17β-雌二醇（E2）药物,与细胞共培养构建MCF-7球体。PEO的含量和E2载药量会影响药物的释放速度、细胞的活力、增殖及粘附。结果表明PEO添加比例为3%、E2载药量0.01%的短纤维与MCF-7共培养6天后,即可得到直径为250 μm的成熟类恶性肿瘤细胞球体。该细胞球体在结构和因子表达上与恶性肿瘤类似,即中心细胞生长密集、内部缺氧,与恶性肿瘤的相似性较高;通过表征E-钙粘蛋白表达、恶性因子分泌、上皮-间充质转化相关基因表达等,证明该细胞球体具有恶性侵袭转移的倾向;癌症干细胞（CSC）表型基因表达和体内肿瘤构建表明该细胞球体具有较强的致瘤性。所有结果表明MCF-7球体与恶性实体瘤类似,因此可以作为体外类肿瘤模型用于新药的研发和肿瘤疾病的研究。采用组织工程的方法修复软骨缺损,将载有软骨诱导药物kartogenin（KGN）的PELA短纤维作为支架与骨髓间充质干细胞（BMSC）共培养得到有软骨分化潜能的细胞球体,为避免细胞流失,以可注射水凝胶包裹BMSC球体填充软骨缺损部位。结果表明KGN的载药浓度、水凝胶的机械性能和注射过程会影响BMSC球体的活力和分化能力,其中通过调节凝胶的浓度、反应比例以及在凝胶中添加短纤维可有效调控凝胶的机械强度。最终凝胶浓度为3%,巯基/丙烯双键（HS/Acr）反应比例为1/1.2,短纤维掺杂浓度为1%,以及KGN短纤维载药量为0.1%的复合支架在体外诱导BMSC分化成软骨细胞的效果最理想;体内缺损软骨修复结果表明,该复合凝胶携载BMSC球体治疗6周后缺损部位被大量的成熟新生软骨填充,12周后缺损部位得到了完全的修复。随后将该组织工程软骨与抗关节炎药物塞来昔布（CLX）结合并治疗骨关节炎,将CLX载入增强凝胶力学强度的短纤维上,调节药物浓度对BMSC无毒副作用;结果表明二者的协同作用能够较大程度地抑制关节炎的发展,12周后关节炎症状缓解并且病变引起的软骨缺损得到了修复。综上所述,本论文以短纤维作为可注射的药物控释载体用于瘤内注射治疗皮下肿瘤;作为体外三维培养细胞球体的支架,分别构建了肝脏、肿瘤以及软骨相关的细胞球体,可有效用于药物代谢模型、降糖降脂药物的筛选、类肿瘤的构建、软骨组织的修复和关节炎治疗;研究结果为体外药物筛选模型、器官修复和疾病治疗等提供了新思路和手段。
袁小川[7]（2018）在《CLARITY技术构建肝脏透明化模型及技术相关应用》文中认为目的:探索一种基于CLARITY技术的快速肝组织透明化手段,通过条件优化对肝硬化动物模型进行免疫荧光标记三维成像,并基于该技术开发一种石蜡切片的抗体洗脱术。方法:（1）水凝胶灌注大鼠,取出肝脏待水凝胶凝固后切为1mm薄片。切片随机分为两组,对照组采用常规被动脂质清除法处理,实验组置于特制电泳装置中,在外加电场条件下洗涤脂质,通过提高电泳温度并量化组织透明度,探索最优肝透明化条件。（2）使用肝透明优化条件对DEN诱导的大鼠肝硬化模型进行脂质清除,利用多种大鼠器官组织探索免疫荧光标记成像条件,对大鼠肝硬化模型组织实施激光共聚焦显微镜扫描三维成像。（3）将CLARITY技术的水凝胶固定、脂质清除和抗体洗脱特性应用于石蜡切片,探索石蜡切片的透明化方法的最佳条件,进行抗体洗脱,并与常规酸洗脱进行对比。通过对比免疫荧光标记切片洗脱前后荧光信号变化及积分荧光强度测定来确定抗体洗脱效果。结果:（1）实验组在12V电压下37℃电泳48h时肝切片相对透明度达到最高并保持至96h,随后相对透明度开始下降,而在48h电泳清除脂质后提高温度继续电泳48h,肝组织切片相对透明度可进一步提高且对照组脂质清除速度明显低于实验组。（2）通过组织透明化处理成功标记了大鼠肾和脑中的正常的组织结构（基底膜和星形胶质细胞）的空间分布情况。大鼠肝硬化模型通过病理检验证明诱导成功,激光共聚焦显微镜扫描三维成像成功显示了透明化肝硬化组织的血管、假小叶和肝细胞在空间结构上的分布和关系。（3）4um的组织切片、水凝胶固定加上阳离子防脱载玻片的使用可以增强石蜡切片对洗脱的耐受。经过透明化步骤处理的石蜡切片使用4%SDS在60℃条件下可以获得最佳的抗体洗脱效果,效果显着优于常规酸洗脱方式,即洗脱后切片平均积分荧光强度下降最多,且抗体复染效果良好。结论:肝组织切片在12V电压下37℃电泳48h再辅以52℃电泳48h可以实现较快速的脂质清除。使用肝快速透明化手段处理DEN诱导的大鼠肝硬化组织,通过激光共聚焦显微镜扫描成像可以显示肝硬化组织的高分辨精细结构在三维空间的位置关系和分布。CLARITY技术与石蜡切片具有良好的吻合性,对石蜡切片进行透明化处理可以使切片经过免疫荧光标记后再进行反复的抗体洗脱复染,且能保护组织的形态结构和抗原结合位点不发生改变。
肖兵[8]（2015）在《MiR-566调控VHL影响人脑胶质瘤细胞VEGF表达的体内外研究》文中研究说明人脑胶质母细胞瘤是中枢神经系统中常见的恶性肿瘤之一,它具有高度血管化的特征,患者中位生存期一般不超过12个月。尽管人类在癌症的生物学研究和治疗方面取得了很大的进展,但是,我们对胶质瘤这种恶性程度较高的肿瘤的研究尚未深入,其确切的发病机制仍然不清楚,临床上治疗以手术切除为主,术后再加以放化疗以及免疫治疗等,总体治疗效果较差,肿瘤复发率高。因此,探讨胶质母细胞瘤发生发展的分子机制具有十分重要的意义。Mi RN A（Micro RNA）是一类非编码RN A,它是在真核生物中发现的,具有调控功能,其大小长约2025个核苷酸【1】,它参与多种调节途径,例如发育过程、造血过程、细胞增殖与凋亡等等【2、3】。研究表明,mi RNA与胶质瘤的发生发展密切相关,它可通过调控其靶基因参与的信号通路进而在胶质瘤的发生和发展中发挥致癌或者抑癌的作用【1】,mi RNA可作为今后胶质瘤分子治疗方向上一个新的突破点。VHL（Von Hippel-Lindau）基因最早是由Von Hippel【4】及Linda【5】发现,是一种重要的肿瘤抑制基因【6、7】,定位于3p2526区【7】,编码213个氨基酸的蛋白质,称为VHL蛋白,VHL基因突变与多种肿瘤的发生相关,例如肾细胞癌、嗜铬细胞瘤、胰腺癌、中枢神经系统血管瘤等【8】,VHL与胶质瘤之间的关系主要为VHL可参与HIF-1α泛素化降解的过程【9、10】进而影响VEGF（vascular endothelial growth factor）的表达,而VEGF在胶质瘤的发生发展过程中是最为重要的血管形成因子【11】。VHL除了调节HIF-α水平和抗血管生成外,还具有调节细胞凋亡【12】、细胞周期【13】、细胞外基质的作用【14】。我课题组前期研究工作提示VHL基因在胶质母细胞瘤中表达降低,并与患者生存期存在负相关（尚未发表数据）,在对胶质瘤患者的研究中发现,mi R-566与胶质瘤发生、恶性程度、愈后密切相关【9】,生物信息学预测VHL基因受mi R-566调控（www.targetscan.org）。因此,在mi R-566、VHL和VEGF之间可能存在某种调控关系,该种调控关系对胶质瘤的发生发展发挥重要的作用。本研究将探讨mi R-566调控VHL对人脑胶质瘤中VEGF表达的影响,探寻新的有可能成为胶质瘤治疗的靶点,能够为胶质瘤的综合治疗提供更新的有效的方法和思路。本课题研究内容将分为以下两个部分:第一部分为mi RNA-566在人脑胶质瘤细胞中调控VHL影响VEGF表达的研究。我们首先用表达反义mi R-566的慢病毒（lenti-AS-mi R-566）侵染U87胶质瘤细胞,采用Real time PCR检测mi RNA-566及VEGF m RNA的表达,采用Western blot检测VHL、HIF-1α、VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达。