一、免疫禽流感疫苗HI抗体的试验研究（论文文献综述）
刘艳晶[1]（2021）在《重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（H5N1 Re-11株+Re-12株，H7N9 H7-Re3株）研究》文中认为高致病性禽流感是H5亚型和H7亚型流感病毒引起的一种禽类高度致死性传染病,它不仅严重危害养禽业发展,而且还具有重大公共卫生意义。疫苗免疫是中国防治禽流感的重要手段之一,鉴于禽流感病毒突变率高,疫苗株应定期测评,必要时进行更新。国家禽流感参考实验室通过对禽流感监测、病毒分离鉴定及现用疫苗对流行病毒免疫效果评估表明,从2019年起,H7N9变异株在我国出现,与原三价疫苗中H7N9 H7-Re2病毒的抗原性存在差异,攻击H7-Re2株疫苗免疫鸡后,免疫鸡不能获得完全保护,需要进行疫苗种毒更新;而H5亚型禽流感病毒流行株与疫苗株抗原性相似,现有疫苗可以起到完全保护的作用,因此不需要更新种毒。国家禽流感参考实验室利用反向遗传操作技术进行H7N9禽流感疫苗种毒更新,构建出针对H7N9病毒抗原变异株的重组禽流感病毒疫苗候选株,命名为H7-Re3株。本研究首先对重组H7N9亚型H7-Re3株的生物特性、传代稳定性和免疫原性等进行了研究。结果表明,该毒株在鸡胚上能稳定传代且生长滴度高,对鸡胚和鸡均无致病性,具有良好的免疫原性,免疫鸡能抵御流行病毒的攻击,因此该毒株是理想的灭活疫苗毒株。随后,用H5亚型Re-11株、Re-12株和H7亚型H7-Re3株病毒分别接种鸡胚培养,收获感染鸡胚液,经浓缩、甲醛溶液灭活后,乳化制成3批三价灭活苗,并进行疫苗性状检验、对鸡的安全性、免疫效力、对流行毒株的免疫保护试验以及抗体和攻毒保护关系试验。结果显示,3批疫苗均合格;以2 m L/羽的剂量接种家禽,均无副作用。按建议剂量接种后,免疫后21 d,SPF鸡H5亚型Re-11株、Re-12株、H7亚型H7-Re3株平均HI抗体效价在7.7 log2以上,SPF鸭3种毒株HI抗体效价在1:124～1:148之间,商品鹅3种毒株HI抗体效价在1:32～1:44之间;用H5亚型2.3.4.4d分支、2.3.2.1d分支和H7N9效力检验毒株及流行株攻击免疫家禽,免疫家禽均无发病死亡且不排毒。以上结果表明,3批H5+H7三价灭活疫苗免疫鸡和水禽后能够对2019年监测到的H7N9抗原变异株及H5亚型2.3.4.4d分支、2.3.2.1d分支的代表毒株攻击提供完全免疫保护。疫苗接种后HI抗体与攻毒保护关系的研究表明,免疫鸡H5亚型Re-11株、Re-12株和H7亚型H7-Re3株HI抗体≥4log2时可对H5和H7亚型相应效检毒株攻击提供完全保护;H5亚型和H7亚型3种HI抗体≥1:10的免疫鸭,可为同源H5亚型和异源H7亚型效检毒株提供完全保护。最后,我们评估了重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（H5N1 Re-11株+Re-12株,H7N9H7-Re3株）的临床应用效果,主要包括安全性和免疫效果两方面,选取山东某场白羽肉种鸡、哈尔滨某场商品蛋鸡、宁夏某场蛋种鸡和山东某场种鸭进行评估。结果显示,鸡群和鸭群按照各自程序免疫三价疫苗后,均表现正常,疫苗安全性良好,同时能够让免疫鸡和鸭产生较高水平的抗体,具有良好的免疫效力,能够保护鸡群和鸭群免受H5和H7亚型高致病性禽流感病毒的攻击。本研究表明,重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（H5N1 Re-11株+Re-12株,H7N9 H7-Re3株）对鸡和水禽具有很好的安全性和免疫效果。该疫苗已于2020年9月开始在全国范围内应用,并取得了良好的效果,对H5和H7禽流感的防控起到了非常重要的作用。
李军[2]（2021）在《H5+H7亚型禽流感病毒样颗粒疫苗的构建及免疫效果评估》文中进行了进一步梳理1997年香港出现了 H5N1亚型禽流感病毒（Avian Influenza Virus,AIV）,并引起了人的感染,此后该病毒蔓延到了亚洲、非洲和欧洲等多个国家和地区。截至到 2021年4月已感染了862人,并导致455人死亡（https://www.who.int/influenza/humananimalinterface/H5N1cumulativetable arc hives/en/）。除了H5N1 亚型高致病性禽流感病毒（highly pathogenic influenza virus,HPAIV）外,H7亚型HPAIV也给养殖业和人类的健康带来很大影响。2013年3月,中国上海和安徽省的3名居民感染了 H7N9亚型AIV。据报道,截至2021年4月,H7N9流感病毒已感染1568人,导致616人死亡,病死率较高。（http://www.fao.org/ag/againfo/programmes/en/empres/H7N9/situationupdate.html）。H5N1和H7N9 HPAIV严重威胁养禽业和人类健康,因此需要一种高度安全和有效的疫苗来预防潜在的H5N1或H7N9亚型AIV的大流行。传统的流感疫苗大多以灭活苗为主,主要依赖鸡胚生产,这种灭活苗存在很多缺陷,比如当流感疫情暴发时,鸡胚供应不足,或者引起局部或全身过敏反应,以及免疫反应持续时间短等。因此急需一种安全有效的疫苗来替代传统的灭活疫苗。病毒样颗粒（Virus-like Particles,VLP）不含病毒的遗传物质,由有一种或多种病毒结构蛋白自行组装形成,其结构与天然病毒结构相似。VLP包含了较高密度的病毒表面蛋白,能够像天然病毒一样有效的进入到细胞,具有很好的免疫原性和安全性。此外,VLP的生产不依赖鸡胚,保证了禽流感大流行时疫苗的充足供应并且具有生产周期短和生产成本低等优点。本研究利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统,制备了 H5 VLP疫苗和H5+H7 VLP二联疫苗。攻毒保护试验结果证明两种VLP疫苗免疫SPF鸡均可提供针对H5和H7亚型HPAIV 100%的临床保护,且与市售的商品化疫苗的免疫效果相当,这为H5N1和H7N9禽流感二联疫苗的制备提供了可参考的方法。