一、急性心肌梗死大鼠血清血管内皮生长因子含量的变化（论文文献综述）
王擎擎[1]（2021）在《活血温通方联合BMSCs移植改善心梗后缺血缺氧微环境的机制研究》文中研究指明背景:当代以干细胞技术为核心的再生医学的迅速发展,为心肌梗死的治疗带来新的希望,其中干细胞移植治疗心梗,有望修复坏死的心肌组织,改善受损的心功能,但是梗死区缺血、缺氧局部微环境使MSCs移植后存活率降低,极大地限制了 MSCs用于治疗MI的疗效。中药促进MSCs移植后存活的研究目前也显示出了很好的疗效,可以调控MSCs的归巢、定植,提高MSCs移植后存活率。导师姚魁武教授基于中医胸痹心痛“阳微阴弦”的基本病机,常用活血温通法治疗冠心病,临床疗效显着,并根据多年临床经验拟定了具有活血温通效果的经验方—活血温通方。我们前期研究也发现活血温通方可以显着改善心肌缺血模型组大鼠心功能,明显缩小心肌梗死面积,而且能够降低炎症反应、抑制心肌细胞凋亡、减少胶原纤维面积以及促进血管新生,同时发现活血温通方减轻心肌缺血损伤可能与Sirt1信号通路激活有关。而活血温通方联合MSCs移植治疗心梗,还没有相关的报道。目的:1.总结导师姚魁武教授活血温通法治疗冠心病阳虚证的用药规律、治疗思路,并进行系统的经验总结。2探索活血温通方对BMSCs移植治疗心梗疗效的影响以及可能的作用机制。方法:1.收集2016年1月—2020年12月就诊于中国中医科学院广安门医院姚魁武主任医师门诊,应用中药汤剂治疗且符合纳排标准的全部初诊原始病案。通过“中医传承计算平台（V3.0）”软件系统进行数据分析,根据分析得到到药物频次、常用药物组合、潜在处方等,分析探讨姚魁武教授活血温通法治疗冠心病的用药规律、诊疗思路,并做系统总结。2.提取大鼠BMSCs,培养至第三代时,用流氏细胞仪进行细胞鉴定。用活细胞染色剂CM-Dil进行荧光标记,以检测移植后细胞的存活情况。3.通过结扎左冠状动脉前降支制备心机梗死模型。SD大鼠随机分为5组：假手术组（Sham组）：冠状动脉只穿线不结扎，术后灌胃纯水，持续28天；心梗组（MI组）:按AMI造模方法进行造模,造模成功后于梗死区边缘心肌组织的2个位点直接注入共100μL的PBS。术后灌胃纯水,持续28天;BMSCs移植组（BMSCs组）:按AMI造模方法进行造模,造模成功后于梗死区边缘心肌组织的2个位点直接注入共100μL的MSCs单细胞悬液（细胞浓度3x106个/100μL）。术后灌胃纯水,连续28天;活血温通方组（HXWTF组）:造模方法同心梗组。术后灌胃活血温通方,连续28天;活血温通方+BMSCs移植组（BMSCs+HXWTF组）:造模方法同BMSCs移植组。术后灌胃活血温通方,连续28天。4.超声心动图检测大鼠心功能、TTC染色用于观察心肌梗死面积大小、HE染色观察心梗大鼠心肌组织形态的改变、荧光显微镜观察BMSCs移植后的存活情况。5.用WST-1法测定大鼠血清SOD活力和TBA法测定大鼠血清MDA水平,以评价各组氧化损伤程度;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡;采用ELISA试剂盒检测大鼠血清中炎性因子TNF-a、IL-6、IL-10与生长因子VEGF、bFGF水平,评价炎症反应程度;天狼猩红染色检测各组大鼠心肌纤维化程度;免疫组织化学染色检测梗死边缘区α-SMA和CD31的表达情况,以评价血管新生情况;Western blotting检测心肌组织Sirt1、NF-κB、FoxO1和p53的蛋白的表达水平。结果:1.从用药频次分析,196张处方中,共137味中药,用药频次≥20的中药有39味,用药频次≥50的有22味,用药频次≥50按频次由高到低依次为丹参（193）,桂枝（164）,砂仁（123）,川芎（117）,瓜蒌（109）,白芍（105）,炙甘草（95）,鸡血藤（93）,茯苓（88）,柴胡（87）,炒枳壳（80）,当归（78）,干姜（77）,炒白术（76）,杜仲（64）,党参（61）,麦冬（59）,肉苁蓉（58）,炒酸枣仁（56）,薤白（54）,葛根（54）,五味子（50）。2.196张处方中的137味中药按功效共分为16类,根据药物功效使用频次由高到低排列前10位的依次为补虚类（769）,活血化瘀类（436）,温里类（339）,清热类（210）,化湿类（198）,解表类（184）,理气类（177）,化痰类（155）,利水渗湿类（119）,安神类（114）。3.从药物组合频次分析,药物组合频次≥90的由高到低依次是丹参-桂枝（162）,丹参-砂仁（123）,丹参-川芎（115）,丹参-瓜蒌（108）,丹参-白芍（104）,丹参-桂枝-砂仁（99）;桂枝-砂仁（99）。基于关联规则深入分析用药组合,导师活血温通法治疗冠心病常用的2味药的组合是丹参-瓜蒌,丹参-砂仁,丹参-桂枝,丹参-鸡血藤等;3味药的组合是丹参-砂仁-瓜蒌,丹参-桂枝-瓜蒌,丹参-桂枝-鸡血藤等。从用药关联规则网络拓扑图可以看出,关联性比较大的药物组合是丹参、桂枝、鸡血藤、瓜蒌、川芎、砂仁。4.基于复杂算法的聚类分析在深入挖掘可以得出导师活血温通法治疗冠心病常用的核心组合。3种药物聚类核心组合为丹参,桂枝,砂仁,瓜蒌,鸡血藤;丹参,桂枝,川芎,白芍,砂仁;丹参,桂枝,川芎,砂仁,茯苓。4种药物聚类核心组合为;丹参,桂枝,砂仁,瓜蒌,川芎,鸡血藤;丹参,桂枝,麦冬,炙甘草,川芎,生地黄;丹参,桂枝,砂仁,鸡血藤,川芎,降香;丹参,桂枝,砂仁,干姜,茯苓,瓜蒌。5种药物聚类核心组合为;丹参,桂枝,鸡血藤,瓜蒌,川芎,党参;桂枝,丹参,麦冬,川芎,炙甘草,炒白术;丹参,桂枝,干姜,砂仁,茯苓,黄连;丹参,桂枝,砂仁,瓜蒌,川芎,白芍;丹参,砂仁,桂枝,川芎,鸡血藤,降香。5.基于方剂频数分析,可以得出196例病案中共涉及方剂54个,方剂频数为2以上的药物有32个,方剂频数为5以上的方剂有24个,方剂频数为10以上的方剂有13个,方剂频数为20以上的药物有6个。可以看出导师活血温通法治疗冠心病常用的方剂有丹参饮（118）,四逆散（73）,桂枝甘草龙骨牡蛎汤（25）苓桂术甘汤（23）、瓜蒌薤白白酒汤（21）等。6.根据方剂配伍的使用频次,可以得出导师活血温通法治疗冠心病常用的方剂配伍是丹参饮-四逆散（47）,丹参饮-黄芪赤风汤（11）,丹参饮-交泰丸（11）,丹参饮-瓜蒌薤白白酒汤（11）,丹参饮-半夏泻心汤（11）,丹参饮-瓜蒌薤白半夏汤（11）等。基于关联规则深入分析用方组合,可以得出导师活血温通法治疗冠心病常用的方剂配伍是丹参饮-四逆散-瓜蒌薤白半夏汤,丹参饮-四逆散-黄芪赤风汤,丹参饮-四逆散-桂枝甘草龙骨牡蛎汤等。根据方剂组合规律关联规则网络拓扑图可以看出关联比较大的方剂是丹参饮、四逆散、生脉散、桂枝甘草龙骨牡蛎汤、瓜蒌薤白半夏汤、瓜蒌薤白白酒汤、交泰丸等。基于复杂算法的聚类分析在深入挖掘可以得出导师活血温通法治疗冠心病常用的核心方剂组合是生脉散,丹参饮,枳实薤白桂枝汤,补中益气汤,四君子汤;丹参饮,交泰丸,半夏泻心汤,苓桂术甘汤,越鞠丸;丹参饮,四逆散,黄芪赤风汤,瓜蒌薤白半夏汤,桂枝甘草龙骨牡蛎汤。7.BMSCs的鉴定:用流氏细胞仪检测第3代BMSCs表面标记物CD44、CD90、CD45的表达情况,结果显示CD44表达率为99.2%,CD90表达率为97.4%,CD45的表达率为6.7%。8.活血温通方联合MSCs移植对心梗大鼠心功能的影响:与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组EF均有明显改善（**P<0.01,***P<0.001,***P<0.001）,活血温通方联合 BMSCs 移植组 EF比BMSCs移植组和活血温通方组改善明显（***P<0.001,**P<0.01）;与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组FS均有明显改善（**P<0.01,***P<0.001,***P<0.001）,活血温通方联合BMSCs移植组FS 比 BMSCs移植组和活血温通方组改善明显（***P<0.001,***P<0.001）。9.活血温通方联合MSCs移植对心梗大鼠心肌梗死面积的影响:假手术组无梗死,完整心脏表面和心脏切片均呈现红色,无苍白色区域。心梗组完整心脏表面和心脏切片苍白色区域均最大,故心梗面积最大,且心梗处明显凹陷,心梗处心肌明显变薄。BMSCs移植组和活血温通方组较心梗组,完整心脏表面和心脏切片的苍白色区域均明显减少,说明BMSCs移植和活血温通方药物干预均能减少心梗面积。活血温通方联合BMSCs移植组心脏苍白色区域最小,心梗处轻微凹陷,说明活血温通方能提高BMSCs移植改善心梗大鼠心肌梗死面积的疗效。10.活血温通方联合MSCs移植对心梗大鼠心肌组织形态的影响:HE染色显示与假手术组相比,其余各组梗死区均有不同程度的炎性细胞浸润。心梗组细胞排列紊乱,细胞间隙增大,炎性细胞浸润最严重。BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组这些病变均有明显改善,炎性细胞浸润有不同程度的降低。与BMSCs移植组、活血温通方组相比较,活血温通方联合BMSCs移植组细胞排列更有序,炎性细胞浸润更少。11.活血温通方对BMSCs移植四周后存活的影响:在全景数字扫描显微镜下观察,可以看到活血温通方联合BMSCs移植组红色荧光分布更广。红色荧光与蓝色荧光重叠的数量明显更多。12.活血温通方联合BMSCs移植对心梗大鼠血清SOD、MDA的影响:与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组SOD活力均有显着升高（**P<0.01,***P<0.001,***P<0.001）;与BMSCs移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组SOD活力均有显着升高（***P<0.001,**P<0.01）;与心梗组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组MDA水平均有显着降低（**P<0.01,***P<0.001,***P<0.001）;与BMSCs移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs 移植组 MDA 均有显着降低（***P<0.001,**P<0.01）。13.活血温通方联合BMSCs移植对心梗大鼠心肌细胞凋亡的影响:与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组细胞凋亡水平显着降低（***P<0.001,***P<0.001,***P<0.001）;与 BMSCs 移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组细胞凋亡水平均有显着降低（***P<0.001,***P<0.001）。14.活血温通方联合BMSCs移植对心梗大鼠血清炎性因子TNF-α、IL-6、IL-10的影响:与假手术组相比,MI组TNF-α、IL-6和IL-10水平水平显着升高（***P<0.001）;与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合 BMSCs 移植组 TNF-α 显着降低（**P<0.01,**P<0.01,***P<0.001）,IL-6 显着降低（***P<0.001,***P<0.001,***P<0.001）,IL-10 显着升高（***P<0.001,***P<0.001,***P<0.001）;与 BMSCs 移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组TNF-α显着降低（**P<0.01,**P<0.01）,IL-6显着降低（***P<0.001,**P<0.01）,IL-10显着升高（***P<0.001,***P<0.001）。15.活血温通方联合BMSCs移植对心梗大鼠心肌纤维化的影响:与假手术组相比,MI组心肌纤维化明显（***P<0.001）;与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组心肌纤维化面积明显减少（***P<0.001,***P<0.001,***P<0.001）;与BMSCs移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组心肌纤维化面积明显减少（*P<0.05,**P<0.01）。16.活血温通方联合BMSCs移植对心梗大鼠梗死边缘区α-SMA、CD31表达的影响:与假手术组相比,MI组α-SMA、CD31的表达明显增多（***P<0.001,**P<0.01）;与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs 移植组 α-SMA、CD31 的表达均显着增多（***P<0.001,***P<0.001,***P<0.001）;与BMSCs移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组 α-SMA、CD31 的表达显着增多（**P<0.01,*P<0.05;*P<0.05,***P<0.001）。17.