其次用VHL表达质粒转染U87胶质瘤细胞,Western blot检测VHL、HIF-1α、VEGF蛋白的表达情况。最后采用荧光素酶报告基因实验验证mi R-566与VHL之间的调控关系。结果显示lenti-AS-mi R-566处理组U87细胞中mi RNA-566、VEGF m RNA和HIF-1α、VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白的表达显着降低,VHL蛋白表达增高;VHL表达质粒转染U87胶质瘤细胞后,VHL蛋白的表达增高;HIF-1α和VEGF蛋白的表达下降,荧光素酶报告基因实验结果显示VHL是mi R-566的调控靶点,表明mi RNA-566在U87胶质瘤细胞中可直接调控VHL基因影响HIF-1α的表达,进而影响胶质瘤细胞中VEGF的表达,并且对胶质瘤细胞的侵袭性产生影响。第二部分为构建裸鼠颅内模型,进一步验证mi RNA-566在体内调控VHL影响VEGF的表达。用lenti-AS-mi R-566处理后的U87细胞建立裸鼠颅内模型,利用荧光原位杂交法（FISH）和免疫组织化学染色法对颅内模型组织切片中mi R-566和相关蛋白表达进行检测。结果显示组织切片中,荧光原位杂交证实处理组mi R-566表达减少,免疫组织化学染色证实处理组VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达降低,VHL蛋白表达增高,再次验证mi RNA-566可直接调控VHL基因的表达进而影响胶质瘤中VEGF的表达,并影响胶质瘤的侵袭性。结论:通过荧光素酶实验和蛋白免疫印迹检测实验,我们证实了VHL基因是mi R-566的靶基因,通过体内和体外实验的研究,我们发现抑制mi R-566的表达可以使HIF-1α、VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白的表达显着降低,VHL蛋白表达增高;上调VHL的表达,可以抑制HIF-1α和VEGF的表达。这些数据表明:mi R-566可通过调控VHL基因进而影响VEGF的表达,并对胶质瘤细胞的侵袭性产生影响。
查冬青[9]（2013）在《Nephrin表达在PINCH-1-ILK-α-parvin复合物介导足细胞粘附改变中的作用及分子机制》文中指出近年来,对蛋白尿产生及发展机制的深入研究发现,足细胞结构和功能的异常可能是导致蛋白尿的主要原因。Nephrin是定位于足突裂孔膜的结构分子和信号分子,在维持裂孔膜结构完整性和足细胞功能方面起关键作用。Nephrin异常及其磷酸化改变与蛋白尿形成、足突融合和细胞丢失密切相关,是足细胞损伤的重要机制之一。但Nephrin异常是否影响足细胞骨架改变、足细胞与基底膜的粘附以及两者间是否存在某种信号机制相互作用,目前尚不清楚。PINCH-1-ILK-α-parvin （PIP）复合物是由PINCH-1、ILK、α-parvin三种分子所组成的异聚体,是哺乳动物黏着斑的主要成份。PIP复合物是连接细胞与细胞外基质的重要结构。它也可连接整合素和肌动蛋白骨架,参与细胞骨架定位,调节细胞与细胞外基质粘附的信号转导,从而在细胞粘附、伸展、存活等方面起着重要作用,尤其是在肾小球足细胞结构改变以及与基底膜粘附中尤为重要。但是,PIP复合物受哪些病理生理信号的调节,引起足细胞骨架改变、足突融合和粘附异常,目前知之甚少。本文旨在探讨nephrin表达改变对足细胞骨架、足细胞伸展及粘附能力的影响及其分子机制。我们首先建立嘌呤霉素氨基核苷肾病大鼠模型,检测在蛋白尿动物模型中nephrin/磷酸化nephrin、PIP复合物、F-actin的表达变化。结果发现,大鼠嘌呤霉素氨基核苷肾病模型类似于人类微小病变型肾病。在大鼠嘌呤霉素氨基核苷肾病模型中,PIP复合物在肾小球中表达异常,其改变与尿蛋白的改变一致,PIP复合物表达减少可能与足突融合、细胞骨架改变及蛋白尿产生相关,PIP复合物相互作用的改变可能与nephrin磷酸化调节有关。为证实PIP复合物在足细胞骨架改变、足细胞粘附中的作用,我们在体外培养的条件永生性小鼠足细胞中,采用PINCH-1siRNA下调PIP复合物的表达,观察PIP复合物改变对足细胞骨架、足细胞伸展及粘附的影响,结果发现PIP复合物改变可导致足细胞骨架紊乱重组、足细胞伸展及粘附性降低。但PIP复合物改变不影响nephrin及磷酸化nephrin表达。为进一步证实nephrin表达在PIP复合物介导足细胞粘附改变中的作用及机制,我们在体外培养小鼠足细胞中采用nephrin siRNA以及Src激酶抑制剂（PP2）抑制nephrin及其磷酸化的表达,观察nephrin及其磷酸化nephrin改变对PIP复合物、足细胞骨架、足细胞粘附的影响。结果显示抑制nephrin或磷酸化nephrin可降低PIP复合物表达、足细胞骨架发生紊乱重组、足细胞伸展及粘附性降低。综上所述,nephrin表达异常可导致足细胞骨架改变、足细胞伸展及粘附功能降低,从而影响足突与基底膜的粘附。且nephrin在足细胞骨架、足细胞伸展及粘附中的作用,至少部分与nephrin磷酸化调节PIP复合物有关。第一部分Nephrin、磷酸化nephrin、PINCH-1-ILK-α-parvin（PIP）复合物在大鼠嘌呤霉素氨基核苷肾病模型中的表达目的研究嘌呤霉素氨基核苷肾病（puromycin aminonucleoside nephropathy; PAN）大鼠模型中nephrin、磷酸化nephrin、PIP复合物的表达,评价其表达与蛋白尿及足细胞损伤的关系。方法36只SPF级雄性SD大鼠,体重120-140g,随机分为对照组（n=6）和模型组（n=30。14,7,14,28d五个时间点,每组6只）。模型组一次性腹腔注射嘌呤霉素氨基核苷（puromycin aminonucleoside, PA,15mg/100g）,分别于注射后第1,4,7,14,28天处死大鼠。对照组予等体积生理盐水腹腔注射。各组大鼠处死前一天代谢笼收集24h尿液,免疫透射比浊法测24h尿蛋白定量。硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳行尿蛋白考马斯亮蓝染色,普通光镜和电镜观察肾脏形态学改变,免疫共沉淀法检测PINCH-1、ILK、α-parvin三者间相互作用及PIP复合物在肾脏的表达,免疫荧光检测肾小球nephrin的表达,免疫印迹法检测肾小球nephrin、磷酸化nephrin及F-actin的表达。结果（1）注射PA后第4天,大鼠24h尿蛋白定量较对照组升高（P<0.05）,第7天达高峰（P<0.01）,第14天开始减少,第28天降至正常。（2）PAS染色显示注射PA后第7天、14天肾小管内可见大量蛋白管型,肾小球未见明显病理病变。注射PA后第1天、第4天及第28天大鼠肾小球及肾小管未见明显病理改变。（3）透射电镜显示注射PA后第4天大鼠足突部分融合,第7、14天足突广泛融合,第28天足突形态有所恢复。（4）免疫印迹显示nephrin于注射PA后第1天开始降低,第7天时降至最低,第14天时逐渐升高,第28天时升高至正常。磷酸化nephrin表达在第14天时仍保持低水平,第28天时恢复正常。（5）免疫沉淀及免疫印迹法显示注射PA后第4天PIP复合物的表达与对照组相比有所降低（P<0.05）。第7天PIP复合物表达明显低于对照组（P<0.01）。第28天PIP复合物表达已恢复正常。PIP复合物改变与尿蛋白改变一致。（6）F-actin于注射PA后第1天降至最低,后逐渐恢复至正常。