1.H5N1亚型禽流感病毒样颗粒疫苗的制备与免疫效果评估本研究基于H5N1亚型HPAIV clade 2.3.2.1d TT3株的HA基因构建了重组杆状病毒rBac-TT3-HA,与实验室前期构建的表达H7N9亚型HPAIV NA、M1基因的重组杆状病毒rBac-GD15-NA和rBac-GD15-M1分别以MOI=1共感染Sf9细胞,制备了 H5 VLP。同时以单独表达HA蛋白的重组杆状病毒rBac-TT3-HA制备的灭活疫苗和商品化灭活苗作对照。对4周龄SPF鸡进行单次免疫15 μg的剂量,结果发现所有疫苗组均可诱导宿主产生高效的血凝抑制（HI）抗体、病毒中和（VN）抗体和IgG抗体。用TT3病毒进行攻毒保护试验,发现在14天观察期内各疫苗组的SPF鸡均未出现临床症状和死亡,而PBS对照组的鸡在2天内全部死亡,说明H5 VLP疫苗可以提供针对H5N1亚型HPAIV 100%的临床保护。在攻毒后的第1、3、5、7、9天采集喉头及泄殖腔棉拭子进行病毒测定,结果显示各疫苗组均没有检测到排毒,而PBS对照组所有鸡均有排毒。同时组织脏器病毒载量测定结果显示,所有疫苗组均可完全抑制病毒在鸡体内的复制。肺脏组织病理切片结果发现,所有疫苗组均有效地减轻了免疫鸡感染病毒后的肺损伤,且以H5 VLP效果最显着。总之,这些结果表明,H5VLP疫苗提供了针对H5N1亚型HPAIV的完全临床保护,并可以完全抑制排毒和病毒在体内的复制,显着减轻肺脏的损伤。因此,本研究研制的H5 VLP为开发新型的H5N1疫苗提供了替代策略。2.H5+H7亚型禽流感病毒样颗粒疫苗的构建及免疫效果评估本研究利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统,分别制备了 H5和H7两种VLP,将两种VLP以相同浓度混匀后和佐剂以1:2的比例进行乳化制备H5+H7 VLP二价疫苗,同时以商品化灭活苗作为对照。SPF鸡单次免疫15 μg H5+H7 VLP疫苗和商品化疫苗均可诱导机体产生有效的HI抗体、VN抗体以及IgG抗体。用H5N1和H7N9亚型HPAIV进行攻毒,在14天观察期内疫苗组均没有观察到临床症状和死亡,而H5N1未免疫对照组在2天内全部死亡,H7N9未免疫组在5天内全部死亡,说明H5+H7 VLP疫苗可以提供针对H5N1和H7N9亚型HPAIV 100%的临床保护。在攻毒后的第2、4、6天采集喉头及泄殖腔棉拭子进行排毒检测,结果显示各疫苗组均没有检测到排毒。此外,组织病毒载量结果显示所有疫苗组均可完全抑制病毒在鸡体内的复制。值得注意的是,与商品化疫苗相比,H5+H7 VLP疫苗能更有效地减轻免疫鸡在感染病毒后的肺损伤程度。总之,这些结果表明,H5+H7 VLP疫苗提供了针对H5N1和H7N9亚型HPAIV100%的临床保护,并可以完全抑制免疫鸡的排毒以及病毒在体内的复制。此外,在减轻病毒感染导致的肺损伤方面,H5+H7VLP优于商品化疫苗。因此,本研究用两种VLP共同乳化的策略制备的二价VLP疫苗为其他多价疫苗的制备提供了的参考。
潘舒心[3]（2021）在《禽流感（H5+H7）重组杆状病毒载体三价灭活疫苗对家禽免疫效果研究》文中研究表明高致病性禽流感是由H5或H7亚型禽流感病毒（AIV）引起的一种重要人兽共患传染病,它不仅对家禽养殖业危害巨大,还严重威胁人类生命健康。疫苗免疫是有效控制高致病性禽流感的重要措施。昆虫细胞杆状病毒表达系统是一种适合大规模培养表达外源蛋白的有效方法,已成为疫苗开发的重要平台。国家禽流感参考实验室与洛阳某生物制品企业合作进行了禽流感（H5+H7）重组杆状病毒载体三价灭活疫苗（r BH5-11株+r BH5-12株+r BH7-2株）的研发。本研究对该杆状病毒载体疫苗实验室制品进行了安全性、有效性和对商品家禽的免疫效果评估,以期为禽流感重组杆状病毒载体疫苗的研制及应用提供科学依据。疫苗的安全性和有效性评估结果表明,以0.3m L/只单剂量和2m L/只大剂量疫苗接种的3周龄SPF鸡,在免疫后28d内无不良反应;3批疫苗常规剂量（0.3m L/只）分别接种SPF鸡后3周时,免疫鸡血清中针对H5亚型Re-11株和Re-12株、H7亚型H7-Re2株AIV的HI平均抗体效价在7.9log2～8.5log2之间,对照鸡血清中针对3种抗原的HI抗体均为阴性;将效力检验用H5N6、H5N1和H7N9亚型AIV按100CLD50的剂量,以滴鼻的方式攻毒后14d观察期内,所有免疫组鸡均不发病、不排毒、不死亡,获得100%的免疫保护,对照鸡则全部发病死亡;HI抗体与攻毒保护关系研究结果显示,当H5和H7亚型HI抗体滴度达到3log2,可为攻毒免疫鸡提供抗死亡保护,达到4log2时,可提供完全免疫保护。该疫苗与市售商品疫苗的免疫抗体比较结果显示,常规剂量疫苗（0.3ml/只）免疫后产生的HI抗体滴度与市售疫苗无显着差异。以上结果表明3批次疫苗对鸡安全、有效,与市售疫苗免疫效果一致。疫苗对流行株的攻毒结果显示,将疫苗以常规剂量（0.3m L/只）接种SPF鸡后3周时,免疫鸡血清中针对3种抗原的HI平均抗体效价均在7.9log2以上,使用2株H5N6亚型AIV、2株H5N1亚型AIV及1株H7N9亚型AIV和1株H7N2亚型AIV流行株,以105CLD50/只滴鼻方式攻毒后,各免疫组均获得100%的免疫保护,对照鸡全部排毒死亡。结果表明,疫苗接种能够有效预防H5和H7亚型禽流感流行株的感染。疫苗持续期及其对商品家禽的免疫研究结果显示,21日龄SPF鸡一次免疫（0.3 m L/只）后2周至22周,其血清中H5和H7亚型HI抗体滴度始终高于4log2;80日龄商品蛋鸡在接种2次疫苗（0.5m L/只剂量）3周至22周,血清中针对3种抗原的HI平均抗体效价均在6log2以上;在免疫后3周和22周;分别用效力检验毒株H5N6、H5N1和H7N9亚型AIV按100CLD50的剂量,以滴鼻的方式攻毒后14d观察期内,免疫鸡不发病,不排毒,不死亡,对照鸡全部排毒死亡。2周龄商品鸭接种2次疫苗（0.5m L/只剂量）,在首次免疫后3周至20周,血清中针对3种抗原的HI平均抗体效价均在5.6log2以上,在免疫后3周和20周分别用H5和H7亚型禽流感效力检验毒株以100DLD50的剂量滴鼻攻击后,免疫鸭获得完全保护。本研究结果表明,禽流感（H5+H7）重组杆状病毒载体三价灭活疫苗（r BH5-11株+r BH5-12株+r BH7-2株）安全、有效,SPF鸡、商品鸡和商品鸭接种后均获得良好的免疫保护效果,本研究为禽流感疫苗的研制提供了新思路和科学依据。