活血温通方联合BMSCs移植对心梗大鼠血清生长因子VEGF、bFGF的影响:与假手术组相比,MI组VEGF、bFGF水平显着升高（***P<0.001）;与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组VEGF、bFGF 显着升高（***P<0.001,***P<0.001,***P<0.001）;与 BMSCs移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组VEGF、bFGF显着升高（***P<0.001,***P<0.001）。18.活血温通方联合BMSCs移植对心肌组织SIRT1、NF-kB、FoxO1和p53蛋白表达的影响:与假手术组相比,MI组Sirt1的表达明显降低（***P<0.001）,NF-kB、Foxo1、p53 的表达明显升高（**P<0.01,**P<0.01,**P<0.01）。与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组Sirt1的表达显着升高（**P<0.01,***P<0.001,***P<0.001）,NF-κB的表达显着降低（*P<0.05,**P<0.01,**P<0.01）,FoxO1 的表达显着降低（*P<0.05,*P<0.05,*P<0.05）,p53 的表达显着降低（*P<0.05,**P<0.01,**P<0.01）;与BMSCs移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组Sirt1的表达均显着升高（**P<0.01,*P<0.05）,NF-kB的表达显着降低（**P<0.01,*P<0.05）,FoxO1的表达显着降低（*P<0.05,*P<0.05）,p53的表达显着降低（*P<0.05,*P<0.05）。结论:1.导师活血温通法治疗冠心病常活血药与温阳药并重,且用药平和,配伍主次分明,以经方为主。在活血温通法治疗冠心病的组方用药中常含有活血温通方,治疗效果短期的显着,可能是因为改善了心肌缺血缺氧微环境,也初步说明了活血温通方的临床疗效比较显着。2.活血温通方可能是通过改善心梗后缺血缺氧微环境而提高了 BMSCs移植后的存活率,而进一步提高BMSCs移植治疗心梗在抗细胞氧化损伤、抗细胞凋亡、降低炎症反应、抗心肌纤维化和促进血管新生方面的疗效,以及促进移植后的BMSCs的旁分泌功能而进一步修复受损的心肌,缩小心肌梗死面积,改善心功能。3.活血温通方能促进BMSCs移植后Sirt1信号通路的激活,以协同恢复心功能。
孙敬辉[2]（2021）在《miR-489调控心肌纤维化的机制及人参皂苷Re的干预作用研究》文中研究说明心肌纤维化（myocardial fibrosis,MF）是众多心血管疾病发展至后期常见的病理改变,常常引起心肌收缩和舒张功能障碍,是心室重构不断进展和不可逆的主要原因。MF的发病机制十分复杂,涉及到神经体液、生长因子、促炎性细胞因子和基因转录之间复杂的相互作用。心脏成纤维细胞（cardiac fibroblasts,CFs）是MF最主要的效应细胞,可在缺血、炎性因子等促纤维化因素的刺激下分化为肌成纤维细胞。激活的肌成纤维细胞会分泌大量的细胞外基质蛋白,导致心室硬度增加,顺应性降低和心肌电信号传导异常,诱发难治性心力衰竭、恶性心律失常,严重影响心血管疾病的预后。目前MF的治疗尚缺乏特效药物,因此探寻MF发病机制的关键因子及安全可靠的治疗药物,对于MF的治疗刻不容缓。MircoRNAs（miRNAs）是一类在真核细胞中广泛表达的短链非编码RNA。它们可以直接与靶基因的3’UTR区域结合,诱导靶基因mRNAs分解或阻碍其翻译,从而调节多种生理功能和病理过程。miR-489在心肌细胞和CFs中广泛表达。在心肌细胞中miR-489过表达能够下调下游髓样分化因子88（myeloid differentiation factor 88,myd88）的水平,减轻血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）诱导的心肌肥厚。重要的是,miR-489转基因小鼠体内AngⅡ诱导的MF明显减轻,说明miR-489能够抑制AngⅡ诱导的MF,miR-489可能是治疗MF的一个潜在靶点。然而,miR-489在MF中的调控机制尚不清楚,尤其是在心肌梗死诱导的MF中miR-489是否也具有同样作用值得进一步研究。中医学中没有MF的直接论述,但MF是众多心血管疾病发展至后期的病理改变,是一种相对慢性渐进性病变。中医传统理论认为“久病多虚”、“久病多瘀”,因此治疗当以补气活血为法。人参是传统医学中补气的要药,具有补益元气,健脾补肺,安神益智等功效,以及抗心肌缺血、抗心律失常、抗动脉粥样硬化和抗纤维化等药理作用。人参皂苷Re是人参的主要活性成分之一,课题组前期研究发现,人参皂苷Re具有抗心肌梗死后MF的作用,并且可以调控Smad2/3的表达。既往研究证实,Smad3是miR-489的直接下游靶点,那么人参皂苷Re是否可以通过调节miR-489来发挥抗MF的作用,值得进行深入研究。本研究通过体外构建miR-489过表达和抑制的CFs模型,证实miR-489对MF和myd88/核因子κB（nuclear factor kappa B,NF-κB）信号通路具有调控作用。在此基础上,以人参皂苷Re为干预手段,通过结扎左冠状动脉前降支构建心肌梗死小鼠模型和AngⅡ干预的乳鼠原代CFs模型,观察人参皂苷Re的抗MF作用,并探讨人参皂苷Re对miR-489及其下游myd88/NF-κB通路的调控作用,为中医药抗MF,改善心血管疾病患者的预后提供科学依据。研究一 miR-489调节心肌纤维化的机制研究目的:在正常培养的CFs和AngⅡ干预的CFs中转染miR-489 mimic和inhibitor观察miR-489模拟物和抑制物对CFs表型分化、迁移和分泌等细胞生物学行为的影响,并探讨其作用机制。方法:提取乳鼠原代CFs,经波形蛋白免疫荧光鉴定纯度后,按照如下分组:（1）在正常培养条件下的CFs中转染miR-489 mimic,构建miR-489过表达模型。CFs分为3组:正常组（Normal）、miR-489过表达组（mimic）、miR-489阴性对照组（mimic-NC）。（2）在AngⅡ干预的CFs中转染miR-489 mimic,构建miR-489过表达模型。CFs 分为 3 组:AngⅡ组（AngⅡ）、AngⅡ+miR-489 过表达组（AngⅡ+mimic）、AngⅡ+miR-489 阴性对照组（AngⅡ+mimic-NC）。（3）在正常培养条件下的CFs中转染miR-489 inhibitor,构建miR-489抑制模型。CFs 分为 3 组:正常组（Normal）、miR-489 抑制组（inhibitor）、miR-489阴性对照组（inhibitor-NC）。（4）在AngⅡ干预的CFs中转染miR-489 inhibitor,构建miR-489抑制模型。CFs 分为 3 组:AngⅡ组（AngⅡ）、AngⅡ+miR-489 抑制组（AngⅡ+inhibitor）、AngⅡ+miR-489 阴性对照组（AngⅡ+inhibitor-NC）。采用qPCR技术检测miR-489 mimic转染的CFs中miR-489的表达水平,验证转染效果。采用Western blot技术检测各组中α-SMA的表达情况,观察CFs的分化情况;检测Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ蛋白表达,观察CFs胶原蛋白的分泌情况;检测CFs中myd88、NF-κB p65和p-NF-κB p65的表达情况,观察miR-489的调控作用。结果:（1）经波形蛋白免疫荧光检测证实提取的CFs纯度在95%以上,符合实验要求。（2）与Normal组和mimic-NC组比较,mimic组miR-489的表达水平显着升高（P<0.01）,Normal组和mimic-NC组之间无显着性差异（P>0.05）,说明 miR-489 mimic 转染成功。与 Normal 组和 inhibitor-NC 组相比,inhibitor 组myd88表达显着上调（P<0.01）,Normal组和inhibitor-NC组之间无统计学差异（P>0.05）,说明miR-489 inhibitor转染成功。（3）在正常条件下培养的CFs和AngⅡ干预的CFs中,miR-489过表达均能够显着抑制myd88、α-SMA、CollagenⅠ和Collagen Ⅲ的表达,降低p-NF-κB p65/p65的比值;抑制miR-489能够促进myd88、α-SMA、Collagen Ⅰ和 Collagen Ⅲ的表达,上调 p-NF-κBp65/p65 的比值。结论:在正常培养的CFs和AngⅡ干预的CFs中miR-489过表达均能够抑制下游myd88/NF-κB通路的活化,减轻CFs的纤维化反应;抑制miR-489能够激活下游myd88/NF-κB信号通路,促进CFs的纤维化反应。这表明在生理和病理情况下CFs中miR-489均可调节myd88/NF-κB信号通路,改善心肌纤维化反应。研究二人参皂苷Re调节心肌梗死后心肌纤维化的机制研究目的:观察人参皂苷Re对急性心肌梗死后小鼠心功能、血清学标志物、组织病理学改变和相关基因蛋白表达的影响,探讨人参皂苷Re改善梗死后MF的分子机制。方法:通过结扎左冠状动脉前降支构建C57BL/6小鼠心肌梗死后MF模型。小鼠被随机分为4组:假手术组（Sham）、模型组（Model）、低剂量人参皂苷Re组（L,19.5mg/kg/d）和高剂量人参皂苷Re组（H,39mg/kg/d）,每组10只。术后第二天开始灌胃给药,1次/天,连续灌胃四周。心脏超声检测各组小鼠左室射血分数（LVEF）和左室短轴缩短率（LVFS）,观察心功能情况;通过心重指数（HWI）、心胫比（HW/TL）以及心肌中ANP、BNP和β-MHC mRNA的表达,观察心梗后心肌代偿性肥厚情况;通过ELISA方法检测血清中心肌损伤（CK-MB）、心力衰竭（BNP）、肝肾功能（ALT、S-Cr）和 RAAS（AngⅡ）等标记物的含量;通过HE和Masson染色,观察心梗后心肌组织及纤维化的病变情况;Western blot 检测 myd88、p-NF-κB p65、NF-κB p65、α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ等相关蛋白表达;qPCR技术检测miR-489和myd88的表达形况。结果:（1）与Sham组相比,Model组LVEF和LVFS显着减低（P<0.01）;与Model组比较,低高剂量人参皂苷Re组LVEF和LVFS明显升高（P<0.01）。（2）与Sham组比较,Model组CK-MB、BNP和AngⅡ水平显着升高（P<0.01）;与Model组比较,低高剂量人参皂苷Re组CK-MB、BNP和AngⅡ水平显着下降（P<0.05）,ALT 和 S-Cr 无明显变化（P>0.05）。（3）与 Sham 组比较,Model组HWI、HW/TL以及心肌中ANP、BNP和β-MHC mRNA的表达显着升高（P<0.01）,给以低高剂量人参皂苷Re干预后,这些指标明显下降（P<0.05）。（4）与Sham组比较,Model组心肌结构排列紊乱,肌丝较粗,呈波状变化,伴有大量炎症细胞浸润和胶原蛋白沉积。给予人参皂苷Re干预后组织病理改变明显减轻。（5）与 Sham 组比较,Model 组 myd88、p-NF-κB p65、α-SMA、Collagen Ⅰ和CollagenⅢ的表达明显升高,miR-489的表达显着下调（P<0.01）;与Model组比较,低高剂量人参皂苷Re组myd88、p-NF-κB p65、α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ的表达明显降低,miR-489的表达显着上调（P<0.05）。以上检测中低高剂量人参皂苷Re组之间无统计学差异（P>0.05）。结论:人参皂苷Re能够改善心肌梗死后小鼠的心脏功能,抑制心肌代偿性肥厚,减轻心肌缺血损伤和胶原蛋白沉积,改善组织病理学病变,且未发现明显肝肾毒性。其机制可能与调节心肌梗死后小鼠心肌中miR-489/myd88/NF-κB信号通路有关。研究三 人参皂苷Re干预AngⅡ诱导CFs生物学行为改变的机制研究目的:采用AngⅡ诱导C57BL/6乳鼠原代CFs,观察人参皂苷Re对CFs分化、迁移和分泌等生物学行为的影响,并探讨其相关机制。方法:提取乳鼠原代CFs后,通过CCK-8法筛选人参皂苷Re的安全浓度范围。CFs被随机分为5组:正常组（Normal）、模型组（Model）和人参皂苷Re低、中、高剂量组。给以相应药物处理后,收集细胞进行相关检测。采用Transwell实验和划痕实验检测各组CFs的迁移情况;采用免疫荧光和Western blot技术检测α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ的表达情况,观察CFs分化为肌成纤维细胞和胶原蛋白的分泌情况;通过qPCR技术和Western blot技术检测miR-489、myd88、NF-κB p65 和 p-NF-κBp65 的表达情况。结果:（1）经 CCK-8 法选定 50μmol/L、100μmol/L 和 200μmol/L 为人参皂苷Re的干预浓度。（2）与Normal组比较,Model组穿过Transwell小室的CFs数量显着增多,迁移距离明显增长（P<0.01）;与Model组相比,低中高剂量人参皂苷Re均能减少穿过Transwell小室的CFs数量,缩短迁移距离（P<0.01）。（3）与 Normal 组比较,Model 组α-SMA、Collagen Ⅰ和 Collagen Ⅲ的荧光强度和蛋白表达量均明显升高（P<0.01）;与Model组相比,低中高剂量人参皂苷Re均能降低α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ的荧光强度和蛋白表达量（P<0.01）。（4）与Normal组比较,Model组miR-489水平显着降低,myd88的表达和p-NF-κB p65/p65比值显着升高（P<0.01）,低中高剂量人参皂苷Re均能抑制这种趋势（P<0.05）。以上检测中低中高剂量人参皂苷Re组之间未发现统计学差异（P>0.05）。结论:人参皂苷Re能够抑制AngⅡ诱导的CFs迁移、表型分化和分泌等生物学行为的改变;其机制可能与调节AngⅡ诱导的CFs中miR-489/myd88/NF-κB信号通路有关。