结论大鼠PAN模型类似于人类微小病变型肾病；PIP复合物的表达减少可能引起足突融合、细胞骨架改变,导致蛋白尿的产生；PIP复合物的表达减少可能与nephrin磷酸化调节相关。第二部分PINCH-1-ILK-α-parvin （PIP）复合物对足细胞骨架及粘附的影响目的通过培养条件永生小鼠足细胞,探讨PIP复合物在足细胞中的表达、PIP复合物在足细胞粘附改变中的作用以及可能的调节机制。方法培养条件永生性小鼠足细胞,应用PINCH-1siRNA转染,实验共分为三组：正常组、PINCH-1siRNA转染组、scrambled siRNA组。采用免疫印迹及免疫荧光检测nephrin、磷酸化nephrin在足细胞中的表达,采用免疫沉淀检测PINCH-1、 ILK、α-parvin的相互作用,免疫荧光检测细胞骨架F-actin的改变,采用倒置显微镜观察细胞伸展性并计数。通过细胞粘附实验检测足细胞粘附能力。结果（1）PIP复合物在足细胞有表达。（2）转染PINCH-1siRNA明显抑制PINCH-1、ILK、α-parvin三者的相互作用,足细胞细胞骨架发生明显紊乱、重组,足细胞伸展性及粘附性明显降低。（3）抑制PIP复合物表达后nephrin及磷酸化nephrin蛋白水平表达无明显改变。结论PIP复合物表达改变可导致足细胞骨架紊乱重组,足细胞伸展性及粘附能力降低,且PIP复合物介导的信号并不影响nephrin及磷酸化nephrin的表达。第三部分Nephrin表达对足细胞骨架、伸展及粘附的影响目的通过培养条件永生小鼠足细胞,探讨nephrin表达改变对足细胞骨架、足细胞伸展性及粘附能力的影响及其可能机制。方法体外培养永生性小鼠足细胞,转染nephrin siRNA,实验共分三组：正常对照组、nephrin siRNA组、scrambled siRNA组。采用免疫印迹法观察nephrin和磷酸化nephrin的表达和分布,采用免疫荧光法观察足细胞细胞骨架F-actin的改变。采用倒置显微镜观察细胞伸展性并计数。通过细胞粘附实验检测足细胞粘附能力。采用免疫共沉淀法检测PINCH-1、ILK、α-parvin三者之间的相互作用。结果（1）转染nephrin siRNA,可明显抑制nephrin、磷酸化nephrin表达。（2）抑制nephrin表达,可使足细胞骨架明显紊乱重组,足细胞伸展性及粘附能力明显降低。（3）抑制nephrin表达后,PINCH-1、ILK、α-parvin三者之间的相互作用明显减少。结论Nephrin表达异常可使足细胞骨架紊乱重组,足细胞伸展性及粘附能力降低；Nephrin异常可调节PINCH-1-ILK-α-parvin （PIP）复合物的形成。第四部分Nephrin影响足细胞骨架、伸展及粘附的分子机制目的Nephrin磷酸化改变是足细胞损伤的重要机制之一,Src家族激酶抑制剂（PP2）可抑制nephrin磷酸化。Nephrin磷酸化异常是否影响足细胞与基底膜的粘附,尚需进一步证实。而PIP复合物在肾小球足细胞结构改变、存活以及与基底膜粘附中起着重要作用,己被证实可维持足细胞骨架稳定、介导足细胞伸展及粘附。本部分实验通过对条件永生性小鼠足细胞的研究,探讨nephrin磷酸化水平改变对PIP复合物介导足细胞粘附改变的影响。方法体外培养永生性小鼠足细胞,使用Src家族激酶抑制剂（PP2）干预刺激,实验共分二组：正常对照组、PP2组。采用免疫印迹法观察磷酸化nephrin的表达,采用免疫荧光法观察足细胞骨架F-actin改变。采用倒置显微镜观察细胞伸展性并计数。通过细胞粘附实验检测足细胞粘附能力。采用免疫共沉淀法检测PINCH-1、ILK、a-parvin三者之间的相互作用。结果抑制nephrin磷酸化,可使PINCH-1-ILK-a-parvin （PIP）复合物表达减少,足细胞骨架紊乱重组,足细胞伸展性和粘附性下降。结论Nephrin磷酸化通过调节PINCH-1-ILK-a-parvin （PIP）复合物,介导足细胞骨架以及粘附信号,从而改变足突与基底膜的粘附能力。
李娜[10]（2012）在《P2Y2受体对大鼠三叉神经节神经元介导瞬时外向钾电流的电压门控性钾通道的抑制作用研究》文中研究表明【研究目的】慢性疼痛的发病率在全球范围内接近20%25%。目前的治疗方法无法使大部分慢性疼痛患者解除痛苦。因此，有必要探寻治疗慢性疼痛的新方法，这会使很多患者改善生活质量。三叉神经痛（trigeminal neuralgia，TN）是一种三叉神经分布区域中的反复的刀刺般剧痛的疾病。这种发作存在扳机点，特别在说话、咀嚼、刷牙、剃须以及轻触时，甚至凉风也能引起。这种发作常常是单侧的，一天之内可能重复出现，非常痛苦。然而由于其发病机制尚不完全清楚，到目前为止，临床上仍缺乏满意地镇痛药物。TN发作时三叉神经轴上各级神经元（三叉神经节神经元和三叉神经感觉主核、脊束核、下丘脑、大脑皮层的神经元）兴奋性提高，易化性增强，痛觉阈值降低。这种兴奋性的提高导致在受到轻微刺激或无刺激时，神经元阵发性大幅度放电，传入中枢引起剧痛。但是这些神经元兴奋性的极度提高和大幅度放电的形成原因是什么，尚需进一步研究。P2受体是病理性疼痛传递中的关键蛋白，可以被外周伤害性刺激激活，引起背根神经节（dorsal root ganglion, DRG）神经元或者TG神经元细胞膜去极化。Kv通道由于参与动作电位的调节而成为疼痛治疗的潜在的靶标。最近有报道称选择性的Kv7通道的开放剂（retigabine）可以选择性地降低伤害性感受传入纤维的兴奋性。在三叉神经病理性疼痛或者炎性痛模型中，KV通道介导的IA和Ik与正常大鼠相比显着降低。由于IA和Ik在神经元动作电位的发生频率和间期的调节中起到了重要的作用。因而本实验拟利用痛觉行为学，电生理学和分子生物学等方法探讨P2受体对KV通道的调节及机制，研究参与调节IA通道的P2受体亚型及其中的途径，从而寻找三叉神经病理性痛相关的靶点，为临床治疗提供理论依据。【研究方法】1、动物分组：①正常SD雄性大鼠200250g,随机分组进行免疫组化双标实验：荧光金（FG）和P2Y2；P2Y2与Kv1.4；P2Y2与Kv3.4；P2Y2与Kv4.2；P2Y2与Kv4.3。正常SD雄性大鼠80120g，培养TG神经元随机分组，分别给予UTP/ATP，Surmain和U0126等药物处理。②ION-CCI大鼠：SD雄性大鼠200250g,随机分为假手术组和手术组。2、实验方法：①大鼠ION-CCI术；②经眶下孔达TG目标注射给药法；③大鼠痛觉行为学测定；④三叉神经节细胞分离培养；⑤免疫荧光组织化学方法和细胞免疫荧光化学方法；⑥P2Y2反义寡核苷酸干扰方法；⑦实时定量RT-PCR；⑧Western blotting；⑨细胞电生理记录。【结果】一、正常大鼠1、ATP对TG神经元快速作用：电生理结果显示，在培养的大鼠TG神经元上给予ATP后，①产生T型ATP电流的TG神经元IA被抑制，IA峰电流从（4.18±0.63） nA（n=14）减小到（1.34±0.22） nA （n=13），（P<0.05，paired t-test）；②产生S型ATP电流的TG神经元IA无显着影响；③部分ATP不敏感型TG神经元IA也受到抑制。2、免疫荧光组化方法显示：P2Y2受体与介导IA的Kv通道亚型Kv1.4, Kv3.4, Kv4.2以及Kv4.3分别高比率地共同表达在TG神经元上。