陈晓涵[4]（2020）在《重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗研究及应用》文中提出高致病性H5和H7亚型禽流感的暴发不仅给养禽业造成重大损失,也给人类的生命健康构成严重威胁,而疫苗免疫是预防禽流感的主动措施、关键环节和最后防线。因此,为了防止H5和H7亚型禽流感在中国的肆虐,重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗（H5N1 Re-8株+H7N9H7-Re1株）于2017年在养殖场中广泛应用。但是,2017年底以来的全国禽流感流行病学调查结果显示,我国H5亚型禽流感病毒以2.3.2.1和2.3.4.4分支为主,并且2.3.4.4d分支和2.3.2.1d分支病毒已成为当前威胁我国养禽业的主要流行株。进一步的抗原性分析和攻毒试验结果表明,Re-8株疫苗株与2018年分离到的2.3.4.4d和2.3.2.1d分支代表病毒株均存在较大抗原性差异,并且在临床上所使用的二价灭活疫苗不能对当时流行的H5亚型高致病性禽流感病毒提供完全保护作用,因此需要将H5N1 Re-8株疫苗种毒进行更新。此外,H7N9 H7-Re1株与分离到的部分H7N9病毒的抗原性差异较大,并且这种差异还在不断增加,因此将H7N9 H7-Re1株疫苗种毒一并进行更新。本研究将构建的H5亚型Re-11株、Re-12株和H7亚型H7-Re2株重组禽流感病毒进行系统鉴定（种毒病毒含量、HA和NA基因的序列分析、对鸡胚和雏鸡毒力、特异性、免疫原性以及纯净性）。此外,我们将3株病毒在鸡胚中传至13代,测定所有代次病毒的鸡胚半数致死量和HA效价。结果表明,H5亚型Re-11株、Re-12株和H7亚型H7-Re2株重组病毒生物安全度高、特异性强、免疫原性好、适合在鸡胚中稳定增殖,病毒液纯净,均符合作为禽流感灭活疫苗种毒要求。随后,我们用Re-11、Re-12和H7-Re2株疫苗种毒制备成重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（H5N1 Re-11株+H5N1 Re-12株+H7N9 H7-Re2株）,对其安全性和免疫效果等进行实验室研究。结果表明,三价灭活疫苗对SPF鸡、SPF鸭和商品鹅均安全,免疫后无不良反应;3批灭活苗免疫家禽后21d,SPF鸡、SPF鸭和商品鹅的HI抗体效价平均值分别可达到7.7log2、7.7log2和4.2log2以上。三价灭活疫苗免疫鸡用亲本毒株和流行毒株攻击,无发病死亡及排毒现象。当SPF鸡的HI抗体效价达到3log2时,可获得抗死亡保护;达到4log2时,可获得完全保护;SPF鸭H5亚型Re-11株、Re-12株HI抗体≥2log2时可对H5亚型效检毒株攻击提供完全保护,H7亚型H7-Re2株HI抗体≥3log2时,对异源H7N2亚型毒株攻击提供完全保护。最后,进行了临床上蛋种鸡、白羽肉种鸡、北京油鸡、固始鸡、商品白羽肉鸡和种鸭免疫三价灭活疫苗的抗体检测,以评价该疫苗的临床应用效果。结果表明,该疫苗安全性良好,免疫后的家禽均无明显不良反应;该三价灭活疫苗可以诱导蛋种鸡、白羽肉种鸡、北京油鸡、固始鸡和种鸭产生良好的抗体;免疫后的商品白羽肉鸡,在出栏检测时具有较高的抗体效价;疫苗免疫家禽后,可有效预防当前我国流行的H5和H7亚型禽流感病毒引起的禽流感。本研究表明重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（H5N1 Re-11株+H5N1 Re-12株+H7N9H7-Re2株）对SPF鸡和水禽均具有良好的安全性和免疫保护效果。并且该三价疫苗已于2019年在全国广泛应用,为控制高致病性禽流感发挥了重要作用。
石磊[5]（2020）在《表达H7N9亚型禽流感病毒血凝素基因的重组新城疫病毒载体疫苗的构建及血凝素抗原表位鉴定》文中研究说明自2013年在中国长三角地区首次出现以来,H7N9亚型禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）引起严重的人感染事件,造成的病死率较高,给公共卫生安全带来了巨大挑战。2016年底,出现了高致病性（highlypathogenic,HP）H7N9禽流感病毒的变异株,在鸡群中引起疫病的暴发,给家禽养殖业带来了巨大的经济损失。疫苗接种是防控禽流感的最有效措施之一。但是,目前临床使用的H7N9禽流感灭活疫苗只能通过肌肉注射方式进行免疫,存在接种费时费力、仅能诱导体液免疫、导致禽群应激等缺点。新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）是构建家禽双价疫苗的理想载体,具有安全性好、繁殖性能强、能够诱导粘膜、体液和细胞免疫、可通过喷雾、饮水等途径进行大规模免疫接种等优点。因此,本研究的目的是以NDV为载体表达H7N9亚型AIV的主要保护性抗原——血凝素（hemagglutinin,HA）基因,构建活载体疫苗并评价其免疫效力。另外,H7N9亚型AIV是一种新发人兽共患传染病,对病毒HA蛋白抗原表位的认识还不全面。因此,本研究利用针对H7N9HA蛋白的一系列单克隆抗体,对HA蛋白的B细胞抗原表位进行排谱,并鉴定其中的免疫优势表位,为疫苗设计改造提供参考。1.表达H7N9亚型禽流感病毒HA基因的重组新城疫病毒活载体疫苗的构建与评价本研究以一株致弱的重组基因Ⅶ型NDV（rAI4）为骨架,并选取与各年份分离株交叉反应性良好的 H7N9 毒株（A/chicken/Guangdong/GD15/2016,GD15）作为HA基因的供体,通过反向遗传学构建了一株表达H7N9 HA基因的重组新城疫病毒载体疫苗（rAI4HA）。