高毅洁[3]（2021）在《从外泌体角度探讨活血益气方促大鼠心梗后血管新生的作用机制》文中研究表明治疗性血管新生作为缺血性心脏病血运重建的代偿策略之一,对于恢复缺血区的血流供应和及时挽救受损心肌具有重要的意义。而外泌体作为细胞间通讯的新型传导介质,为血管新生的“无细胞”策略提供了新的思路。活血益气方可促进大鼠梗死边缘区心肌组织的血管新生,但其具体作用机制尚不明确。因此,本研究拟以外泌体为切入点,进一步探索活血益气方促心梗后血管新生的作用。目的:观察活血益气方血清外泌体促大鼠心梗后血管新生的作用,及其对缺氧HUVECs增殖、迁移、成管能力和血管新生相关信号通路的影响,进而从外泌体角度揭示活血益气方促心梗后血管新生的作用机制。方法:（1）制备大鼠去离子水血清及活血益气方含药血清,超速离心提取血清外泌体,通过透射电镜观察外泌体形态变化,NanoSight检测外泌体粒径,Western blot检测外泌体标志蛋白CD9、CD63及TSG101的表达进行鉴定。（2）采用左冠状动脉前降支结扎术制备大鼠急性心肌梗死模型,随机分为活血益气方血清外泌体组、去离子水血清外泌体组和模型组,冠脉结扎后立即于心梗交界区的四个方向分别注射活血益气方血清外泌体、去离子水血清外泌体和等量的PBS;假手术组只穿线,不结扎和注射,常规饲养四周。HE染色法观察梗死边缘区心肌组织病理形态学变化;免疫组织化学染色法检测内皮特异性CD31和α-SMA表达以观察梗死边缘区心肌组织微血管内皮细胞的增生情况;小动物超声成像系统检测大鼠心功能改善的情况;全自动生化分析仪检测大鼠血清心肌酶CK、CK-MB及LDH变化;实时荧光定量PCR、Western blot法分别检测梗死边缘区心肌组织HIF-1 α、VEGF及其mRNA的表达。（3）构建HUVECs缺氧细胞模型,分别给予活血益气方血清外泌体、去离子水血清外泌体进行干预,缺氧组给予0.5%无外泌体血清培养;以常氧组为对照,常规换液培养。免疫荧光检测HUVECs与外泌体的融合;CCK-8法、细胞划痕实验、Transwell迁移实验及Matrigel基质胶实验分别检测缺氧HUVECs细胞增殖、迁移和成管能力。实时荧光定量PCR、Western blot法分别检测缺氧HUVECs HIF-1 α、VEGF、FAK、p38、MAPKAPK、HSP27 及其 mRNA 的表达。结果:（1）透射电镜下可观察到外泌体的特征形态为茶托状;粒径分析验证外泌体的大小集中在30-150nm;Westernblot检测出外泌体标志蛋白CD9、CD63及TSG101的表达,证明本实验所提取纯化的样本为外泌体。（2）光镜下可见,假手术组心肌肌束形态完整,心肌细胞排列致密,胞核轮廓清晰;模型组和去离子水血清外泌体组梗死区心肌横纹消失,心肌肌束断裂且排列紊乱,纤维结缔组织增生;活血益气方血清外泌体组梗死区心肌肌束断裂且排列紊乱,胞核不清晰,但范围和程度较模型组和去离子水血清外泌体组有所减轻。（3）与假手术组比较,模型组的LVEF、LVFS降低,LVIDd、LVIDs升高,差异具有统计学意义（P<0.01）。与模型组比较,去离子水血清外泌体组LVEF、LVFS、LVIDd、LVIDs均有上升趋势,但未见统计学意义（P>0.05）;活血益气方血清外泌体组LVEF、LVFS均升高,差异具有统计学意义（P<0.01）,LVIDd、LVIDs有降低趋势,但未见统计学意义（P>0.05）。与去离子水血清外泌体组比较,活血益气方血清外泌体组LVEF、LVFS有上升趋势,LVIDd、LVIDs有降低趋势,但均未见统计学意义（P>0.05）。（4）与假手术组比较,模型组大鼠血清CK、CK-MB及LDH有升高趋势,但无统计学差异（P>0.05）。与模型组相比,去离子水血清外泌体组大鼠血清CK、CK-MB及LDH有降低趋势,但未见统计学差异（P>0.05）;活血益气方血清外泌体组大鼠血清CK、CK-MB及LDH均降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。与去离子水血清外泌体组比较,活血益气方血清外泌体组大鼠血清LDH降低,差异具有统计学意义（P<0.05）;CK及CK-MB有降低趋势,但未见统计学差异（P>0.05）。（5）与假手术组比较,模型组梗死边缘区心肌组织CD31及α-SMA的表达升高,差异具有统计学意义（P<0.01）。与模型组比较,去离子水血清外泌体组梗死边缘区心肌组织CD31及α-SMA的表达有降低趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）;活血益气方血清外泌体组梗死边缘区心肌组织CD31及α-SMA的表达升高,差异具有统计学意义（P<0.01）。与去离子水血清外泌体组比较,活血益气方血清外泌体组梗死边缘区心肌组织CD31及α-SMA的表达升高,差异具有统计学意义（P<0.01）。（6）与假手术组相比,模型组梗死边缘区心肌组织HIF-1 α、VEGF及其mRNA的表达水平均上调,差异具有统计学意义（P<0.01或P<0.05）。与模型组比较,去离子水血清外泌体组梗死边缘区心肌组织HIF-1 α、VEGF及其mRNA的表达水平有下降趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）;活血益气方血清外泌体组梗死边缘区心肌组织VEGF mRNA的表达水平有上升趋势,HIF-1 α mRNA的表达水平有下降趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）;活血益气方血清外泌体组梗死边缘区心肌组织HIF-1和VEGF的表达水平上调,差异具有统计学意义（P<0.01或P<0.05）。与去离子水血清外泌体组相比,活血益气方血清外泌体组梗死边缘区心肌组织HIF-1 α和VEGF mRNA的表达水平有上升趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）;活血益气方血清外泌体组梗死边缘区心肌组织HIF-1 α和VEGF的表达水平上调,差异具有统计学意义（P<0.01）。（7）与常氧组比较,缺氧组细胞增殖减少,差异具有统计学意义（P<0.01）。与缺氧组比较,去离子水血清外泌体组细胞增殖增加,差异具有统计学意义（P<0.05）;活血益气方血清外泌体组细胞增殖增加,差异具有统计学意义（P<0.01）。与去离子水血清外泌体组比较,活血益气方血清外泌体组细胞增殖,但未见统计学差异（P>0.05）。（8）与常氧组比较,缺氧组细胞迁移面积百分比及迁移的面积减少,差异具有统计学意义（P<0.01）。与缺氧组比较,去离子水血清外泌体组和活血益气方血清外泌体组细胞迁移百分比有增多的趋势,但无统计学差异（P>0.05）。与缺氧组比较,去离子水血清外泌体组迁移面积有增加的趋势,但无统计学差异（P>0.05）;活血益气方血清外泌体组细胞迁移面积增加,差异具有统计学意义（P<0.05）。与去离子水血清外泌体组比较,活血益气方血清外泌体组细胞迁移百分比有增多的趋势,但无统计学差异（P>0.05）;细胞迁移面积增多,差异具有统计学意义（P<0.01）。（9）与常氧组比较,缺氧组细胞形成新生血管的长度明显减少,差异具有统计学意义（P<0.05）。与缺氧组比较,去离子水血清外泌体组和活血益气方血清外泌体组形成新生血管的长度增加,差异具有统计学意义（P<0.05）。与去离子水血清外泌体组比较,活血益气方血清外泌体组形成新生血管的长度增加,但未见统计学差异（P>0.05）。（10）与常氧组比较,缺氧组细胞HIF-1 α和VEGF mRNA的表达水平上调,差异具有统计学意义（P<0.01）;HIF-1 α表达水平下调,差异具有统计学意义（P<0.05）;VEGF表达下调,但未见统计学差异（P>0.05）。与缺氧组比较,去离子水血清外泌体组细胞HIF-1 α和VEGF mRNA的表达水平上调,差异具有统计学意义（P<0.01）;HIF-1 α和VEGF的表达水平有下降趋势,但未见统计学差异（P>0.05）。与缺氧组比较,活血益气方血清外泌体组细胞HIF-1α、VEGF及其mRNA的表达水平均上调,差异具有统计学意义（P<0.01或P<0.05）。与去离子水血清外泌体组相比,活血益气方血清外泌体组细胞HIF-1 α mRNA的表达水平下调,差异具有统计学意义（P<0.01）;VEGF mRNA的表达水平上调,差异具有统计学意义（P<0.01）;HIF-1 α和VEGF的表达水平均上调,差异具有统计学意义（P<0.01）。（11）与常氧组比较,缺氧组细胞FAK、p38、MAPKAPK mRNA表达水平均上调,差异具有统计学意义（P<0.01）,HSP27 mRNA表达有上调趋势,但未见统计学差异（P>0.05）;FAK、p38、MAPKAPK及HSP27蛋白表达水平有下调趋势,但未见统计学差异（P>0.05）。与缺氧组比较,去离子水血清外泌体组细胞FAK、p38、MAPKAPK、HSP27 mRNA表达均上调,差异具有统计学意义（P<0.01或P<0.05）,FAK、p38蛋白表达水平有下调趋势,但未见统计学差异（P>0.05）;MAPKAPK、HSP27蛋白表达均下调,差异具有统计学意义（P<0.05）;活血益气方血清外泌体组细胞FAK、p38、MAPKAPK、HSP27 mRNA表达均上调,差异具有统计学意义（P<0.01）,FAK、p38、HSP27蛋白表达均上调,差异具有统计学意义（P<0.05或P<0.01）,MAPKAPK蛋白表达有上调趋势,但未见统计学差异（P>0.05）。与去离子水血清外泌体组比较,活血益气方血清外泌体组细胞FAK、p38、MAPKAPK、HSP27及其mRNA表达均上调,差异具有统计学意义（P<0.01或P<0.05）。结论:活血益气方血清外泌体可促进大鼠心梗后血管新生,减少心肌损伤,改善心功能,还可促进缺氧内皮细胞增殖、迁移及成管能力,其具体的作用机制可能与上调HIF-1α、VEGF及FAK/p38/MAPKAPK/HSP27信号通路的表达有关。
岑团[4]（2021）在《血清VEGF-A、IL-6在急性心肌梗死PCI术中的临床研究》文中进行了进一步梳理目的:探讨急性心肌梗死患者PCI术前后血清VEGF-A和IL-6的水平变化,明确血清VEGF-A和IL-6在急性心肌梗死及PCI术中的临床意义。方法:（1）序贯收集2019年11月～2020年03月因“胸痛、胸闷”至右江民族医学院附属医院胸痛中心确诊为急性心肌梗死且行介入治疗患者46例,在PCI术前采血作为急性心肌梗死组（AMI组）,在PCI术后24小时继续采血作为急性心肌梗死介入治疗组（PCI-AMI组）。同期选择我院44例经选择性冠状动脉造影（CAG）检查确诊为不稳定型心绞痛患者作为不稳定型心绞痛组（UA组）,另选我院41例健康体检者作为对照组（Normal组）;（2）收集病例资料,包括病历号、姓名、性别、年龄、身高、体重、吸烟及饮酒情况、合并症（高血压病、糖尿病）、选择性冠状动脉造影及超声心动图检查结果;（3）收集血液样本,采用双抗体夹心酶联免疫吸附荧光法（ELISA法）分别测定Normal组、UA组、AMI组和PCI-AMI组的血清VEGF-A、IL-6表达水平;（4）统计学分析使用SPSS20.0统计软件,绘图使用Graphprism5.0应用软件。结果:（1）各组性别、年龄、体重、吸烟史、高血压病、hs CRP、CK、CK-MB、TNT-HS、pro BNP、LVEF、Gensini积分等方面的比较差异有统计学意义（P<0.05）,各组身高、饮酒史、糖尿病、Hcy、TBIL、TC、TG、HDL-C、LDL-C、VLDL-C、BUN、Cr、UA、Cys-C等方面的比较差异无统计学意义（P>0.05）;（2）各组血清VEGF-A水平的比较差异有统计学意义（P=0.000）。并且Normal组和UA组的比较差异有统计学意义（P=0.033）,Normal组和AMI组的比较差异有统计学意义（P=0.008）,UA组与AMI组的比较差异无统计学意义（P=1.000）,AMI组与PCI-AMI组的比较差异有统计学意义（P=0.000）;（3）各组血清IL-6水平的比较差异有统计学意义（P=0.000）。并且Normal组和UA组的比较差异无统计学意义（P=0.561）,Normal组和AMI组的比较差异有统计学意义（P=0.000）,UA组与AMI组的比较差异有统计学意义（P=0.000）,AMI组与PCI-AMI组的比较差异无统计学意义（P=0.686）;（4）AMI组的血清VEGF-A和IL-6水平存在正相关（r=0.360,P=0.015）,AMI组的血清VEGF-A水平和Gensini积分存在正相关（r=0.331,P=0.043）,AMI组的血清IL-6水平和Gensini积分存在正相关（r=0.403,P=0.016）;（5）IL-6的ROC曲线下面积为0.737,与0.5相比差异有统计学意义（P=0.001）。TNT-HS的ROC曲线下面积为0.946,与0.5相比差异有统计学意义（P=0.000）;（6）AMI组的血清VEGF-A水平和LVEF存在正相关（r=0.322,P=0.040）,PCI-AMI组的血清VEGF-A水平和LVEF不存在相关性（r=﹣0.222,P=0.180）。结论:（1）血清VEGF-A、IL-6水平与AMI冠脉狭窄程度具有一定相关性;（2）血清IL-6水平与AMI发病相关;（3）AMI患者的血清VEGF-A水平与心功能具有一定相关性,PCI术后血清VEGF-A水平与心功能改善不一定没有相关性。