3、ATP对TG神经元长时程作用：①电生理结果显示，激活的P2Y2受体降低大鼠TG神经元产生动作电位的阈电流：147.1±32.9pA变为58.3±10.3pA （control: n=7;UTP: n=9，**P＜0.01），增加动作电位数目（control:1.3±0.9spikes400ms, n=3; UTP:10.8±3.5spikes400ms, n=4,*P <0.05）；②电生理结果显示，激活的P2Y2受体对IA的抑制作用可被选择性P2Y2受体阻断剂Suramin阻断（control：0.14±0.01nAvsUTP：0.09±0.01pA, n=20, P <0.05; Suramin：0.13±0.01pA, n=9, P>0.05vscontrol）；③电生理结果显示，激活的P2Y2受体对IA的抑制作用可被ERK拮抗剂U0126阻断（Control：0.14±0.01nA vs UTP：0.09±0.01pA, n=20, P <0.05; U0126:0.15±0.03pA, n=11, P>0.05vs control）；④实时定量RT-PCR结果显示，激活的P2Y2受体显着抑制Kv1.4, Kv3.4, Kv4.2以及Kv4.3的mRNA表达。二、ION-CCI大鼠1、免疫荧光组化方法显示：ION-CCI术后，大鼠P2Y2受体阳性的神经元表达Kv1.4,Kv3.4, Kv4.2以及Kv4.3显着减少。2、ION-CCI大鼠，经眶下孔达TG目标注射给药法给予Suramin，其触须垫部位机械痛阈呈剂量依赖性恢复（saline:0.96±0.4g n=8, Suramin0.3:11.45±2.4g n=7, Suramin3:29.96±4.1g n=6,**P<0.01;##P<0.01vs Suramin0.3），维持45min。3、ION-CCI大鼠，经眶下孔达TG目标注射给药法给予P2Y2反义寡核苷酸（P2Y2受体下调），其触须垫部位机械痛阈显着恢复（saline:0.49±0.1g n=7; antisense:49.54±8.0g n=5, P<0.001），维持120h。4、 ION-CCI大鼠，经眶下孔达TG目标注射给药法给予P2Y2反义寡核苷酸（P2Y2受体下调），ION-CCI大鼠TG神经元Kv1.4, Kv3.4, Kv4.2mRNA表达显着增加。5、 ION-CCI大鼠，经眶下孔达TG目标注射给药法给予P2Y2反义寡核苷酸（P2Y2受体下调），大鼠TG神经元中pERK的蛋白表达显着降低。【结论】在大鼠三叉神经节神经元，P2Y2受体可能通过ERK途径，下调TG神经元Kv1.4、Kv3.4和Kv4.2表达，进而提高TG神经元兴奋性。P2Y2受体下调可显着逆转ION-CCI大鼠面部痛觉过敏。这些结果提示控制P2Y2受体的表达将成为临床神经病理性痛治疗的关键措施之一，将为寻找新型的神经病理性痛治疗药物提供理论依据。
二、日本奥林巴斯光学工业公司的荧光测色装置（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、日本奥林巴斯光学工业公司的荧光测色装置（论文提纲范文）
（1）基于多重动态共价键构建自愈合透明质酸水凝胶（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 自愈合水凝胶的简介 |
| 1.2 自愈合水凝胶的机理 |
| 1.2.1 动态非共价交联 |
| 1.2.2 动态共价交联 |
| 1.3 透明质酸自愈合水凝胶 |
| 1.3.1 透明质酸的简介 |
| 1.3.2 透明质酸自愈合水凝胶及其应用 |
| 1.4 本论文的研究内容、目的及意义 |
| 1.4.1 研究目的和意义 |
| 1.4.2 本论文的工作 |
| 第二章 AHA/Cys自愈合水凝胶 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 实验试剂与仪器 |
| 2.2.2 材料的合成 |
| 2.2.3 水凝胶的制备 |
| 2.2.4 材料结构表征 |
| 2.2.5 水凝胶的流变学性能表征 |
| 2.2.6 水凝胶的p H响应性 |
| 2.2.7 水凝胶的自愈合性能表征 |
| 2.2.8 水凝胶的溶胀性能表征 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 材料的结构 |
| 2.3.2 水凝胶的溶胀动力学与形貌 |
| 2.3.3 水凝胶的自愈合性能 |
| 2.3.4 水凝胶的PH响应性 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 AHA/DTP自愈合水凝胶 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验试剂及仪器 |
| 3.2.2 材料的合成 |
| 3.2.3 AD水凝胶的制备 |
| 3.2.4 材料结构表征 |
| 3.2.5 水凝胶的流变学性能表征 |
| 3.2.6 水凝胶的自愈合性能表征 |
| 3.2.7 水凝胶的多重响应性表征 |
| 3.2.8 水凝胶的溶胀性能表征 |
| 3.2.9 水凝胶的生物相容性表征 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 材料的结构 |
| 3.3.2 水凝胶的自愈合性能 |
| 3.3.3 水凝胶的溶胀与形貌 |
| 3.3.4 水凝胶的多重响应性 |
| 3.3.5 水凝胶的细胞相容性 |
| 3.3.6 水凝胶的纤维化应用 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 AHA/DHA自愈合水凝胶 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 实验试剂与仪器 |
| 4.2.2 材料的合成 |
| 4.2.3 水凝胶的制备 |
| 4.2.4 材料结构表征 |
| 4.2.5 水凝胶的流变学性能表征 |
| 4.2.6 水凝胶的自愈合性能表征 |
| 4.2.7 水凝胶的溶胀性能表征 |
| 4.2.8 水凝胶的多重响应性表征 |
| 4.2.9 水凝胶的细胞相容性表征 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 材料的结构 |
| 4.3.2 水凝胶的自愈合性能 |
| 4.3.3 水凝胶的溶胀动力学与形貌 |
| 4.3.4 水凝胶的多重响应性 |
| 4.3.5 水凝胶的生物相容性 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 结论与展望 |
| 5.1 结果与结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 |
| 致谢 |
（2）反复冻融牛肉品质变化评价技术的适用性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 冷冻肉及其现状 |
| 1.1.1 冷冻肉 |
| 1.1.2 反复冻融现状 |
| 1.2 反复冻融对肉类品质的影响 |
| 1.2.1 对肉品化学组成成分相关品质属性的影响 |
| 1.2.2 对感官品质的影响 |
| 1.2.3 对肉品微生物活性的影响 |
| 1.3 传统肉品品质评价方法 |
| 1.4 无损检测技术 |
| 1.4.1 光谱技术 |
| 1.4.2 电子鼻 |
| 1.4.3 核磁共振技术 |
| 1.4.4 其他无损检测技术 |
| 1.5 无损检测技术在评价冷冻肉品品质的应用 |
| 1.5.1 新鲜/冻融肉的辨别 |
| 1.5.2 评价化学成分相关品质属性的应用 |
| 1.5.3 评价感官品质的应用 |
| 1.6 研究目的及意义 |
| 1.7 研究内容 |
| 1.7.1 主要研究内容 |
| 1.7.2 技术路线 |