体外试验结果显示,该重组疫苗的基本生物学特性与母本病毒rAI4相似,在细胞及鸡胚中均具有较高的繁殖滴度,且毒力较低。另外,重组病毒在鸡胚中连续传代后,能够稳定表达HA蛋白,且未发现任何基因突变,表明疫苗的遗传稳定性良好。动物免疫试验显示,使用106半数鸡胚感染量（50%embryo infectiousdose,EID50）的rAI4HA经滴鼻点眼途径免疫2周龄SPF鸡,免疫后2周即可诱导产生较高的针对NDV的血凝抑制（hemagglutination inhibition,HI）抗体,与载体疫苗rAI4相似。但是,rAI4HA在免疫后第4周诱导的针对H7N9的HI抗体较低（平均滴度:2 log2）,血清转化率仅为20%（HI≥4 log2）。病毒中和（virusneutralization,VN）实验显示,rAI4HA免疫鸡血清对H7N9病毒没有中和活性。值得注意的,当使用ELISA方法进行检测时,免疫血清中存在针对H7N9HA蛋白高水平的IgY抗体（平均滴度:200）。攻毒保护试验结果显示,当使用105 EID50的HPH7N9病毒进行攻毒时,未免疫鸡在攻毒后3天内全部死亡,且表现严重的临床症状;rAI4免疫鸡在攻毒后7天内也全部死亡;rAI4HA免疫鸡在攻毒后未显示任何临床症状且未发生死亡。此外,与空载体rAI4相比,rAI4HA免疫鸡攻毒后的排毒率与排毒量显着下降。以上结果说明,候选疫苗株rAI4HA的繁殖滴度高、安全性与遗传稳定性较好,一次免疫即可诱导针对NDV与H7N9较高的抗体应答,能够提供针对H7N9病毒感染的100%的保护率,且能显着抑制排毒,在H7N9禽流感防控中显示较大的潜力。此外,rAI4HA诱导的抗体反应以较低的HI抗体、较高的H7N9特异性IgY抗体为特征,提示至少对于NDV-H7N9载体疫苗而言,传统的血清学指标不能准确反映疫苗真实的免疫效果。2.H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白B细胞抗原表位的预测及排谱重组载体疫苗rAI4HA虽然只能诱导产生低水平的针对H7N9的HI/VN抗体水平,却能诱导高水平的IgG抗体,可能与H7N9HA蛋白特殊的免疫特性有关,即HA蛋白中的非中和性B细胞抗原表位可能取代传统的HI/VN表位而成为优势表位。因此,本研究使用多个预测工具对HA蛋白潜在的B细胞抗原表位进行预测,综合预测结果设计并合成了 19条多肽,基本覆盖全长HA蛋白。我们用合成的多肽与24株H7N9 HA特异性的单克隆抗体反应,对HA蛋白的线性B细胞表位进行排谱。结果显示,8株单克隆抗体能与多肽特异性结合,其中有部分抗体识别的是相同的表位。共鉴定3个新的线性B细胞表位,均位于HA蛋白茎部区,且识别这些表位的单克隆抗体均没有HI/VN活性。然后,将筛选到的3条多肽进行截短对抗原表位进行了精细定位,以此鉴定了其中两个抗原表位的核心基序,分别为373-TAA-375与459-E。将鉴定的核心基序氨基酸位点突变后,HA蛋白与对应抗体的反应性丧失或减弱。但是,其中一条多肽截短后均不再与单抗发生反应,提示该单抗可能识别的是构象表位。我们使用噬菌体表面展示随机多肽文库对该单抗识别的表位进行筛选,鉴定了其结合的模拟肽基序为HEMWGLHSFDMT。序列比对结果显示,该模拟表位位于HA蛋白茎部区428-450 aa,是由不连续氨基酸位点组成的构象型B细胞表位,429-E-431-W-445-H-448-D为该表位的核心位点。因此,我们用单抗排谱的方法在H7N9 HA蛋白的茎部区中鉴定了 3条新的非中和抗体识别的抗原表位,2条为线性表位,1条为构象表位。3.H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白优势表位的鉴定NDV-H7N9载体疫苗诱导的抗体以高水平的非中和抗体为主,说明这些抗体识别的抗原表位可能是HA蛋白的优势表位。为了鉴定H7N9 HA蛋白中的优势抗原表位,我们用合成的多肽与不同来源的H7N9抗血清反应,并用竞争ELISA的方法鉴定NDV-H7N9免疫血清识别的优势表位。结果显示,HA蛋白19条潜在的线性B细胞表位与H7N9灭活疫苗免疫鸡与小鼠血清以及NDV-H7N9免疫鸡血清均不反应;部分表位与H7N9病毒感染鸡血清反应,其中HA茎部区的表位与血清的反应性较强。这些结果提示,HA蛋白的构象表位可能是H7N9疫苗免疫血清识别的优势表位。此外,前期peptide-ELISA实验显示,大部分单抗与线性B细胞表位不反应,表明这些单克隆抗体针对的表位也可能是构象性表位。因此,我们使用竞争ELISA方法评价这些单克隆抗体和NDV-H7N9免疫血清与HA蛋白结合的竞争性。结果显示,2B11 1F3和4B7 4D5两株单抗具有显着的竞争效应,能使免疫血清与HA蛋白的结合性下降50%左右,表明它们针对的表位是诱导NDV-H7N9疫苗抗体应答的优势表位。此外,2B11 1F3和4B74D5两株单抗与免疫血清的竞争没有叠加效应,说明它们可能针对的是同一表位。然后,我们使用噬菌体表面展示随机多肽文库对4B74D5识别的表位进行筛选,鉴定其识别的模拟肽基序为SNTALPSKFYGY,与HA蛋白序列吻合的关键氨基酸为331-N-336-P-361-Y-362-G,为单抗识别的核心基序。结果说明,H7N9疫苗诱导的抗体应答与病毒自然感染诱导的抗体应答存在明显差异,并鉴定HA蛋白331-N-336-P-361-Y-362-G基序为NDV-H7N9载体疫苗诱导抗体应答的优势表位。