李记泉[5]（2020）在《针刺联合骨髓间充质干细胞移植改善大鼠急性心肌缺血研究》文中提出目的:本文以急性心肌缺血（Acute Myocardial Ischemia,AMI）大鼠为研究对象,以针刺联合骨髓间充质干细胞（Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BM-MSCs）静脉移植为干预手段,旨在探讨针刺联合BM-MSCs静脉移植改善大鼠急性心肌缺血作用情况,并从炎症反应、细胞凋亡及生长因子变化三个方面探讨了针刺联合BM-MSCs静脉改善大鼠急性心肌缺血的相关分子生物学机制。材料与方法:1.BM-MSCs的分离、培养、传代、鉴定和标记:健康雄性SD大鼠3只（SPF级,4周龄,体重150-160g）,采用7%水合氯醛（5 m L/kg）腹腔注射麻醉,浸泡于75%酒精消毒5min,无菌条件下取胫骨、股骨,PBS缓冲液冲洗出骨髓制成单细胞悬液,离心后接种于培养瓶,放置于培养箱中采用全骨髓贴壁法培养,及时更换培养基,待细胞铺满培养瓶底部并融合成单层时,用0.25%胰蛋白酶消化后,按1:2传代培养,显微镜观察细胞形态变化,取第三代细胞采用流式细胞仪检测细胞表面标记（CD29、CD73、CD90、CD44、CD45）,并取第三代细胞Brd U标记后采用荧光显微镜观察阳性细胞标记率。2.AMI大鼠模型的制备:60只健康雄性SD大鼠,腹腔注射7%水合氯醛（5 m L/kg）麻醉,通过结扎冠状动脉左前降支复制AMI大鼠模型,将存活的大鼠随机分为模型组、干细胞组、针刺组、针刺联合干细胞组,每组10只;同时另有15只大鼠仅在相同部位穿刺手术缝合线而不结扎,随机挑选术后存活大鼠10只作为假手术组。3.针刺联合BM-MSCs静脉移植干预AMI大鼠:造模结束后1小时,干细胞组、针刺联合干细胞组大鼠经尾静脉注射0.5ml的BM-MSCs（2×106个/ml）,同时其余各组注射同等剂量的生理盐水。对针刺组、针刺联合干细胞组大鼠采取电针双侧内关、心俞穴,刺入皮下深度2-3mm,疏密波,频率2Hz,强度2m A左右,以局部肌肉出现轻度震颤收缩为度,留针30min,24h治疗一次,共治疗10次;其他各组不针刺,但在同时同地以同样方式进行抓取和固定。期间观察各组大鼠体重、毛发、体态、饮食、二便、运动等一般情况。治疗结束后检测各组大鼠心电图、心脏超声,随即处死各组大鼠,取腹主动脉全血,分离出血清备用;同时快速取出心脏,生理盐水冲洗干净,每组随机挑选1个心脏样本,在缺血区域切薄片5片,用于大鼠心肌缺血面积的测定,其他心脏样本—80℃超低温冰箱冻存备用。本文分两个部分讨论针刺联合BM-MSCs静脉移植改善大鼠急性心肌缺血作用情况,并从炎症反应、细胞凋亡及生长因子变化三个方面探讨了针刺联合BM-MSCs静脉改善大鼠急性心肌缺血的相关分子生物学机制。（1）针刺联合BM-MSCs移植改善大鼠AMI作用研究观察BM-MSCs传代培养时的形态学特征与变化,分析BM-MSCs的鉴定和标记结果,采集大鼠心电图和心脏超声数据并分析,采用氯化三苯基四氮唑（triphenyltetrazolium chloride,TTC）染色法测定AMI后各组大鼠的心肌缺血面积。（2）针刺联合BM-MSCs移植改善大鼠AMI相关分子机制研究苏木精-伊红（Hematoxylin-eosin staining,HE）染色法检测AMI后各组大鼠心肌细胞形态和炎症浸润情况;蛋白质印迹法（Western Blot,WB）技术检测大鼠心肌组织Bcl-2、Bax、Caspase-3、NF-κB、VEGF、b-FGF、TGF-β蛋白的相对表达量;酶联免疫吸附试验（Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA）技术检测大鼠心肌TNF-a、IL-1、IL-6、IL-8、IL-10蛋白的相对表达量。结果:1.与假手术组比较,模型组大鼠LVDd、LVDs明显升高（P<0.01）,而LVEF、LVFS明显降低（P<0.01）;与模型组比较,干细胞组、针刺组、针刺联合干细胞组大鼠大鼠LVDd、LVDs明显降低（P<0.01）,而LVEF、LVFS明显升高（P<0.01）;与干细胞组比较,针刺组大鼠LVDd、LVDs、LVEF、LVFS无明显差异（P>0.05）;与针刺组比较,针刺联合干细胞组大鼠LVDd、LVDs明显降低（P<0.01）,而LVEF、LVFS明显升高（P<0.01）。2.假手术组大鼠未见心肌缺血;与假手术组比较,模型组大鼠心肌缺血面积明显升高（P<0.01）,缺血区面积占左心室总面积的18.39%;与模型组比较,干细胞组、针刺组、针刺联合干细胞组大鼠心肌缺血面积比例均明显降低（P<0.01）;与干细胞组比较,针刺组大鼠心肌缺血面积比例无明显变化,针刺联合干细胞组大鼠心肌缺血面积比例均明显降低（P<0.01）;与针刺组比较,针刺联合干细胞组大鼠心肌缺血面积明显高于针刺组、干细胞组（P<0.01）。3.与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织中NF-κB、TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8相对表达量明显升高（P<0.01）;与模型组比较,干细胞组、针刺组、针刺联合干细胞组大鼠心肌组织中NF-κB、TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8相对表达量明显降低（P<0.01）;与干细胞组比较,针刺组、针刺联合干细胞组大鼠心肌组织中NF-κB、TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8相对表达量明显降低（P<0.01或P<0.05）;与针刺组比较,针刺联合干细胞组大鼠心肌组织中NF-κB、TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8相对表达量明显降低（P<0.01）。4.与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织中IL-10相对表达量明显降低（P<0.01）;与模型组比较,干细胞组、针刺组、针刺联合干细胞组大鼠心肌组织中IL-10相对表达量明显升高（P<0.01）;与干细胞组比较,针刺组大鼠心肌组织中IL-10相对表达量无明显变化（P>0.05）,针刺联合干细胞组大鼠心肌组织中IL-10相对表达量明显升高（P<0.01）;与针刺组比较,针刺联合干细胞组大鼠心肌组织中IL-10相对表达量明显升高（P<0.01）。5.与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织中Bax、Caspase-3相对表达量明显升高（P<0.01）;与模型组比较,干细胞组、针刺组、针刺联合干细胞组大鼠心肌组织中Bax、Caspase-3相对表达量明显降低（P<0.01）;针刺联合干细胞组大鼠心肌组织中Bax、Caspase-3相对表达量明显低于针刺组、干细胞组（P<0.01）。6.与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织中Bcl-2相对表达量明显降低（P<0.01）;与模型组比较,干细胞组、针刺组、针刺联合干细胞组大鼠心肌组织中Bcl-2相对表达量明显升高（P<0.01）;与干细胞组比较,针刺组大鼠心肌组织中Bcl-2相对表达量无明显变化（P>0.05）,针刺联合干细胞组大鼠心肌组织中Bcl-2相对表达量明显升高（P<0.01）;与针刺组比较,针刺联合干细胞组大鼠心肌组织中Bcl-2相对表达量明显升高（P<0.01）。7.与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织中VEGF、b-FGF、TGF-β相对表达量明显升高（P<0.01）;与模型组比较,干细胞组、针刺组、针刺联合干细胞组大鼠心肌组织中VEGF、b-FGF、TGF-β相对表达量明显升高（P<0.01）;与干细胞组比较,针刺组、针刺联合干细胞组大鼠心肌组织中VEGF、b-FGF、TGF-β相对表达量明显升高（P<0.01）;与针刺组比较,针刺联合干细胞组大鼠心肌组织中VEGF、b-FGF、TGF-β相对表达量明显升高（P<0.01）。结论:1.针刺联合BM-MSCs移植能够显着改善AMI大鼠心电图和心脏超声变化,降低AMI大鼠左心室心肌缺血面积,提高AMI大鼠心脏功能,为临床治疗本病提供了新思路。2.针刺联合BM-MSCs移植能够通过下调AMI大鼠NF-κB表达,降低炎症因子TNF-a、IL-1、IL-6、IL-8水平,以及上调抑炎因子IL-10水平,减轻AMI后过度表达的炎症反应,从而减轻心肌细胞坏死;通过调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3表达,从而减少AMI后心肌细胞凋亡;通过调节细胞生长因子VEGF、b-FGF、TGF-β表达,诱导内皮细胞形成,从而改善心肌供血。
吴丹丹[6]（2020）在《活血益气方干预外泌体miRNA促心梗后血管新生的作用机制研究》文中认为目的:以外泌体为切入点,从外泌体miRNA角度探索活血益气方对缺血性心脏病治疗性血管生成的作用机制。方法:制备大鼠急性心肌梗死模型,并给予活血益气方连续干预4周,采用免疫组织化学染色法检测内皮特异性CD31和α-SMA的表达,观察梗死边缘区微血管内皮细胞增生的情况;腹主动脉取血,提取血清外泌体,透射电镜观察外泌体形态变化,NanoSight检测外泌体粒径,流式细胞术检测外泌体标志蛋白CD63、CD81的表达;采用Agilent2100检测外泌体RNA特性;基于illumina技术测序平台进行单端测序,构建miRNA测序文库;结合生物信息学分析方法,筛选差异表达外泌体miRNA,对差异miRNA进行聚类分析,使用热图展示差异miRNA在不同样本间的表达模式;利用miRand数据库对差异miRNA进行靶基因预测,对靶基因进行GO和KEGG富集分析,以判定差异miRNA主要影响的生物学功能或者通路;通过实时荧光定量RT-PCR方法对筛选出的miRNA高通量测序结果进行验证以及检测活血益气方对验证后的差异表达miRNA的影响;采用miRand数据库进行靶基因预测后,进行GO和KEGG富集分析,对富集于特异性通路的靶基因进行蛋白互作分析,以判定差异miRNA主要影响的生物学功能及通路。结果:1.以CD31检测梗死边缘区心肌组织微血管密度（MVD）,模型组与假手术组比较,梗死边缘区心肌组织MVD数目增多（P<0.01）,差异有统计学意义;活血益气方组与模型组比较,梗死边缘区心肌组织MVD增多（P<0.05）,差异有统计学意义。2.以α-SMA检测梗死边缘区心肌组织微血管密度（MVD）,模型组与假手术组比较,梗死边缘区心肌组织MVD数目增多（P<0.01）,差异有统计学意义;活血益气方组与模型组比较,梗死边缘区心肌组织MVD增多（P<0.05）,差异有统计学意义。3.在透射电镜下观察,外泌体呈杯状结构或茶托状,直径在100 nm左右;使用NTA检测显示,外泌体粒径峰值为134.2 nm,峰形尖锐,无明显杂峰;流式细胞仪检测显示,假手术组、模型组及活血益气组外泌体标志蛋白CD63、CD81均有表达。4.与假手术组相比,模型组大鼠血清外泌体存在22个显着差异表达的miRNA。其中 novel 1007mature、novel 10star、novel 1147mature>novel 1170mature、novel208mature、novel238mature、novel335mature、novel407mature、novel539mature、novel65mature、novel898mature>novel 1221mature、novel921mature、novel951mature、mo-miR-484、rno-miR-615、rno-miR-676 表达下调;novel1073mature、novel130mature、novel31 1mature、novel738mature、novel867mature>novel928mature、novel903mature、mo-miR-181d-5p表达上调。