| 第二章 拉曼光谱和ESR技术表征反复冻融牛肉脂质氧化过程的研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与设备 |
| 2.2.1 实验材料与试剂 |
| 2.2.2 实验设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 牛肉样品的处理 |
| 2.3.2 脂质的提取 |
| 2.3.3 过氧化值的测定 |
| 2.3.4 TBARS值的测定 |
| 2.3.5 酸价的测定 |
| 2.3.6 脂肪酸的测定 |
| 2.3.7 ESR测定自由基 |
| 2.3.8 拉曼光谱测试 |
| 2.3.9 数据处理及分析 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 反复冻融牛肉脂质过氧化值的分析 |
| 2.4.2 反复冻融牛肉脂质TBARS值的分析 |
| 2.4.3 反复冻融牛肉脂质酸价的分析 |
| 2.4.4 反复冻融牛肉脂质自由基信号强度变化的分析 |
| 2.4.5 拉曼光谱分析 |
| 2.4.6 常规脂质氧化指标与ESR和光谱数据间的相关性分析 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 拉曼和红外光谱原位追踪反复冻融牛肉蛋白质氧化/变性的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与设备 |
| 3.2.1 实验材料与试剂 |
| 3.2.2 实验设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 牛肉样品处理 |
| 3.3.2 肌原纤维蛋白的提取 |
| 3.3.3 羰基含量的测定 |
| 3.3.4 总SH含量的测定 |
| 3.3.5 Ca~(2+)-ATP酶活性的测定 |
| 3.3.6 蛋白质表面疏水性的测定 |
| 3.3.7 DSC蛋白质热性质的测定 |
| 3.3.8 拉曼光谱测试 |
| 3.3.9 ATR-FTIR光谱测试 |
| 3.3.10 数据处理和分析 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 反复冻融牛肉蛋白质的ATR-FTIR光谱分析 |
| 3.4.2 反复冻融牛肉蛋白质的拉曼光谱分析 |
| 3.4.3 反复冻融对牛肉蛋白质二级结构变化的影响 |
| 3.4.4 反复冻融对牛肉蛋白质侧链芳香族氨基酸的影响 |
| 3.4.5 反复冻融蛋白质羰基含量与二级结构组成含量间的相关性分析 |
| 3.4.6 反复冻融蛋白质总SH含量与二级结构组成含量间的相关性分析 |
| 3.4.7 反复冻融蛋白质Ca~(2+)-ATP酶与二级结构组成含量间的相关性分析 |
| 3.4.8 反复冻融蛋白质疏水性与二级结构组成含量间的相关性分析 |
| 3.4.9 反复冻融蛋白质热性质与二级结构组成含量间的相关性分析 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 拉曼与近红外光谱预测反复冻融牛肉质构属性的研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与设备 |
| 4.2.1 实验材料与试剂 |
| 4.2.2 实验设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 牛肉样品的处理 |
| 4.3.2 质构测试 |
| 4.3.3 拉曼光谱测试 |
| 4.3.4 FT-NIR光谱测试 |
| 4.3.5 数据处理与分析 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 反复冻融牛肉质构参数的变化 |
| 4.4.2 基于PLS模型的拉曼光谱质构预测结果分析 |
| 4.4.3 基于PLS模型的FT-NIR光谱质构预测结果分析 |
| 4.4.4 拉曼光谱的模型变量贡献分析 |
| 4.4.5 FT-NIR光谱的模型变量贡献分析 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 拉曼光谱和核磁共振技术在评价反复冻融牛肉颜色和水分相关属性的研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与设备 |
| 5.2.1 实验材料与试剂 |
| 5.2.2 实验设备 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 牛肉样品处理 |
| 5.3.2 反复冻融牛肉颜色的测定 |
| 5.3.3 反复冻融牛肉水分相关指标的测定 |
| 5.3.4 反复冻融牛肉横向弛豫时间T2的测定 |
| 5.3.5 组织切片 |
| 5.3.6 拉曼光谱测试 |
| 5.3.7 数据处理分析 |
| 5.4 结果与讨论 |
| 5.4.1 反复冻融牛肉颜色的变化分析 |
| 5.4.2 反复冻融牛肉解冻损失的变化分析 |
| 5.4.3 反复冻融牛肉水分含量的变化分析 |
| 5.4.4 反复冻融牛肉横向弛豫时间T2的变化分析 |
| 5.4.5 反复冻融牛肉组织超微结构水分迁移变化 |
| 5.4.6 反复冻融牛肉颜色、水分相关属性与横向弛豫时间T2的相关性分析 |
| 5.4.7 基于PLS模型的拉曼光谱颜色和水分相关属性预测结果分析 |
| 5.4.8 拉曼光谱的模型变量贡献分析 |
| 5.5 本章小结 |
| 第六章 电子鼻技术辨别新鲜/反复冻融牛肉的研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 材料与设备 |
| 6.2.1 实验材料与试剂 |
| 6.2.2 实验设备 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 牛肉样品的处理 |
| 6.3.2 牛肉TVB-N值的测定 |
| 6.3.3 牛肉菌落总数微生物指标的测定 |
| 6.3.4 牛肉感官评价 |
| 6.3.5 SPME-GC/MS挥发性有机物的测定 |
| 6.3.6 牛肉电子鼻测试 |
| 6.3.7 数据处理与分析 |
| 6.4 结果与讨论 |
| 6.4.1 新鲜和反复冻融牛肉TVB-N值的变化分析 |
| 6.4.2 新鲜和反复冻融牛肉菌落总数的变化分析 |
| 6.4.3 新鲜和反复冻融牛肉感官评价的变化分析 |
| 6.4.4 电子鼻结果分析 |
| 6.4.5 新鲜与反复冻融牛肉挥发性有机物的变化分析 |
| 6.4.6 与牛肉气味恶化有关的挥发性物质指认 |
| 6.5 本章小结 |
| 主要结论与展望 |
| 主要结论 |
| 展望 |
| 论文主要创新点 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 :作者在攻读博士学位期间发表的论文 |
（3）中国高温高压合成钻石的电学与磁学性质研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 选题背景与研究意义 |
| 1.2 合成钻石的发展及现状 |
| 1.2.1 HPHT合成钻石的发展历史 |
| 1.2.2 钻石-石墨相图的发展 |
| 1.2.3 合成钻石的方法 |
| 1.2.4 HPHT合成钻石的主要生产商概况 |
| 1.3 工作量统计 |
| 2 高温高压合成钻石的生长 |