吴姣姣[6]（2019）在《重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗研究及应用》文中提出H5和H7亚型高致病性禽流感病毒（Highly pathogenic avian influenza virus,HPAIV）通常可导致感染家禽全部死亡,引起疫情的暴发。2003年以来,在全球60多个国家和地区暴发了H5亚型AI疫情。同时,H5和H7亚型AIV均能导致人发病和死亡,给人类健康带来严重威胁。疫苗免疫是适合我国国情的AI最有效防控措施之一。2014年以来,我国家禽中分离的H5亚型AIV主要属于2.3.4.4分支,国家禽流感参考实验室研制的H5N1亚型Re-8株系列灭活疫苗,已在家禽中广泛应用并取得了良好的效果。2017年初,我国人H7N9流感疫情增多,家禽中出现H7N9亚型HPAI疫情,迫切需要能够同时预防H5和H7亚型AI的禽AI疫苗。本研究首先对H7N9 H7-Re1疫苗株的病毒含量、毒力、免疫原性等生物学特性进行了系统鉴定。结果显示,该疫苗种毒生物安全度高、特异性强、免疫原性好且能在鸡胚中高效稳定增殖,是用于H7亚型HPAI防控的理想疫苗种毒。其次,以H5N1 Re-8株和H7N9 H7-Re1株疫苗种毒为基础,研制出重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗（H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株）（以下简称H5+H7二价灭活疫苗）,进行了安全性和有效性的系统评估。将H5N1 Re-8株和H7N9 H7-Re1株鸡胚尿囊液分别2倍浓缩,使用甲醛灭活后,按照本研究确定的1:1.5抗原比例乳化制备成H5+H7二价灭活疫苗。安全性试验结果表明,大剂量、单剂量和单剂量重复接种的SPF鸡在接种后14日内,无任何不良反应。该疫苗最小免疫剂量为0.1mL,免疫后3w H5和H7亚型HI抗体平均滴度均在6log2以上;肌肉与颈部皮下途径免疫SPF鸡,效力无明显差异,均可产生较高的抗体水平,高峰期（首免后4w）抗体水平即可达9log2,SPF鸡肌肉注射免疫后14d到210d均可获得完全保护;抗体与攻毒保护结果表明,免疫后3w H5和H7亚型HI抗体滴度达到3log2时可以获得抗死亡保护,达到4log2及以上时可获得完全保护。最后,将H5+H7二价灭活疫苗免疫商品蛋鸡、商品白羽肉鸡、商品黄羽肉鸡、商品鹅以及商品肉鸭,进行田间试验。结果表明,该疫苗具有良好的安全性,免疫不同品种的家禽后均吸收良好,无局部或全身不良反应。该疫苗免疫蛋鸡后HI抗体可高达9log2左右（免疫后150d）,免疫持续期达150d,按程序免疫后,抗体更高,持续期更长;商品白羽肉鸡经一次免疫、商品黄羽肉鸡和商品肉鸭经二次免疫,上市前均能获得完全免疫保护。商品蛋鸭和种鹅按程序免疫,免疫后能产生良好的抗体,均可以抵御H5和H7亚型AI高致病性禽流感病毒的攻击。本研究研制出H5+H7二价灭活疫苗,对鸡、鸭和鹅均具有良好的安全性和有效性。2017年9月,该疫苗开始在全国家禽中应用,已在预防家禽H5和H7亚型AI及成功阻断人感染H7N9病毒过程中发挥重要作用。
翟旺[7]（2019）在《H5、H7疫苗对珍禽的免疫效果评估》文中进行了进一步梳理禽流感是一种烈性传染病,时刻威胁养禽业发展,多采用疫苗免疫预防,鸡和水禽在接种禽流感灭活疫苗后能产生良好的免疫反应。珍禽具有观赏性,由于禽类养殖结构的改变,部分珍禽可人工饲养并作为新兴禽肉供人们选择,在丰富人类食谱的同时也增加了人们与珍禽接触的机会,给禽流感病毒的传播提供了更多的途径。珍禽的免疫保护逐渐成为禽流感防控的重要一环,但关于珍禽接种禽流感疫苗进行免疫的安全性和免疫效果等研究,国内外研究报道的较少,且免疫效果并不理想。本次试验使用2017年农业部要求启用新型重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗免疫（含H5N1亚型Re-8株和H7N9流感病毒Re-1株等2个疫苗毒株）,对雉鸡、珍珠鸡、孔雀、鸸鹋四种珍禽进行免疫并密切观察,了解其抗体消长规律,为禽流感的防控提供技术参考。每种珍禽分为免疫组和对照组,根据国家推荐免疫程序,并结合实际情况,分别对不同日龄人工饲养珍禽首次免疫,首次免疫后21d二次免疫。分别对首次免疫后第14 d、21 d、28 d、35 d、49 d、77 d、105 d、133 d、161 d、189 d免疫组20羽、对照组10羽,用血凝与血凝抑制试验检测其抗体。结果表明:珍禽在接种疫苗后未产生严重不良反应,首次免疫后14d H5亚型和H7亚型均能产生有效抗体,但不同种类珍禽免疫后的效果不同。其中雉鸡H5亚型免疫有效期最长达91d以上,H7亚型免疫有效期最长达175d以上;珍珠鸡H5亚型免疫有效期最长达119d以上,H7亚型免疫有效期最长达147d以上;孔雀H5亚型免疫有效期最长达119d以上,H7亚型免疫有效期最长达175d以上;鸸鹋H5亚型免疫有效期最长达175d以上,H7亚型免疫有效期最长达175d以上。重组禽流感（H5+H7）二价灭活疫苗对这四种珍禽安全有效。
张爽[8]（2019）在《近4年湖南地区H9N2病毒遗传进化分析与灭活疫苗的初步研究》文中进行了进一步梳理禽流感病毒属于正粘病毒科单股负链RNA病毒,可感染禽类、哺乳类。在中国,低致病性禽流感流行主要是H9N2亚型,该病毒的流行给畜禽养殖业带来巨大的经济损失。目前,中国在禽流感临床防控中发现最为有效的预防方法和控制手段是疫苗接种。然而,最些年的研究表明,禽流感病毒在大面积免疫疫苗的环境下,为适应已免疫的宿主,其内部基因进行重组和突变。特别是,低致病H9N2病毒某些关键位点的突变,极易导致其逐步突破哺乳动物的屏障,使得其对哺乳动物的潜在威胁越来越大,由此可见对禽流感病毒的遗传进化分析尤为重要。本论文对湖南地区近4年分离的17个H9N2代表株的遗传进化情况进行系统分析,并筛选出候选疫苗株进行保护效果评价。选取近4年间的分离的17株H9N2代表株进行全基因测序,并绘制HA、NA基因片段构建进化树进行遗传分析。结果表明,这期间湖南地区流行的H9N2属于HK/Y280/97/like亚系,但与HK/Y280/97/like以及当地使用的疫苗株YBF003同源性低。许多抗原位点发生变化,特别是受体结合位点226位为赖氨酸（L）。在本研究中,基于H9N2病毒遗传进化分析,进一步分析其抗原性和生物学特性,筛选出H9N2疫苗候选株XKY46。2017年01月于湖南省地区养殖场及活禽市场分离,HA效价109,EID50为108.46,具有很好的繁殖能力,无传支混合感染,热稳定。免疫一次抗体水平能达到9以上,比商品化YBF003疫苗高2个滴度,整体保护率为93.3%。综上可知,XKY46是一个良好的候选疫苗株。本研究为评价XKY46毒株以不同方式灭活、不同佐剂用于灭活疫苗的免疫效果。分别采用不同浓度甲醛溶液、β-丙内酯对病毒灭活。对选取3种进口白油、2种国产白油和本实验室自主研制的相关物理生化特性进行测试,从而评价实验室自主研制的白油的性能。结果表明用β-丙内酯,4℃灭活24 h后的抗原,灭活方式优于其他方法。新佐剂疫在水中较容易扩散,并且反复冻融后分层情况不严重,动物免疫后,肌体产生抗体时间短于其他组,并且效价高;对动物免疫持续期长。综上可见β-丙内酯灭活方法以及新佐剂可用于H9N2亚型禽流感疫苗生产中。