使用miRanda数据库对差异miRNA进行靶基因预测,共预测到7002个靶基因。利用DAVID数据库对miRNA靶基因进行了 GO功能分析和KEGG通路分析。GO功能富集共有3681条,包括742条分子功能和2577条生物过程、362条细胞成分;KEGG富集结果显示共有1 13条通路。5.对22条差异miRNA进行筛选,筛选条件（P<0.01;FC（abs）>2;优先选择已知miRNA进行验证）,共有1 1条差异miRNA进行实时荧光定量PCR验证。经实时荧光定量PCR验证,共有6个miRNA PCR验证结果为阳性;与假手术组相比,模型组 novel539mature、nove1921mature、novel951mature、rno-miR-484 表达降低,novel1073mature、mo-miR-181d-5p表达升高。假手术组与模型组差异基因的表达水平趋势与高通量测序所得数据趋势一致。6.与模型组相比,活血益气方组 novel539mature、novel921mature、novel95 1mature、mo-miR-484 表达升高,novel1073mature、rno-miR-181d-5p 表达下降。使用 miRanda数据库对差异miR-484进行靶基因预测,共预测到357个靶基因。利用DAVID数据库对miR-484靶基因进行了GO功能分析和KEGG通路分析。GO功能富集共有60条,包括19条分子功能和27条生物过程、14条细胞成分;KEGG富集结果显示共有4条通路,其中钙信号通路与血管新生密切相关;使用String数据库对富集于钙信号通路靶基因做蛋白互作分析中,RYR2及CACNA1D与其他蛋白互作关系最为密切。结论:活血益气方能够促进心肌梗死后血管新生,推测其可能通过调控外泌体miR-484靶向RYR2,参与VEGF诱导的内皮细胞的钙信号传导,从而促进心肌梗死后血管新生。
曾靖[7]（2020）在《脑心通胶囊通过LXRα抑制NOX/ROS/TNF-α通路改善心梗后心室重构的研究》文中认为目的:确证肝X受体α（LXRα）通过抑制NOX/ROS/TNF-α信号通路改善心肌梗死后心室重构;观察脑心通胶囊通过抑制NOX/ROS/TNF-α信号通路改善心室重构和具有上调LXRα mRNA表达的作用;揭示脑心通胶囊通过上调LXRα进而抑制NOX/ROS/TNF-α信号通路从而改善心室重构。方法:1.通过冠状动脉结扎法建立急性心肌梗死大鼠模型。实验一:将大鼠随机分为假手术组、模型组、LXRα激动剂组、LXRα抑制剂组,每组8只。实验二:将大鼠随机分为假手术组、模型组、他汀组、脑心通低剂量组、脑心通中剂量组、脑心通高剂量组,每组8只。实验三:将大鼠随机分为假手术组、模型组、脑心通组、脑心通+LXRα抑制剂组,每组8只。假手术组和模型组给予生理盐水2mL/d灌胃,LXRα激动剂组给予LXRα激动剂SR9238[30mg/kg·d)]灌胃,LXRα抑制剂组给予LXRα抑制剂GSK2033[30mg/kg·d)]灌胃,他汀组给予阿托伐他汀钙片[5mg/kg·d)]灌胃,脑心通低、中、高剂量组分别给予剂量为[0.19g/kg·d)]、[0.38g/kg-d)]、[0.76g/（kg·d）]的脑心通溶液灌胃4周,脑心通+LXRα抑制剂组给予脑心通胶囊[0.38g/kg·d)]+LXRα抑制剂GSK2033[30mg/kg-d)]灌胃,时间为4周。2.检测指标:实验一、实验二、实验三4周后采用心脏彩超检查大鼠左室舒张末期内径（LVIDd）、左室收缩末期内径（LVIDs）、左室射血分数（LVEF）、短轴收缩率（FS）、每搏输出量（SV）、心输出量（CO）。HE染色观察心肌组织病理变化。Masson染色观察心肌纤维化程度。RT-QPCR检测心肌组织LXRα mRNA、还原型辅酶Ⅱ氧化酶（NOX）mRNA、活性氧（ROS）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA、Ⅰ型胶原（COLⅠ）mRNA、Ⅲ 型胶原（COL Ⅲ）mRNA 的表达。结果:1.实验一:①与假手术组比较,模型组和LXRα抑制剂组心脏超声示LVIDd、LVIDs显着升高（P<0.01）,EF、FS、SV、CO显着降低（P<0.01）,HE染色示心肌细胞大量消失、纤维结缔组织大量增生和炎性细胞浸润,masson染色示胶原纤维增生、心肌纤维化,心肌组织LXRα mRNA表达显着降低（P<0.01）,NOX mRNA、ROS、TNF-α mRNA、COL Ⅰ mRNA、COL Ⅲ mRNA表达显着增加（P<0.01）。②与模型组和LXRα抑制剂组比较,LXRα激动剂组心脏超声示LVIDd、LVIDs显着降低（P<0.01）,EF、FS、SV、CO显着升高（P<0.01）,HE染色示纤维结缔组织显着减少,masson染色示胶原纤维显着减少,心肌组织LXRα mRNA表达显着升高（P<0.01）,NOX mRNA、ROS、TNF-α mRNA、COLⅠ mRNA、COL Ⅲ mRNA表达显着降低（P<0.01）。2.实验二:①与假手术组比较,模型组和脑心通低剂量组心脏超声示LVIDd、LVIDs显着升高（P<0.01）,EF、FS、SV、CO显着降低（P<0.01）,HE染色示心肌细胞大量消失、纤维结缔组织大量增生和炎性细胞浸润,masson染色示胶原纤维增生、心肌纤维化,心肌织LXRαmRNA表达显着降低（P<0.01）,NOX mRNA、ROS、TNF-αmRNA、COLⅠmRNA、COLⅢmRNA表达显着增加（P<0.01）。②与模型组和脑心通低剂量组比较,他汀组、脑心通中剂量组和脑心通高剂量组心脏超声示LVIDd、LVIDs显着降低（P<0.01）,EF、FS、SV、CO显着升高（P<0.01）,HE染色示纤维结缔组织显着减少,masson染色示胶原纤维显着减少,心肌组织LXRα mRNA表达显着升高（P<0.01）,NOX mRNA、ROS、TNF-α mRNA、COLⅠ mRNA、COLⅢ mRNA 表达显着降低（P<0.01）。3.实验三:①与假手术组比较,模型组和脑心通+LXRα抑制剂组心脏超声示LVIDd、LVIDs显着升高（P<0.01）,EF、FS、SV、CO显着降低（P<0.01）,HE染色示心肌细胞大量消失、纤维结缔组织大量增生和炎性细胞浸润,masson染色示胶原纤维增生、心肌纤维化,心肌组织LXRαmRNA表达显着降低（P<0.01）,NOX mRNA、ROS、TNF-αmRNA、COL Ⅰ mRNA、COLⅢ mRNA表达显着增加（P<0.01）。②与模型组和脑心通+LXRα抑制剂组比较,脑心通组心脏超声示LVIDd、LVIDs显着降低（P<0.01）,EF、FS、SV、CO显着升高（P<0.01）,HE染色示纤维结缔组织显着减少,masson染色示胶原纤维显着减少,心肌组织LXRα mRNA表达显着升高（P<0.01）,NOX mRNA、ROS、TNF-α mRNA、COL Ⅰ mRNA、COL Ⅲ mRNA 表达显着降低（P<0.01）。结论:1.LXRα可以通过抑制NOX/ROS/TNF-α信号通路改善心肌梗死后心室重构。2.脑心通胶囊通过抑制NOX/ROS/TNF-α信号通路改善心室重构和具有上调LXRαmRNA表达进而改善心肌梗死后心室重构的作用。3.脑心通胶囊通过上调LXRα进而抑制NOX/ROS/TNF-α信号通路从而改善心室重构。
史金玉[8]（2020）在《柴胡加龙骨牡蛎汤治疗心肌梗死合并焦虑的炎性机制研究》文中进行了进一步梳理随着经济的迅速发展和生活节奏的日益加快,双心疾病的患病率和死亡率逐年升高,寻找有效的治疗策略至关重要。本团队前期研究表明柴胡加龙骨牡蛎汤可以有效改善冠心病合并焦虑患者的临床心绞痛症状、中医证候,减轻患者焦虑状态,提高患者生活质量,且无明显不良反应,但是其作用机制尚不明确。研究发现,NF-κB信号介导的炎症反应是冠心病发展进程中的关键因素;且NF-κB在神经元中具有活性,参与神经细胞发育、生长和凋亡过程,在焦虑状态中发挥着重要作用。基于以上背景,本文以心肌梗死合并焦虑作为双心疾病的代表,从NF-κB信号介导的炎症反应探讨柴胡加龙骨牡蛎汤治疗双心疾病的部分机制。目的:探讨柴胡加龙骨牡蛎汤治疗心肌梗死合并焦虑小鼠的部分炎性机制,为临床治疗双心疾病提供理论依据。方法:采用冠状动脉前降支结扎联合不确定空瓶刺激法建立C57BL/6J小鼠心肌梗死合并焦虑模型,将造模成功的小鼠随机分为模型组、假手术组、中药组（予柴胡加龙骨牡蛎汤颗粒剂干预）,每组8只,每天灌胃给药1次,连续7d。通过心脏超声评价小鼠心功能,心肌HE染色观察心肌病理形态改变,心肌Masson染色观察心肌纤维化程度;旷场试验和高架十字迷宫试验评价小鼠的活动能力和焦虑状态;ELISA法检测外周血IL-1β、TNF-α、IL-6的含量,RT-PCR检测心肌梗死边缘区中IL-1β、TNF-α、NF-κBp65mRNA表达含量,WB检测心肌梗死边缘区NF-κBp65的蛋白表达水平。结果:1.心脏结构功能方面心脏超声:与假手术组相比,模型组小鼠的左室射血分数和短轴缩短率明显降低,左室舒张末期容积和收缩末期容积明显扩大（P<0.01）;与模型组相比,中药组小鼠的左室射血分数和短轴缩短率明显提高,左室舒张末期容积和收缩末期容积明显缩小（P<0.01）。HE染色:假手术组小鼠的心肌细胞结构基本正常,细胞质染色均匀,细胞核染清晰,肌纤维排列整齐规则;模型组小鼠的心肌细胞大量坏死,核碎裂,心肌肌纤维断裂;中药组小鼠心肌细胞结构破坏及纤维断裂减轻。Masson染色:假手术组小鼠心肌细胞排列整齐,未见明显胶原纤维;模型组小鼠心肌细胞排列明显紊乱,组织间质可见显着胶原纤维及炎性浸润;中药组小鼠心肌细胞排列紊乱减轻,胶原纤维减少,心肌纤维化程度减轻。2.焦虑状态方面旷场试验:与假手术组相比,模型组小鼠的水平运动得分和垂直运动得分降低（P<0.01）;与模型组相比,中药组小鼠的水平运动得分和垂直运动得分增加（P<0.01）。高架十字迷宫试验:与假手术组相比,模型组小鼠进入开放臂次数百分比和开放臂停留时间百分比减少（P<0.01）;与模型组相比,中药组小鼠进入开放臂次数百分比和开放臂停留时间百分比增加（P<0.01）。3.NF-κB介导的炎症反应ELISA法检测外周血炎症因子:与假手术组相比,模型组小鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达含量升高（P<0.01）;与模型组相比,中药组小鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达含量降低（P<0.01）。RT-PCR检测心肌梗死边缘区炎症因子mRNA表达水平:与假手术组相比,模型组小鼠心肌组织中IL-1β、TNF-α、NF-κBp65mRNA表达水平升高（P<0.01）;与模型组相比,中药组小鼠心肌组织中IL-1β、TNF-α、NF-κBp65mRNA表达水平降低（P<0.01）。WB检测心肌梗死边缘区NF-κBp65的蛋白表达水平:与假手术组相比,模型组小鼠心肌组织中NF-κBp65蛋白表达含量升高（P<0.01）;与模型组相比,中药组小鼠心肌组织中NF-κBp65蛋白表达含量降低（P<0.01）。结论:1.柴胡加龙骨牡蛎汤可以改善心肌梗死合并焦虑小鼠的心脏功能和形态结构变化,减轻心肌纤维化;2.柴胡加龙骨牡蛎汤可以改善心肌梗死合并焦虑小鼠的焦虑样行为;3.柴胡加龙骨牡蛎汤可以减轻心肌梗死合并焦虑小鼠NF-κB介导的炎症反应;4.心肌梗死可能通过加重NF-κB介导的炎症反应,进而促进小鼠焦虑程度;5.柴胡加龙骨牡蛎汤可能通过调控NF-κB介导的炎症反应,进而改善心肌梗死合并焦虑小鼠的心功能和焦虑程度。