| 2.1 钻石的晶体结构 |
| 2.2 HPHT合成钻石的生长机理 |
| 2.2.1 溶剂学说 |
| 2.2.2 溶剂-触媒学说 |
| 2.2.3 固相转化学说 |
| 2.3 高温高压合成钻石的生长设备与技术发展 |
| 2.3.1 HPHT合成钻石的生长装置 |
| 2.3.2 反应舱结构 |
| 2.3.3 HPHT合成钻石生长原料 |
| 3 高温高压合成钻石的宝石学特征 |
| 3.1 实验样品 |
| 3.2 HPHT合成钻石的表面形貌 |
| 3.3 HPHT合成钻石的异常消光 |
| 3.4 HPHT合成钻石的发光特征 |
| 3.5 钻石的晶格缺陷 |
| 3.6 HPHT合成钻石的谱学特征 |
| 3.6.1 HPHT合成钻石的红外光谱 |
| 3.6.2 HPHT合成钻石的拉曼光谱 |
| 3.6.3 HPHT合成钻石的激光拉曼光致发光光谱 |
| 4 高温高压合成钻石的电学性质 |
| 4.1 钻石半导体材料的研究现状 |
| 4.1.1 钻石材料的P-型掺杂 |
| 4.1.2 钻石材料的N-型掺杂 |
| 4.1.3 钻石材料的元素共掺杂 |
| 4.2 含硼钻石的谱学特征 |
| 4.2.1 拉曼光谱 |
| 4.2.2 红外光谱 |
| 4.3 高温高压合成钻石的导电性和杂质元素的关系 |
| 4.3.1 无色HPHT合成钻石 |
| 4.3.2 黄色HPHT合成钻石 |
| 4.4 高温高压合成钻石的电学性质及其和硼元素分布的关联 |
| 4.4.1 HPHT合成钻石中硼杂质元素分布特征 |
| 4.4.2 霍尔效应测试 |
| 4.5 HPHT、CVD合成钻石和天然钻石的导电性比较 |
| 4.6 小结 |
| 5 高温高压合成钻石的磁学性质 |
| 5.1 钻石磁性性质的研究现状 |
| 5.2 钻石的磁性来源 |
| 5.2.1 HPHT合成钻石中的包裹体 |
| 5.2.2 包裹体化学成分分析 |
| 5.3 手持磁铁测试 |
| 5.4 磁学参数定量测试 |
| 5.4.1 实验原理 |
| 5.4.2 实验结果分析 |
| 5.5 小结 |
| 6 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
（4）高速缝纫线无水硅蜡整理剂研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 课题背景及意义 |
| 1.2 缝纫线后整理剂研究现状 |
| 1.2.1 中低速缝纫线后整理剂研究进展 |
| 1.2.2 高速缝纫线后整理剂研究进展 |
| 1.2.2.1 含水羟乳整理剂 |
| 1.2.2.2 无水硅蜡乳液整理剂 |
| 1.3 无水乳化技术的研究现状 |
| 1.3.1 乳化技术的基本理论和无水乳化特点 |
| 1.3.2 无水乳化技术研究进展 |
| 1.4 课题的研究目标和主要研究内容 |
| 1.4.1 研究目标 |
| 1.4.2 主要研究内容 |
| 第二章 硅油/石蜡的基本理化性能及无水硅蜡二元体系的性能研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 实验材料及试剂 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.2.3 实验方法 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 二甲基硅油和石蜡的理化性能研究 |
| 2.3.1.1 粘温特性分析 |
| 2.3.1.2 热性能分析 |
| 2.3.1.3 红外光谱特征分析 |
| 2.3.2 无水硅蜡二元体系的应用性能研究 |
| 2.3.2.1 相容度研究 |
| 2.3.2.2 离心稳定性研究 |
| 2.3.2.3 加热稳定性研究 |
| 2.3.2.4 硅蜡膜与基底的结合牢度研究 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 无水硅蜡多元体系的制备及复合表面活性剂的作用机理研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验药品 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.2.3 实验方法 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 无水硅蜡多元体系的构建 |
| 3.3.1.1 二甲基硅油和石蜡组分的研究 |
| 3.3.1.2 表面活性剂研究 |
| 3.3.1.3 无水硅蜡多元体系各组分配比研究 |
| 3.3.2 无水硅蜡多元体系制备工艺研究 |
| 3.3.2.1 乳化方法对乳液性能的影响 |
| 3.3.2.2 乳化速度对乳液性能的影响 |
| 3.3.2.3 乳化时间对乳液性能的影响 |
| 3.3.2.4 乳化温度对乳液性能的影响 |
| 3.3.2.5 常温型硅蜡整理剂的配方和工艺研究 |
| 3.3.3 不同硅蜡整理剂性能比较 |
| 3.3.3.1 离心稳定性研究 |
| 3.3.3.2 加热稳定性研究 |
| 3.3.3.3 粒径分析 |
| 3.3.4 硅油/石蜡无水乳化体系的作用机理研究 |
| 3.3.4.1 硅油/石蜡体系中复合表面活性剂的作用机理 |
| 3.3.4.2 硅油/石蜡体系中复合表面活性剂的作用模型 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 硅蜡整理缝纫线的性能及硅蜡膜与基底的结合机理研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 实验材料与试剂 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.2.3 实验方法 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 硅蜡整理缝纫线的性能研究 |
| 4.3.1.1 耐摩擦性能研究 |
| 4.3.1.2 毛羽系数研究 |
| 4.3.1.3 断头率分析 |
| 4.3.1.4 缝纫线色变分析 |
| 4.3.2 硅蜡膜的性能研究 |
| 4.3.2.1 润湿性研究 |
| 4.3.2.2 成膜均匀性研究 |
| 4.3.2.3 硅蜡膜与基底的结合牢度研究 |
| 4.3.2.4 常温型硅蜡整理剂整理缝纫线的性能研究 |
| 4.3.3 涤纶基底上的硅蜡膜作用机理研究 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 硕士期间发表学术论文和专利 |
| 致谢 |
（5）小鼠次级运动皮层长程投射类神经元解剖学形态的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 大脑神经网络研究的背景及意义 |
| 1.2 次级运动皮层的研究进展及意义 |
| 1.3 单神经元完整形态研究的意义和关键难点 |
| 1.4 大脑皮层中投射类神经元的分类 |
| 1.5 神经网络示踪技术 |
| 1.6 神经网络可视化 |
| 1.7 本论文研究目标和主要研究内容 |
| 2 AAV病毒标记条件优化 |
| 2.1 AAV病毒的背景 |
| 2.2 AAV病毒标记方法 |
| 2.3 AAV-27056病毒标记不同区域神经元 |
| 2.4 AAV-20296病毒标记不同区域神经元 |
| 2.5 本章小结 |