孙志豪[9]（2018）在《H7N9亚型禽流感病毒检测方法的建立及标记疫苗的研制》文中认为H7N9亚型禽流感病毒（Avianinfluenzavirus,AIV）是一种新出现的人兽共患病原,自从20]3年首次在我国报道以来,在人类已引起5波流行,截止2017年]0月26日,共有1567人发病,其中包括615例死亡病例,病死率接近40%。早期的H7N9亚型AIV对家禽是低致病性的,家禽感染后无明显症状。2017年初开始出现对家禽呈高致病性的H7N9亚型AIV,分布于全国17个省份,并引发多起疫情。2017年下半年,重组AIV（H5+H7）二价灭活疫苗使用后,有效控制了家禽中的H7N9疫情,也显着减少了人的感染病例。但目前仍可在我国个别省份分离到对鸡和鸭均呈高致病性的H7N9和H7N2亚型AIV,使我国H7亚型AIV的防控面临新的挑战。因此迫切需要研制可用于区别自然感染和疫苗免疫动物的标记疫苗以及快速检测方法用于H7亚型AIV的防控和净化。1.鉴别九种禽流感病毒神经氨酸酶基因的—步法多重探针组合rRT-PCR方法的建立目前,已经在家禽和野鸟中鉴定出了 9种不同的禽流感病毒神经氨酸酶（NA）亚型,由于AIV很容易发生重组,同一种血凝素（HA）亚型的AIV可能存在不同的NA组合,在鉴定HA的同时也需要鉴定出NA亚型。我们设计了 9个亚型的NA引物-探针对,根据探针的不同荧光染料（FAM,HEX和TexasRed）将其分成3组,开发了一种基于多重探针组合的一步法rRT-PCR。结果显示,该多重rRT-PCR方法中的每组引物·探针对检测相应的不同亚型的NA特异性良好,无交叉反应;其检测限均小于100copies和100EID50。利用该方法分别检测人工感染H9N2病毒鸡的排毒样品和活禽交易市场的临床样品,结果显示,该方法检测结果的阳性率与病毒分离和基因测序方法的结果相一致,且灵敏度更高。综上所述,我们建立的这种快速、特异且灵敏的多重探针组合rRT-PCR方法,为NA分型提供了新的快速检测方法。2.快速检测H7亚型禽流感病毒的免疫胶体金试纸条的研制以H7N9亚型AIV（A/Chicken/Jiangsu/W1-8/2015,W1-8）作为免疫原制备单克隆抗体,利用抗原逃逸试验和HA基因序列测定及分析确定其针对的抗原表位,选择具有不同抗原表位的单抗研制检测H7亚型AIV的免疫胶体金试纸条。结果显示,共获得了13株具有血凝抑制特性的单抗,鉴定出198、227和235位3个抗原表位。选取了针对227位和235位的单抗制备免疫胶体金试纸条,结果表明,该试纸条具有良好的特异性、稳定性。棉拭和组织样品的检测限均为2.5 1og10 EID50/0.1mL。活禽市场样品的病毒检出率为3%（6/200）,与病毒分离结果（4.5%,9/200）和HA基因PCR测序结果（3.5%,7/200）一致。这为现场快速检测H7亚型AIV提供了新方法。3.H7N9亚型禽流感病毒灭活标记疫苗的研制通过多肽芯片的检测方法成功筛选到针对H7N9亚型AIV HA2上的特异性抗原表位H7-12肽,利用反向遗传技术修饰该抗原表位,并以H7N9毒株A/Chicken/Huadong/JD/17（JD/17）为骨架,研制出H7N9亚型AIV灭活标记疫苗候选株A/Chicken/Huadong/JD-cHA/17（JD-cHA/17）。该疫苗候选株的 HA 效价为 10 Log2,EID50 为 9.67 Log10oEID50/mL;在一次免疫鸡群3周后,HI抗体效价能达到9.2±0.6,表明该疫苗候选株具有良好的抗原性和免疫原性。攻毒保护试验结果表明,该疫苗候选株的免疫保护效果与母本毒株相当,对高致病性（HP）和低致病性（LP）H7N9AIVs均有100%的保护率。利用H7-12多肽芯片技术成功检测出自然感染后第3d血清转阳情况[信噪比（SNR）=2.33±0.15],灵敏度高于HI试验（HI=0）。疫苗候选株DIVA特性验证结果显示,利用H7-12多肽芯片检测疫苗候选株JD-cHA/17免疫血清（HI=9.2±0.6）和野生型毒株JD/17免疫血清（HI=9.1±0.5）,其针对H7-12多肽的SNR值分别为0.44±0.14和6.39±0.13,差异极显着,表明该灭活标记疫苗不能诱导针对H7特异性的H7-12多肽的抗体,具有DIVA特性和广泛的应用前景。4.区分H7N9亚型禽流感标记疫苗免疫血清和野毒株感染血清的竞争抑制ELISA方法的建立利用H7特异性表位H7-12多肽与BSA偶联作为免疫原,成功制备了 6株单克隆抗体。IFA和Western-blot试验结果显示,该6株单抗均能与H7N9亚型AIVJD/17反应,特异性良好。以JD/17自然感染血清和JD-cHA/17免疫血清为测试血清样品,利用竞争抑制ELISA方法,成功筛选出具有高抑制率的单抗3G10。将H7-12多肽作为包被抗原,纯化的3G10单抗腹水以辣根过氧化酶（HRP）进行标记作为检测抗体,建立针对H7-12抗体的竞争抑制ELISA方法。对竞争抑制ELISA方法的反应条件进行优化,确定抗原的最适包被浓度为50μ吨/mL,酶标抗体的最适工作浓度为1:200,待检血清最适稀释度为1:4,封闭液的最佳选择为8%的小牛血清封闭90 min,TMB的最佳反应时间为10min。判断标准为抑制率≥20%为阳性,≤16%为阴性。运用本方法检测JD/17自然感染血清为阳性,检测JD-cHA/17 免疫血清,HI、H3、H4、H5（RE-6、RE-7 和 RE-8）、H6、H9 和 H10 亚型 AIV的阳性血清均为阴性,说明该竞争抑制ELISA方法具有良好的特异性,可有效区分JD/17自然感染血清和JD-cHA/17免疫血清。