周袁申[9]（2020）在《基于调节ACE轴和ACE2轴探讨益气活血法改善心梗后心室重构的机制研究》文中进行了进一步梳理目的:心肌梗死是严重危害人类健康的重要疾病,心梗后心肌纤维化是心梗后心室重构的关键。前期研究发现,益气活血中药通冠胶囊具有抑制心梗后心肌纤维化,改善心梗后心功能和左室重构的作用,但其机制尚未明确。新近研究发现心脏RAS系统的ACE-AngⅡ-AT1R轴促进而ACE2-Ang（1-7）-Mas轴抑制心梗后心肌纤维化;正由于心梗后RAS系统的ACE-AngⅡ-AT1R轴和ACE2-Ang（1-7）-Mas轴发生失衡,心脏发生纤维化和心室重构。因此,恢复RAS系统的平衡对改善心梗后心肌纤维化和心室重构意义重大。由此,我们设想通冠胶囊通过恢复ACE-AngⅡ-AT1R轴和ACE2-Ang（1-7）-Mas轴的平衡,进而抑制NOX2-ROS-Rock2信号通路,减少心肌成纤维细胞胶原的合成,最终抑制心梗后心室重构;为心梗后心室重构“气虚血瘀”理论提供依据;为心梗后心室重构的防治提供新思路和药物作用新靶点。方法:采用SD大鼠建立结扎冠状动脉左前降支的急性心肌梗死后心室重构模型,分为5组:对照组、模型组、手术组、手术+通冠胶囊组、手术+通冠胶囊+A779组、手术+ACEI（卡托普利）组;运用小动物超声检测和评估大鼠心脏形态及功能变化;检测大鼠全心重/体重指数、羟脯氨酸含量了解心脏纤维化情况;HE染色观察心脏病理,Masson染色观察心肌纤维化的程度;免疫组化及免疫印迹检测胶原蛋白（collagen）的表达情况,评估大鼠心肌纤维化和心室重构情况。通过放射免疫分析法或ELISA法检测各实验组血清和心脏组织中AngⅡ和Ang（1-7）的含量,免疫印迹检测ACE、AT1R、ACE2、Mas的含量,免疫组化检测ACE和ACE2的表达水平。免疫印迹检测NOX2、Rock2蛋白的表达;检测ROS（H202）的表达水平。体外细胞实验首先利用AngⅡ联合通路分子抑制剂干预细胞;观察AngⅡ是否通过激活NOX2-ROS-Rock2通路促进成纤维细胞合成胶原,Ang（1-7）能否抑制AngⅡ的上述作用;阐明NOX2-ROS-Rock2通路为RAS系统调节心肌成纤维细胞合成胶原的下游信号通路;免疫印迹检测ACE、AT1R、ACE2、Mas的含量,同时检测NOX2-ROS-Rock2信号通路各分子及胶原的表达情况。结果:相比于对照组,通冠胶囊能够使心肌梗死大鼠心脏心肌梗死面积减小,心脏心肌纤维化降低,使心脏收缩和舒张功能都有较明显的改善。同时还能使心肌细胞凋亡减少,证实RAS系统参与了心肌梗死的途径,而通冠胶囊能够改善心肌细胞凋亡的情况。手术+通冠胶囊组能够有效降低冠状动脉左前降支结扎后的collagen1蛋白表达量,说明了通冠胶囊与ACEI的作用相仿,能够使心肌纤维化的表达降低,同时还能使心肌梗死大鼠的血清和心肌细胞AngⅡ蛋白水平下调同时Ang（1-7）蛋白水平发生明显上调,差异具有统计学意义（P<0.05）,说明通冠胶囊能够产生双向调节的作用。在细胞水平上,通冠胶囊还能够有效降低冠状动脉左前降支结扎后的NOX2、Rock2蛋白的表达量,还能使心肌细胞ROS（H202）含量降低。通过免疫印迹实验发现:AngⅡ+通冠胶囊组、AngⅡ+丹参酮ⅡA组的Collagenl蛋白表达量发生显着下调。同时与AngⅡ组相比,AngⅡ+DPI组、AngⅡ+NAC 组、AngⅡ+Y27632 会使 AT1R 的表达下调,AngⅡ+Ang（1-7）组以及AngⅡ+通冠胶囊组的AT1R蛋白表达量也会发生显着下调。这个情况进一步说明了当氧化应激通路被抑制后,AngⅡ有进一步加重心肌纤维化的情况,而通冠胶囊能够对ACE与ACE2轴进行双向调节,改善心肌梗死后心肌纤维化及心室重构的进程。结论:通冠胶囊通过RAS信号通路的调节作用,其中对ACE-AngⅡ-AT1R轴具有抑制作用和同时ACE2-Ang（1-7）-Mas轴具有促进作用。从而起到缓解急性心肌梗死后心肌纤维化和心室重构的影响。针对该机制,本研究通过观察通冠胶囊在延缓或改善心肌梗死后心室重构的影响,探讨出益气活血中药通冠胶囊能够双向调节RAS信号通路,使氧化应激减缓,从而改善胶原蛋白的合成。这些发现为进一步深入探索通冠胶囊作为一种治疗心室重构的有效药物提供了理论基础,也对动脉系统疾病的影响是未来有意义的研究方向。
张妮[10]（2019）在《降香新黄酮latifolin促进骨髓间充质干细胞对缺血性心脏病心肌修复作用及机制研究》文中研究说明目的:骨髓间充质干细胞（Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BM-MSCs）移植治疗心肌梗死被认为是一种有效的治疗方法,然而炎性微环境导致移植的BM-MSCs生存率和分化率低,限制了其疗效,提高BM-MSCs的生存率和分化能力以提高BM-MSCs移植治疗心肌梗死疗效十分重要。Latifolin是从中药降香中分离出来的单体化合物,研究报道表明latifolin具有抗炎作用,前期研究发现latifolin对心肌细胞具有保护作用,可降低心肌组织炎细胞浸润,提高心功能。因此,推测latifolin可通过改善炎性微环境提高BM-MSCs生存率和增强BM-MSCs定向分化能力,进而提高BM-MSCs移植治疗心肌梗死疗效。本研究探索latifolin对BM-MSCs生存率和心肌定向分化的作用,以达到增强BM-MSCs移植治疗缺血性心脏病目的,为心肌梗死细胞治疗和心肌再生研究奠定基础。研究方法:1.采用全骨髓提取法收集大鼠BM-MSCs,倒置显微镜观察培养细胞形态;采用流式细胞仪检测BM-MSCs表面抗原CD29、CD90、CD34和CD45。2.采用噻唑蓝（Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium,MTT）法和Annexin V-FITC/PI双染法测定缺血、缺氧和炎性微环境对BM-MSCs活力和凋亡的影响;采用RT-PCR和酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测缺血、缺氧和炎症环境对BM-MSCs炎性因子表达和分泌影响;MTT法和Annexin V-FITC/PI双染法测定latifolin对BM-MSCs的活力和凋亡作用;ELISA测定latifolin对BM-MSCs炎性因子的影响。3.将BM-MSCs分为正常组、5氮杂胞苷（5-azacytidine,5Aza）诱导组、5Aza+latifolin诱导组和latifolin诱导组,显微镜下观察BM-MSCs向心肌细胞分化的形态学变化;RT-PCR检测心脏特异性基因转录因子GATA4、NKX2.5和肌细胞增强因子-2C（myocyte enhancer factor2C,MEF2C）的表达;免疫荧光染色检测心脏特异性蛋白α-肌动蛋白（alpha sarcomeric actin,a-actinin）和心肌肌钙蛋白I（cardiac troponin I,cTnI）的表达;透射电镜观察各组骨髓间充质干细胞分化的超微结构。4.（1）体外建立BM-MSCs和H9c2共培养体系,实验分组分别为:H9c2正常组;H9c2模型组;H9c2+MSC共培养组;H9c2+MSC共培养+药物（2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL）组,对共培养体系进行缺血缺氧和炎症造模处理,经latifolin干预后,采用Annexin V/PI测定H9c2凋亡情况;（2）冠状动脉左前降支结扎建立急性心肌梗死模型,实验共分成9组:假手术组、MI模型组、MSC移植组、MSC移植+latifolin（25,50,100 mg/kg）组、latifolin（25,50,100 mg/kg）组,PowerLab监测冠状动脉左前降支结扎前后心电图ST段变化以评价造模情况;检测给药7d血清中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、肌酸激酶同工酶MB（creatine kinase isoenzyme MB,CK-MB）含量以评价心肌损伤情况;心脏超声评价心功能;TTC染色法测定梗死面积;HE染色评价心肌病理损伤;Masson染色评价心肌胶原纤维化;免疫荧光法检测BM-MSCs生存率和分化情况;免疫组化测定CD68和MPO阳性表达数量;WB检测心肌组织中IL-6、p-NF-κB、β-catenin和缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）蛋白表达情况。结果:1.倒置显微镜观察BM-MSCs呈纺锤形,放射性及螺旋生长;流式细胞仪检测BM-MSCs表面抗原CD29、CD90、CD34和CD45表达率分别为:99.8%、99.5%、0.2%、4.7%。2.（1）MTT和Annexin V-FITC/PI检测结果显示,氧糖剥夺6h和12h后细胞活力明显增强,氧糖剥夺24h后细胞活力显着降低,在氧糖剥夺+肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor,TNF-α）及内毒素（lipopolysaccharide,LPS）条件下6、12、24h细胞活力显着降低;（2）ELISA和RT-PCR结果显示,氧糖剥夺6、12 h降低上清中白细胞介素-6（interleukin 6,IL-6）、白细胞介素-10（interleukin 10,IL-10）水平和细胞中IL-6、IL-10、TNF-α、核转录因子κB（nuclear factor kappa B,NF-κB）基因表达;氧糖剥夺+TNF-α及LPS条件6、12 h显着升高上清中IL-6、TNF-α水平和细胞中IL-6、TNF-α、NF-κB基因表达;（3）MTT和Annexin V/PI结果显示,10μg/mL剂量下latifolin显着增加氧糖剥夺+TNF-α条件下BM-MSCs活力,显着降低其凋亡,latifolin显着降低氧糖剥夺+TNF-α条件的BM-MSCs分泌的IL-6、TNF-α水平。3.（1）BM-MSCs在单独用5Aza诱导和latifolin联合5Aza诱导2周后表现出形态上变化,其细胞膨大凸起,在第3周和第4周细胞间出现连接,形成肌管样结构;（2）RT-PCR结果显示,5μg/mL latifolin联合5Aza诱导组显着升高BM-MSCs特异性基因GATA4,NKX2.5和MEF2C表达;（3）免疫荧光染色的结果显示,5Aza诱导组及latifolin联合5Aza诱导组存在明显的心脏特异性蛋白质a-actinin和cTnI的表达;（4）透射电镜结果显示,latifolin联合5Aza诱导组的BM-MSCs分化后细胞质中有明显的心房颗粒、肌丝、丰富的线粒体和粗面内质网。4.（1）latifolin促进BM-MSCs修复受损心肌细胞的作用:Annexin V/PI测定结果显示,与正常组比,H9c2模型组细胞凋亡比例显着性升高;与模型组比较,H9c2+MSC共培养组、H9c2与MSC共培养+药物（10μg/mL、5μg/mL、2.5μg/mL）组均能显着性降低H9c2凋亡比例;与H9c2+MSC共培养组比较,H9c2+MSC+10μg/mL给药组能显着降低H9c2凋亡。（2）latifolin促进BM-MSCs移植治疗心肌梗死作用及机制研究:（1）PowerLab检测结果显示,心肌梗死后心电图有ST段明显抬高表现;（2）给药7d后,MSC+latifolin高剂量组显着降低LDH含量,显着降低CK-MB含量;（3）超声结果显示,MSC+latifolin高剂量组显着升高左室射血分数（left ventricular ejection fraction,LVEF）、左室缩短分数（Left ventricular shortening fraction,LVFS）和心输出量（Cardiac output,CO）,显着提高心功能;（4）TTC染色结果显示,模型组梗死面积达到39%,单独MSC组及MSC与latifolin联合组均能显着性降低梗死面积;（5）HE染色结果显示,MSC+latifolin高剂量组明显改善梗死周边炎症细胞浸润和肌丝溶解情况;（6）Masson染色结果显示,MI造模后梗死区呈大面积蓝色染色,胶原纤维化明显,MSC+latifolin中、高剂量组显着减少心肌胶原纤维化面积;（7）免疫荧光检测结果显示,MSC+latifolin高剂量组显着增加BM-MSCs在心肌组织中的生存率和分化率;（8）免疫组化测定结果显示,MSC移植组+latifolin低、中、高剂量组和latifolin低、中、高剂量组均能显着降低CD68阳性表达数量,对MPO阳性表达数量无显着影响;（9）WB检测结果显示,MSC+latifolin高剂量组显着降低心肌组织中IL-6、p-NF-κB和HIF-1α蛋白表达,显着升高β-catenin蛋白表达。结论:采用全骨髓提取法获得的细胞为纯度较高的BM-MSCs,降香新黄酮latifolin通过改变炎症微环境显着提高BM-MSCs生存率,latifolin显着促进BM-MSCs向心肌细胞分化,latifolin显着促进BM-MSCs修复受损心肌细胞;经动物实验证实,latifolin通过降低炎性巨噬细胞浸润改善心肌组织中炎性微环境,显着提高在体BM-MSCs移植生存率和心肌细胞分化率,使受损心肌组织明显得到修复,latifolin有效增强BM-MSCs移植治疗心肌梗死效果,其作用机制可能与HIF-1α/NF-κB/β-catenin通路有关。
二、急性心肌梗死大鼠血清血管内皮生长因子含量的变化（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、急性心肌梗死大鼠血清血管内皮生长因子含量的变化（论文提纲范文）
（1）活血温通方联合BMSCs移植改善心梗后缺血缺氧微环境的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 活血温阳类药物治疗冠心病的文献研究 |
| 参考文献 |
| 综述二 中药联合MSCs移植治疗心肌梗死的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一部分 姚魁武教授论治冠心病阳虚证的经验以及发掘 |
| 导师姚魁武活血温通法治疗冠心病的经验总结 |
| 基于中医传承计算平台分析姚魁武教授治疗冠心病阳虚证用药特点 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 活血温通方联合BMSCs移植治疗大鼠急性心梗的疗效评价 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 活血温通方联合BMSCs移植改善大鼠心梗区缺血缺氧微环境的机制研究 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 小结 |