| 3 病毒标记样本全脑成像方法探究 |
| 3.1 组织光透明获取鼠脑数据 |
| 3.2 fMOST系统获取小鼠全脑数据 |
| 3.3 实验方法确立 |
| 3.4 本章小结 |
| 4 小鼠次级运动皮层单神经元完整形态分析 |
| 4.1 标记样本全脑范围内神经元投射情况 |
| 4.2 单神经元追踪及完整形态的重建 |
| 4.3 长程投射锥体神经元数据及分析 |
| 4.4 本章小结 |
| 5 总结与展望 |
| 5.1 全文总结 |
| 5.2 主要创新点 |
| 5.3 研究展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 攻读博士学位期间主要成果 |
（6）聚合物短纤维作为可注射药物载体和细胞球培养支架的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 三维类组织的体外构建 |
| 1.1.1 体内组织和器官的结构特点 |
| 1.1.2 体外构建三维类组织的方法 |
| 1.1.3 体外构建三维类组织的应用 |
| 1.2 细胞球体 |
| 1.2.1 细胞球体的特点 |
| 1.2.2 细胞球体的构建方式 |
| 1.2.3 细胞球体用于药物筛选体外模型 |
| 1.2.4 细胞球体用于组织修复和细胞治疗 |
| 1.3 电纺丝纤维的生物医学应用 |
| 1.3.1 电纺纤维的特点 |
| 1.3.2 电纺纤维作为药物载体的研究现状 |
| 1.3.3 电纺纤维作为组织工程的支架 |
| 1.4 课题的立题意义和研究内容 |
| 1.4.1 研究目的和意义 |
| 1.4.2 研究内容 |
| 1.4.3 论文的创新点 |
| 第二章 短纤维培养原代肝细胞球体用于体外药物筛选 |
| 2.1 实验部分 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 短纤维的制备 |
| 2.1.3 短纤维表面修饰半乳糖和RGD |
| 2.1.4 短纤维的表征 |
| 2.1.5 短纤维与原代肝细胞的共培养 |
| 2.1.6 原代肝细胞球体的表征 |
| 2.1.7 原代肝细胞球体功能的测定 |
| 2.1.8 原代肝细胞球体药物代谢表征 |
| 2.1.9 药物代谢的诱导和抑制实验 |
| 2.1.10 数据统计分析 |
| 2.2 结果与讨论 |
| 2.2.1 短纤维的表征 |
| 2.2.2 短纤维长度对肝细胞球体功能的影响 |
| 2.2.3 短纤维长度对原代肝细胞球体形貌的影响 |
| 2.2.4 半乳糖和RGD接枝密度对肝细胞球体功能的影响 |
| 2.2.5 表征原代肝细胞球体 |
| 2.2.6 原代肝细胞球体用于药物代谢研究 |
| 2.2.7 诱导剂和抑制剂对原代肝细胞球体药物代谢的影响 |
| 2.3 本章小结 |
| 第三章 原代肝细胞和HepG2细胞球体作为体外葡萄糖和脂质代谢模型 |
| 3.1 实验部分 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 短纤维的制备和表征 |
| 3.1.3 原代肝细胞和人肝癌细胞球体培养 |
| 3.1.4 肝细胞球体的表征 |
| 3.1.5 肝细胞球体的功能和活力表征 |
| 3.1.6 肝细胞球体研究葡萄糖代谢 |
| 3.1.7 肝细胞球体研究脂质代谢 |
| 3.1.8 肝细胞球状体的酶活性分析 |
| 3.1.9 肝细胞球体的激素响应和药物敏感性表征 |
| 3.1.10 肝细胞球体葡萄糖代谢和脂质代谢相关基因的表达 |
| 3.1.11 数据统计分析 |
| 3.2 结果与讨论 |
| 3.2.1 肝细胞球体的表征 |
| 3.2.2 肝细胞球体肝特异性功能的表征 |
| 3.2.3 肝细胞球状体的葡萄糖代谢 |
| 3.2.4 肝细胞球体对葡萄糖代谢激素的响应 |
| 3.2.5 肝细胞球体的脂质代谢表征 |
| 3.2.6 肝细胞球体的PEPCK和AMPK酶活性 |
| 3.2.7 肝细胞球体对血糖调节药物和降脂药物的响应 |
| 3.3 本章小结 |
| 第四章 瘤内注射载药短纤维的抗肿瘤效果 |
| 4.1 实验部分 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 载药短纤维的制备 |
| 4.1.3 载药短纤维的表征 |
| 4.1.4 载药短纤维的体外药物释放 |
| 4.1.5 载药短纤维的细胞毒性和细胞凋亡 |
| 4.1.6 瘤内注射载药短纤维对肿瘤进行治疗 |
| 4.1.7 载药短纤维的体内抗肿瘤效果 |
| 4.1.8 药物和短纤维在组织及肿瘤内的分布 |
| 4.1.9 肿瘤组织学分析 |
| 4.1.10 数据统计分析 |
| 4.2 结果与讨论 |
| 4.2.1 载药短纤维的表征 |
| 4.2.2 载药短纤维的体外药物释放 |
| 4.2.3 载药短纤维的细胞毒性和细胞凋亡 |
| 4.2.4 短纤维释放的药物在组织中的分布 |
| 4.2.5 纤维释放药物和载药短纤维在肿瘤中的空间分布 |
| 4.2.6 载药短纤维抑制肿瘤生长 |
| 4.2.7 载药短纤维对动物存活率和体重的影响 |
| 4.2.8 载药短纤维对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响 |
| 4.3 本章小结 |
| 第五章 体外三维培养MCF-7细胞球体构建类肿瘤模型 |
| 5.1 实验部分 |
| 5.1.1 实验材料 |
| 5.1.2 载药短纤维的制备 |
| 5.1.3 载药短纤维的表征 |
| 5.1.4 载药短纤维促肿瘤细胞增殖 |
| 5.1.5 肿瘤细胞球体的培养 |
| 5.1.6 肿瘤细胞球体的表征 |
| 5.1.7 肿瘤细胞球体的基因表达分析 |
| 5.1.8 肿瘤细胞球体的致瘤性 |
| 5.1.9 数据统计分析 |
| 5.2 结果与讨论 |
| 5.2.1 药物浓度对肿瘤细胞增殖的影响 |
| 5.2.2 载药短纤维的表征 |
| 5.2.3 载药短纤维对肿瘤细胞增殖的影响 |
| 5.2.4 肿瘤细胞球体的表征 |
| 5.2.5 肿瘤细胞球体的组织学评价 |
| 5.2.6 肿瘤细胞球体的增殖效果 |
| 5.2.7 肿瘤细胞球体恶性肿瘤因子基因的表达 |
| 5.2.8 表征肿瘤细胞球体的上皮间充质转化和癌症干细胞表型 |
| 5.2.9 肿瘤细胞球体在体内的成瘤表征 |
| 5.3 本章小结 |
| 第六章 可注射凝胶携载干细胞球体和短纤维用于软骨缺损和关节炎的治疗 |
| 6.1 实验部分 |
| 6.1.1 实验材料 |
| 6.1.2 载药短纤维的制备 |
| 6.1.3 短纤维的表征 |
| 6.1.4 水凝胶的制备 |
| 6.1.5 可注射凝胶的表征 |
| 6.1.6 载药短纤维及凝胶包裹载药短纤维的药物释放 |
| 6.1.7 干细胞球的体外培养 |
| 6.1.8 干细胞球体的体外软骨分化 |
| 6.1.9 软骨缺损和关节炎的治疗 |
| 6.1.10 软骨缺损的修复效果和组织学评价 |
| 6.1.11 修复缺损软骨的生物化学和生物力学分析 |
| 6.1.12 检测关节炎中的炎症表达 |
| 6.1.13 数据统计分析 |
| 6.2 结果与讨论 |
| 6.2.1 水凝胶的表征 |
| 6.2.2 短纤维增强水凝胶力学强度的表征 |
| 6.2.3 水凝胶的形貌表征 |
| 6.2.4 短纤维和水凝胶性质对BMSC分化成软骨的影响 |
| 6.2.5 考察骨髓间充质干细胞体外软骨分化效果 |