潘俊慧[10]（2018）在《二价禽流感DNA疫苗的构建及免疫效力评估》文中研究指明高致病性禽流感（Highly pathogenic avian influenza,HPAI）是一种可引起多种动物急性且高度传播的烈性疾病,并且对人类健康产生严重的威胁。由于流感病毒的突变率很高,只有抗原匹配性良好的疫苗才能提供坚实有效的防控。DNA疫苗是将目标抗原基因插入到真核表达载体中构建而成,进而接种于宿主体内发挥相应抗原的免疫保护作用。DNA疫苗具有实验操作简单,节省成本和时间等优点,是目前最有希望的一种防控HPAI、快速应对病毒变异的基因工程疫苗之一。针对目前主要流行的clade 2.3.2和clade 2.3.4.4分支H5亚型高致病性禽流感病毒（HPAIV）,构建了表达A/duck/Anhui/S1246/2015（H5N1）（AH/S1246）HA蛋白的DNA质粒pCA-S1246,体外表达鉴定后,进行了有效免疫剂量以及HI抗体持续期测定试验。同时对表达A/chicken/Guizhou/4/2013（H5N1）（GZ/4）HA蛋白的DNA质粒pCA-GZ4进行了免疫剂量测定、异源攻毒保护试验以及HI抗体持续期测定等系统的免疫效力评估。实验结果表明,pCA-S1246和pCA-GZ4的有效免疫剂量均为15μg,在监测期限内,其HI抗体水平在加强免疫后均能维持在4 log2左右,pCA-GZ4还可以有效抵御4株异源病毒的致死性攻击,可以作为抵御clade 2.3.4.4分支病毒的储备疫苗。在此基础上,采用融合蛋白和双表达框的策略分别构建了同时表达GZ/4和AH/S1246 HA蛋白的两种双价重组DNA质粒pCA-FGZ4-S1246和p CA-CGZ4-S1246。体外表达鉴定结果显示,融合表达DNA质粒p CA-FGZ4-S1246可以表达通过小肽连接的融合蛋白,串联双表达DNA质粒pCA-CGZ4-S1246能够稳定表达GZ4 HA蛋白和S1246 HA蛋白。免疫效力试验发现,两种质粒混合免疫可以有效抵御GZ/4和AH/S1246的致死性攻击,p CA-FGZ4-S1246仅能对两种病毒的攻击提供部分的保护;pCA-CGZ4-S1246对GZ/4病毒的攻击可以提供完全保护,对AH/S1246病毒的攻击提供60%的保护,结果提示有必要对双表达框质粒的构建进行进一步的优化。针对监测到的H7N9亚型HPAIV,构建了表达A/chicken/Guangxi/SD098/2017（H7N9）（GX/SD098）HA蛋白的重组质粒pCA-SD098,同时通过背靠背的优化方法,利用双表达框策略构建了共表达H7N9和H5N1 HPAIV HA蛋白的双价DNA疫苗质粒p CA-GZ4-SD098。体外鉴定表明,单质粒p CA-SD098可高效表达GX/SD098的HA蛋白,双表达框重组DNA质粒pCA-GZ4-SD098可以同时高效表达GX/SD098和GZ/4的HA蛋白。对构建好的DNA质粒进行免疫效力评价,pCA-SD098能够100%抵御H7N9 HPAIV的致死性攻击,双价DNA质粒pCA-GZ4-SD098、质粒pCA-SD098和pCA-GZ4混合免疫均能同时对H7N9和H5N1 HPAIV的致死性攻击提供100%的保护,有效降低低致病性H7N9病毒感染后的载毒量。结果表明,双价质粒pCA-GZ4-SD098可以作为一种通用的DNA疫苗来同时防控目前流行的H7N9和H5N1HPAIV,但其最适免疫剂量等还需做进一步的试验。本研究针对目前主要流行的H5亚型和H7亚型HPAIV,分别构建了单独表达和共表达不同HA蛋白的几种DNA质粒,并对其免疫效力进行了评估,结果表明,背靠背双表达框重组质粒、两种单表达质粒的混合免疫均可以诱导产生对两种外源HA蛋白的有效保护,双价质粒pCA-GZ4-SD098可以同时抵御目前流行的H7N9和H5N1 HPAIV的致死性攻击,为进一步构建三价以及多价DNA疫苗打下了坚实的基础,并有望成为一种通用型的禽流感疫苗。
二、免疫禽流感疫苗HI抗体的试验研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、免疫禽流感疫苗HI抗体的试验研究（论文提纲范文）
（1）重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（H5N1 Re-11株+Re-12株，H7N9 H7-Re3株）研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 禽流感病毒介绍 |
| 1.2 H5和H7亚型禽流感的流行及危害 |
| 1.2.1 H5亚型禽流感的流行及危害 |
| 1.2.2 H7亚型禽流感的流行及危害 |
| 1.2.3 H7N9亚型流感的流行和危害 |
| 1.3 H5、H7亚型禽流感的防控 |
| 1.3.1 H5亚型禽流感疫苗研究进展 |
| 1.3.2 H7N9禽流感疫苗研究进展 |
| 1.3.3 禽流感综合防治措施 |
| 1.4 本研究的目的和意义 |
| 第二章 重组禽流感病毒H7N9亚型H7-RE3株生物学特性研究 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 病毒株 |
| 2.1.2 实验动物及试验地 |
| 2.1.3 标准阳性血清及抗原 |
| 2.1.4 疫苗 |
| 2.1.5 主要试剂和仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 重组禽流感病毒H7-Re3株在鸡胚中的增殖及其鉴定 |
| 2.2.2 重组禽流感病毒H7-Re3株的致病性试验 |
| 2.2.3 重组禽流感病毒H7-Re3株灭活疫苗的免疫效力试验 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 重组禽流感病毒H7-Re3株在鸡胚中的增殖和遗传稳定性结果 |
| 2.3.2 致病性试验结果 |
| 2.3.3 重组禽流感病毒H7-Re3株灭活疫苗的免疫效力试验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗的实验室研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 疫苗用毒株 |