| 创新点与展望 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 查新报告 |
（2）miR-489调控心肌纤维化的机制及人参皂苷Re的干预作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 心肌纤维化研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 人参皂苷Re药理学研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 实验研究 |
| 研究一 miR-489调节心肌纤维化的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1 CFs形态学观察与纯度检测 |
| 2 过表达miR-489抑制CFs分化和分泌 |
| 3 过表达miR-489抑制myd88/NF-κB通路的活化 |
| 4 抑制miR-489促进CFs分化和分泌 |
| 5 抑制miR-489促进myd88/NF-κB通路活化 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 研究二 人参皂苷Re调节心肌梗死后心肌纤维化的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1 人参皂苷Re改善AMI后心脏功能 |
| 2 人参皂苷Re抑制AMI后心肌代偿性肥厚 |
| 3 人参皂苷Re减轻AMI后心肌损伤 |
| 4 人参皂苷Re改善AMI后心脏组织病理学改变 |
| 5 人参皂苷Re抑制AMI后纤维化相关蛋白的表达 |
| 6 人参皂苷R调控AMI后miR-489和myd88 mRNA的表达 |
| 7 人参皂苷Re抑制AMI诱导的myd88/NF-κB通路活化 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 研究三 人参皂苷Re干预AngⅡ诱导CFs生物学行为改变的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1 人参皂苷Re干预CFs的浓度筛选 |
| 2 人参皂苷Re抑制AngⅡ诱导的CFs分化 |
| 3 人参皂苷Re抑制AngⅡ诱导的CFs迁移 |
| 4 人参皂苷R抑制AngⅡ诱导的CFs中胶原蛋白的表达 |
| 5 人参皂苷Re抑制AngⅡ诱导的CFs中myd88/NF-κB通路活化 |
| 6 人参皂苷Re调节CFs中miR-489和myd88 mRNA的表达 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 研究结语 |
| 创新点 |
| 基金项目 |
| 主要仪器设备 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附件 |
（3）从外泌体角度探讨活血益气方促大鼠心梗后血管新生的作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 益气活血法治疗缺血性心脏病的研究进展 |
| 1 益气活血法治疗缺血性心脏病的中医理论基础 |
| 2 益气活血法治疗缺血性心脏病的作用机制 |
| 综述二 外泌体治疗心肌梗死后血管新生的研究进展 |
| 1 外泌体的生物学特征 |
| 2 内源性心脏细胞来源的外泌体与血管新生 |
| 3 外源性干细胞来源的外泌体与血管新生 |
| 4 循环血液来源的外泌体与血管新生 |
| 5 展望 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 实验研究 |
| 第一部分 血清外泌体的提取及鉴定 |
| 实验一 外泌体的提取与鉴定 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 活血益气方血清外泌体对大鼠心梗后血管新生的影响 |
| 实验一 大鼠急性心梗模型的建立 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二 活血益气方血清外泌体对心梗后大鼠心肌损伤及心功能的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验三 活血益气方血清外泌体对梗死边缘区心肌组织CD31、α-SMA表达的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验四 活血益气方血清外泌体对梗死边缘区心肌组织HIF-1α、VEGF及其mRNA的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第三部分 活血益气方血清外泌体促心梗后血管新生的细胞分子机制 |
| 实验一 活血益气方血清外泌体对缺氧HUVECs增殖的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二 活血益气方血清外泌体对缺氧HUVECs迁移的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验三 活血益气方血清外泌体对缺氧HUVECs成管能力的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验四 活血益气方血清外泌体对缺氧HUVECs HIF-1α、VEGF及其mRNA的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验五 活血益气方血清外泌体对缺氧HUVECs VEGF及其信号通路的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（4）血清VEGF-A、IL-6在急性心肌梗死PCI术中的临床研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 实验材料 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 各组临床资料的比较 |
| 2.2 各组血清VEGF-A水平的比较 |
| 2.3 各组血清IL-6 水平的比较 |
| 2.4 血清VEGF-A、IL-6 水平和Gensini积分的相关性分析 |
| 2.5 ROC曲线分析 |
| 2.6 血清VEGF-A水平和LVEF的相关性分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 血清VEGF-A、IL-6 水平与冠脉狭窄程度 |
| 3.2 血清IL-6 水平与急性心肌梗死 |
| 3.3 血清VEGF-A水平与经皮冠状动脉介入治疗 |
| 4 不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 血管内皮生长因子与动脉粥样硬化的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及获得的科研成果 |
（5）针刺联合骨髓间充质干细胞移植改善大鼠急性心肌缺血研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 针刺联合BM-MSCs移植改善大鼠AMI作用研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二 针刺联合BM-MSCs移植改善大鼠AMI相关分子机制研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 针刺治疗心肌缺血及相关分子机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（6）活血益气方干预外泌体miRNA促心梗后血管新生的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 一、外泌体、外泌体miRNA与治疗性血管新生 |
| 1.miRNA在血管生成过程的基因调控作用 |
| 2.外泌体的生物学特性 |
| 3.外泌体、外泌体miRNA与MI后血管新生 |
| 4.展望 |
| 参考文献 |
| 二、活血益气方药促进心梗后血管新生的研究进展 |
| 1.中医学对缺血性心脏病的认识 |
| 2.活血益气方药促血管新生的研究 |
| 3.总结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一、大鼠急性心肌梗死动物模型的复制 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二、活血益气方对急性心肌梗死模型大鼠血管新生的影响 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三、血清外泌体的提取与鉴定 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四、大鼠心肌梗死模型血清外泌体miRNA表达谱分析 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 参考文献 |
| 实验五、大鼠急性心肌梗死差异表达miRNA的验证及分析 |
| 1.实验试剂及仪器 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 参考文献 |
| 实验六、活血益气方对心梗模型大鼠血清外泌体特异性miRNA的干预作用 |
| 1.实验试剂及仪器 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（7）脑心通胶囊通过LXRα抑制NOX/ROS/TNF-α通路改善心梗后心室重构的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 中医学对心肌梗死后心室重构的认识 |
| 1.1.1 中医学对心肌梗死后心室重构病名的认识 |
| 1.1.2 中医学对心肌梗死后心室重构病因病机的认识 |
| 1.1.3 中医学关于心肌梗死后心室重构病位病势的认识 |
| 1.1.4 心肌梗死后心室重构的辨证论治 |
| 1.2 脑心通胶囊治疗心肌梗死后心室重构的研究进展 |
| 1.2.1 脑心通胶囊方药分析 |
| 1.2.2 脑心通胶囊单味药的药理研究 |
| 1.2.3 脑心通胶囊的药理研究 |
| 1.2.4 脑心通胶囊治疗心肌梗死后心室重构的临床研究进展 |
| 1.2.5 小结 |
| 1.3 LXRα/NOX/ROS/TNF-α在心肌梗死后心室重构中的研究进展 |
| 1.3.1 心肌梗死后心室重构的定义 |
| 1.3.2 心肌梗死后心室重构的转归 |
| 1.3.3 心室重构的发病机制 |
| 1.3.4 心肌梗死后心室重构的治疗 |
| 1.3.5 小结 |
| 1.4 小结 |
| 第二章 实验研究 |
| 2.1 LXRα通过抑制NOX/ROS/TNF-α信号通路改善大鼠心肌梗死后心室重构 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 实验方法 |
| 2.1.3 结果 |
| 2.1.4 讨论 |
| 2.2 脑心通胶囊改善大鼠心肌梗死后心室重构及对LXRα介导的NOX/ROS/TNF-α信号通路的影响 |
| 2.2.1 材料 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.2.3 结果 |
| 2.2.4 讨论 |
| 2.3 脑心通胶囊通过LXRα介导的NOX/ROS/TNF-α信号通路改善大鼠心肌梗死后心室重构 |
| 2.3.1 材料 |
| 2.3.2 实验方法 |
| 2.3.3 结果 |
| 2.3.4 讨论 |
| 结语 |
| —、实验结论 |
| 二、实验的创新点 |
| 三、存在不足 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间论文发表情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
（8）柴胡加龙骨牡蛎汤治疗心肌梗死合并焦虑的炎性机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词 |
| 综述一 炎症反应在冠心病及焦虑抑郁中的研究进展 |
| 1. 炎症反应与冠心病 |
| 2. 炎症反应与焦虑抑郁 |
| 3. 炎症反应与冠心病合并焦虑抑郁 |
| 4. 结语 |
| 参考文献 |
| 综述二 双心疾病与柴胡加龙骨牡蛎汤的研究进展 |
| 1. 中医对双心疾病的认识 |
| 2. 柴胡加龙骨牡蛎汤的理论研究 |
| 3. 柴胡加龙骨牡蛎汤的基础研究 |
| 4. 柴胡加龙骨牡蛎汤的临床研究 |