| 6.2.6 缺损软骨修复效果的评估 |
| 6.2.7 修复软骨组织的生物化学和生物力学分析 |
| 6.2.8 塞来昔布体外药物释放及细胞毒性 |
| 6.2.9 关节炎中炎症的抑制效果 |
| 6.2.10 骨关节炎的治疗效果 |
| 6.3 本章小结 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
（7）CLARITY技术构建肝脏透明化模型及技术相关应用（论文提纲范文）
| 本课题研究基金来自以下资助项目 |
| 个人简历 |
| 缩略词中英文对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 基于CLARITY技术的肝脏透明化模型建立 |
| 前言 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 大鼠肝硬化组织及其他器官的透明化成像 |
| 前言 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 透明化切片抗体洗脱术在免疫荧光中的应用 |
| 前言 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文小结 |
| 本研究的不足之处 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
（8）MiR-566调控VHL影响人脑胶质瘤细胞VEGF表达的体内外研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语/符号说明 |
| 第1章 前言 |
| 1.1 研究现状、成果 |
| 1.2 研究目的、方法 |
| 第2章 MiRNA-566 在人脑胶质瘤细胞中调控VHL影响VEGF表达的研究 |
| 2.1 对象与方法 |
| 2.1.1 对象 |
| 2.1.2 方法 |
| 2.1.3 统计学方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 Real time PCR验证lenti-AS-566 转染效率以及转染后VEGFmRNA的表达水平 |
| 2.2.2 Western Blot检测经lenti-AS- miR-566 转染后U87 胶质细胞瘤中相关蛋白的变化 |
| 2.2.3 Western Blot检测经VHL表达质粒转染后U87 胶质细胞瘤中相关蛋白的变化 |
| 2.2.4 荧光素酶报告载体实验结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 MiRNA-566 调控VHL影响VEGF表达的体内研究 |
| 3.1 对象与方法 |
| 3.1.1 对象 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.1.3 统计学方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 原位杂交检测miR-566 在脑组织切片中的表达 |
| 3.2.2 免疫组织化学染色法对切片中相关基因的检测 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（9）Nephrin表达在PINCH-1-ILK-α-parvin复合物介导足细胞粘附改变中的作用及分子机制（论文提纲范文）
| 论文创新点 |
| 目录 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 Nephrin、磷酸化nephrin、PIP复合物在大鼠嘌呤霉素氨基核苷肾病模型中的表达 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 附图 |
| 第二部分 PINCH-1-ILK-a-parvin(PIP)复合物对足细胞骨架、细胞伸展及粘附的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 附图 |
| 第三部分 Nephrin表达对足细胞骨架、伸展及粘附的影响 |
| 一、细胞培养 |
| 二、主要试剂 |
| 三、主要仪器 |
| 四、溶液配制 |
| 五、主要指标及实验方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 附图 |
| 第四部分 Nephrin影响足细胞骨架、伸展及粘附的分子机制 |
| 一、细胞培养 |
| 二、主要试剂 |
| 三、主要仪器 |
| 四、溶液配制 |
| 五、主要指标及实验方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 附图 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间主要学术成果 |
| 致谢 |
（10）P2Y2受体对大鼠三叉神经节神经元介导瞬时外向钾电流的电压门控性钾通道的抑制作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语表 |
| 前言 |
| 第一部分 ATP对大鼠三叉神经节神经元的I_A快速作用 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 大鼠 TG 伤害感受性神经元 P2Y2 受体激活对 I_A的抑制作用和机制研究 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第三部分 ION-CCI 大鼠 TG 伤害感受性神经元 P2Y2 受体激活对 Kv 的调节作用及意义研究 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 全文总结 |
| 综述 P2受体与疼痛 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表论文 |
| 参加科研工作情况 |
| 致谢 |
四、日本奥林巴斯光学工业公司的荧光测色装置（论文参考文献）
- [1]基于多重动态共价键构建自愈合透明质酸水凝胶[D]. 李尚志. 武汉纺织大学, 2021(01)
- [2]反复冻融牛肉品质变化评价技术的适用性研究[D]. 陈清敏. 江南大学, 2020(04)
- [3]中国高温高压合成钻石的电学与磁学性质研究[D]. 杨池玉. 中国地质大学(北京), 2020(11)
- [4]高速缝纫线无水硅蜡整理剂研究[D]. 李伟华. 浙江理工大学, 2020(04)
- [5]小鼠次级运动皮层长程投射类神经元解剖学形态的研究[D]. 林惠敏. 华中科技大学, 2018(01)
- [6]聚合物短纤维作为可注射药物载体和细胞球培养支架的研究[D]. 韦佼君. 西南交通大学, 2018
- [7]CLARITY技术构建肝脏透明化模型及技术相关应用[D]. 袁小川. 广西医科大学, 2018(08)
- [8]MiR-566调控VHL影响人脑胶质瘤细胞VEGF表达的体内外研究[D]. 肖兵. 南昌大学, 2015(03)
- [9]Nephrin表达在PINCH-1-ILK-α-parvin复合物介导足细胞粘附改变中的作用及分子机制[D]. 查冬青. 武汉大学, 2013(07)
- [10]P2Y2受体对大鼠三叉神经节神经元介导瞬时外向钾电流的电压门控性钾通道的抑制作用研究[D]. 李娜. 第二军医大学, 2012(09)