| 5. 本团队对柴胡加龙骨牡蛎汤治疗双心疾病的研究 |
| 6. 结语 |
| 参考文献 |
| 实验研究 基于NF-κB信号探讨柴胡加龙骨牡蛎汤治疗心肌梗死合并焦虑小鼠的作用机制 |
| 前言 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要药物及试剂 |
| 1.3 主要耗材及仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 动物模型制备 |
| 2.2 动物分组及给药 |
| 2.3 动物标本取材 |
| 2.4 检测指标及方法 |
| 2.5 统计分析 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 各组小鼠心脏超声指标的结果 |
| 3.2 各组小鼠心肌组织的病理变化结果 |
| 3.3 各组小鼠动物行为学指标的结果 |
| 3.4 各组小鼠血清中炎症因子表达水平的结果 |
| 3.5 各组小鼠心肌组织中炎症因子基因表达的结果 |
| 3.6 各组小鼠心肌组织中炎症因子蛋白表达的结果 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 心肌梗死合并焦虑模型小鼠的制备 |
| 4.2 柴胡加龙骨牡蛎汤对心肌梗死合并焦虑小鼠心功能的影响 |
| 4.3 柴胡加龙骨牡蛎汤对心肌梗死合并焦虑小鼠焦虑状态的影响 |
| 4.4 柴胡加龙骨牡蛎汤对心肌梗死合并焦虑小鼠NF-κB介导炎症反应的影响 |
| 4.5 柴胡加龙骨牡蛎汤与双心疾病 |
| 5. 结论 |
| 6. 结语 |
| 6.1 本研究的创新点及意义 |
| 6.2 本研究的不足及展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（9）基于调节ACE轴和ACE2轴探讨益气活血法改善心梗后心室重构的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 急性心肌梗死后心室重构的中西医诊疗进展 |
| 1. 急性心肌梗死的西医治疗进展 |
| 2. 急性心肌梗死后心力衰竭的研究进展 |
| 3. 急性心肌梗死后心室重构的研究进 展 |
| 3.1 心室重构的分期 |
| 3.2 基质金属蛋白酶和心室重构 |
| 3.3 心室重构过程中的RASS系统和转化生长因子β |
| 3.4 胶原纤维与心室重构 |
| 3.5 弹性纤维与心室重构 |
| 3.6 心肌成纤维细胞和心室重构 |
| 4. 心肌梗死后心室重构心力衰竭的中医探讨 |
| 4.1 病名溯源 |
| 4.2 病因病机分析 |
| 4.3 气虚血瘀是心室重构的基本病机 |
| 4.4 益气活血类中药在心肌梗死心力衰竭治疗中的临床研究 |
| 4.5 益气活血类中药在心室重构治疗中的机制研究 |
| 5. 基于RAAS系统调节探讨益气活血法改善心梗后心室重构的机制研究 |
| 5.1 研究的意义 |
| 5.2 国内外研究进展 |
| 第二章 实验研究 |
| 1. 研究内容 |
| 1.1 通冠胶囊对大鼠急性心肌梗死后心肌纤维化和心室重构的影响及可能的机制 |
| 1.2 通冠胶囊对AngⅡ刺激的大鼠心肌成纤维细胞胶原合成的影响及机制 |
| 2. 研究目标及方向 |
| 2.1 研究目标 |
| 2.2 研究方向 |
| 3. 材料及方法 |
| 3.1 通冠胶囊对大鼠急性心肌梗死后心肌纤维化和心室重构的影响及可能的机制 |
| 3.2 探究通冠胶囊是否会影响AngⅡ刺激的大鼠心肌成纤维细胞胶原合成及作用机制 |
| 3.3 统计方法 |
| 4. 结果 |
| 4.1 通冠胶囊对大鼠急性心肌梗死后心肌纤维化和心室重构的影响 |
| 4.2 通冠胶囊对AngⅡ刺激的大鼠心肌成纤维细胞胶原合成的影响及机制 |
| 5. 讨论 |
| 5.1 益气活血法与心梗后心室重构 |
| 5.2 益气活血中药通冠胶囊的中医理论指导与临床疗效 |
| 5.3 基于调节ACE轴和ACE2轴探讨益气活血中药通冠胶囊改善心梗后心室重构机制 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 附件 |
（10）降香新黄酮latifolin促进骨髓间充质干细胞对缺血性心脏病心肌修复作用及机制研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 第一部分 骨髓间充质干细胞提取、培养和鉴定 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 实验仪器与材料 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 相关溶液的配制 |
| 2.2 BM-MSCs提取、培养和传代 |
| 2.3 BM-MSCs鉴定 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 BM-MSCs形态观察 |
| 3.2 BM-MSCs表面抗原标志物鉴定 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二部分 latifolin通过改变炎性微环境对骨髓间充质干细胞的保护作用 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 受试药物 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 实验仪器与材料 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 相关溶液的配制 |
| 2.2 缺血、缺氧和炎症环境对BM-MSCs生存率影响 |
| 2.3 缺血、缺氧和炎症环境对BM-MSCs凋亡的影响 |
| 2.4 缺血、缺氧和炎症环境对BM-MSCs炎性因子分泌影响 |
| 2.5 缺血、缺氧和炎症环境对BM-MSCs炎性基因表达影响 |
| 2.6 latifolin对缺血、缺氧和炎症环境中BM-MSCs活力的影响 |
| 2.7 latifolin对缺血、缺氧和炎症环境中BM-MSCs凋亡的影响 |
| 2.8 latifolin对缺血、缺氧和炎症环境中BM-MSCs炎性因子分泌影响…. |
| 2.9 数据处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 缺血、缺氧和炎症环境对BM-MSCs形态的影响 |
| 3.2 缺血、缺氧和炎症环境对BM-MSCs活力的影响 |
| 3.3 缺血、缺氧和炎症环境对BM-MSCs凋亡的影响 |
| 3.4 缺血、缺氧和炎症环境对BM-MSCs炎症因子基因表达的影响 |
| 3.5 缺血、缺氧和炎症环境对BM-MSCs炎性因子分泌的影响 |
| 3.6 缺血、缺氧和炎症环境对BM-MSCs中 NF-κB的影响 |
| 3.7 latifolin对缺血、缺氧和炎症环境中BM-MSCs活力的影响 |
| 3.8 latifolin对缺血、缺氧和炎症环境中BM-MSCs凋亡影响 |
| 3.9 latifolin对缺血、缺氧和炎症环境中BM-MSCs炎性因子分泌的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三部分 latifolin促进骨髓间充质干细胞定向心肌分化作用 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 受试药物 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 实验仪器与材料 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 相关溶液的配制 |
| 2.2 实验分组和诱导分化 |
| 2.3 倒置显微镜观察分化细胞形态 |
| 2.4 RT-PCR测定分化细胞心肌特异性基因表达 |
| 2.5 免疫荧光法检测分化细胞心肌特异性蛋白表达 |
| 2.6 透射电镜观察分化细胞结构 |
| 2.7 数据处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 倒置显微镜观察分化细胞形态 |
| 3.2 RT-PCR测定分化细胞心肌特异性基因表达 |
| 3.3 免疫荧光法检测分化细胞心肌特异性蛋白表达 |
| 3.4 透射电镜观察分化细胞结构 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第四部分 latifolin促进骨髓间充质干细胞修复受损心肌作用及机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 受试细胞 |
| 1.3 受试药物 |
| 1.4 主要试剂 |
| 1.5 实验仪器与材料 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 相关溶液的配制 |
| 2.2 latifolin促进BM-MSCs修复受损心肌细胞的作用 |
| 2.2.1 H9c2 细胞培养 |
| 2.2.2 BM-MSCs与 H9c2 细胞共培养体系建立 |
| 2.2.3 细胞处理和实验分组 |
| 2.2.4 Annexin V/PI法测定共培养条件下H9c2 细胞凋亡 |
| 2.3 latifolin促进BM-MSCs移植治疗心肌梗死作用及机制研究 |
| 2.3.1 实验分组和给药 |
| 2.3.2 BM-MSCs标记 |
| 2.3.3 心肌梗死模型建立 |
| 2.3.4 BM-MSCs移植 |
| 2.3.5 大鼠血清中心肌损伤标志物检测 |
| 2.3.6 超声心动图评价大鼠心功能 |
| 2.3.7 TTC染色检测大鼠心脏梗死面积 |
| 2.3.8 HE染色评价大鼠心肌病理损伤情况 |
| 2.3.9 Masson染色评价大鼠心肌胶原纤维化情况 |
| 2.3.10 免疫荧光检测BM-MSCs生存率和心肌分化情况 |
| 2.3.11 免疫组织化学检测组织中炎性细胞情况 |
| 2.3.12 WB检测组织中炎症和分化通路相关蛋白表达情况 |
| 2.4 数据处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 latifolin促进BM-MSCs修复受损心肌细胞的作用 |
| 3.1.1 Annexin V/PI法测定共培养条件下H9c2 细胞凋亡 |
| 3.2 latifolin促进BM-MSCs移植治疗心肌梗死作用及机制研究 |
| 3.2.1 MI心电图监测 |
| 3.2.2 BM-MSCs标记CM-Dil |
| 3.2.3 实验大鼠死亡情况 |
| 3.2.4 大鼠血清中LDH、CK-MB含量 |
| 3.2.5 超声心动图评价大鼠心功能 |
| 3.2.6 TTC染色评价大鼠心脏面积 |
| 3.2.7 HE染色评价心肌损伤和炎性细胞情况 |
| 3.2.8 Masson染色评价心肌胶原纤维化情况 |
| 3.2.9 免疫荧光检测BM-MSCs生存率和心肌分化情况 |
| 3.2.10 免疫组织化学检测组织中炎性细胞情况 |
| 3.2.11 WB检测组织中炎症和分化通路相关蛋白表达情况 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新点 |
| 本研究的不足 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 个人简介 |
四、急性心肌梗死大鼠血清血管内皮生长因子含量的变化（论文参考文献）
- [1]活血温通方联合BMSCs移植改善心梗后缺血缺氧微环境的机制研究[D]. 王擎擎. 中国中医科学院, 2021(02)
- [2]miR-489调控心肌纤维化的机制及人参皂苷Re的干预作用研究[D]. 孙敬辉. 中国中医科学院, 2021(02)
- [3]从外泌体角度探讨活血益气方促大鼠心梗后血管新生的作用机制[D]. 高毅洁. 北京中医药大学, 2021(01)
- [4]血清VEGF-A、IL-6在急性心肌梗死PCI术中的临床研究[D]. 岑团. 右江民族医学院, 2021(02)
- [5]针刺联合骨髓间充质干细胞移植改善大鼠急性心肌缺血研究[D]. 李记泉. 辽宁中医药大学, 2020(01)
- [6]活血益气方干预外泌体miRNA促心梗后血管新生的作用机制研究[D]. 吴丹丹. 北京中医药大学, 2020
- [7]脑心通胶囊通过LXRα抑制NOX/ROS/TNF-α通路改善心梗后心室重构的研究[D]. 曾靖. 广州中医药大学, 2020(06)
- [8]柴胡加龙骨牡蛎汤治疗心肌梗死合并焦虑的炎性机制研究[D]. 史金玉. 北京中医药大学, 2020(04)
- [9]基于调节ACE轴和ACE2轴探讨益气活血法改善心梗后心室重构的机制研究[D]. 周袁申. 广州中医药大学, 2020(06)
- [10]降香新黄酮latifolin促进骨髓间充质干细胞对缺血性心脏病心肌修复作用及机制研究[D]. 张妮. 江西中医药大学, 2019(06)