| 3.1.2 效检病毒株 |
| 3.1.3 试验鸡胚和试验动物 |
| 3.1.4 HI抗原和标准阳性血清 |
| 3.1.5 主要试剂和仪器 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 活性成分抗原相容性研究 |
| 3.2.2 安全性检验 |
| 3.2.3 疫苗效力检验 |
| 3.2.4 3批疫苗免疫效力试验 |
| 3.2.5 对流行毒株的免疫效力试验 |
| 3.2.6 重组禽流感H7亚型H7-Re3株HI抗体与攻毒保护关系研究 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 抗原病毒液制备及浓缩结果 |
| 3.3.2 病毒液灭活检验结果 |
| 3.3.3 制备疫苗检验结果 |
| 3.3.4 安全性检测结果 |
| 3.3.5 两种不同抗原含量的三价苗分别与三种单苗免疫效力比较结果 |
| 3.3.6 3批三价疫苗免疫效力试验结果 |
| 3.3.7 对流行毒株的免疫效力试验结果 |
| 3.3.8 抗体与攻毒保护关系研究结果 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗的临床应用评估 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 抗原及标准阳性血清 |
| 4.1.2 疫苗 |
| 4.1.3 试验动物及场地 |
| 4.1.4 试剂和仪器 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 三价疫苗对山东某场白羽肉种鸡的安全性和免疫效果研究 |
| 4.2.2 三价疫苗对肇东某场商品蛋鸡的安全性和免疫效果研究 |
| 4.2.3 三价疫苗对宁夏某场蛋种鸡的安全性和免疫效果研究 |
| 4.2.4 三价疫苗对山东某场种鸭的安全性和免疫效果研究 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 安全性评估结果 |
| 4.3.2 三价疫苗对山东某场白羽肉种鸡的免疫效果研究结果 |
| 4.3.3 三价疫苗对肇东某场商品蛋鸡的免疫效果研究结果 |
| 4.3.4 三价疫苗对宁夏某场蛋种鸡的免疫效果研究结果 |
| 4.3.5 三价疫苗对山东某场种鸭的免疫效果研究结果 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（2）H5+H7亚型禽流感病毒样颗粒疫苗的构建及免疫效果评估（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第1章 综述 |
| 引言 |
| 1. 禽流感病毒及其致病性 |
| 1.1 禽流感病毒 |
| 1.2 禽流感病毒的致病性 |
| 2. 禽流感病毒疫苗研究进展 |
| 3. 病毒样颗粒疫苗研究进展 |
| 3.1 病毒样颗粒疫苗的研发技术 |
| 3.2 流感病毒VLP的细胞表达系统 |
| 3.3 禽流感病毒抗原在VLP疫苗研制中的应用 |
| 3.4 VLP疫苗的局限性和面临的挑战 |
| 3.5 VLP的未来趋势 |
| 第2章 H5N1亚型禽流感病毒样颗粒疫苗的制备及免疫效果评估 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 细胞、质粒和毒株 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 鸡胚及动物实验 |
| 1.5 试剂配制 |
| 1.6 主要分子生物学软件 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 重组穿梭质粒的构建 |
| 2.2 重组杆状病毒的拯救 |
| 2.3 重组杆状病毒的鉴定 |
| 2.4 重组杆状病毒的纯化 |
| 2.5 重组杆状病毒的扩大培养 |
| 2.6 VLP的组装、浓缩、超离与鉴定 |
| 2.7 疫苗的制备 |
| 2.8 病毒的扩增及生物学特性 |
| 2.9 疫苗免疫实验 |
| 2.10 攻毒保护实验 |
| 2.11 统计学分析 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 重组穿梭质粒的构建 |
| 3.2 重组杆状病毒的鉴定 |
| 3.3 rBac-TT3-HA的HA滴度测定 |
| 3.4 透射电镜观察 |
| 3.5 H5 VLP的HA滴度测定 |
| 3.6 H5 VLP疫苗诱导的抗体应答测定 |
| 3.7 攻毒保护实验 |
| 4. 讨论 |
| 第3章 H5+H7亚型禽流感病毒样颗粒疫苗的制备及免疫效果评估 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 细胞和毒株 |
| 1.2 主要试剂与仪器 |
| 1.3 鸡胚与实验动物 |
| 1.4 主要试剂配制 |
| 1.5 主要分子生物学软件 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 重组杆状病毒的扩大培养 |
| 2.2 VLP的组装、浓缩、超离与鉴定 |
| 2.3 VLP疫苗的制备 |
| 2.4 疫苗免疫实验 |
| 2.5 TT3和GD15病毒的准备 |
| 2.6 攻毒保护实验 |
| 2.7 统计学分析 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 透射电镜观察 |
| 3.2 H5 VLP和H7 VLP的HA滴度测定 |
| 3.3 H5+H7 VLP疫苗诱导的抗体应答检测 |
| 3.4 攻毒保护实验 |
| 4. 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（3）禽流感（H5+H7）重组杆状病毒载体三价灭活疫苗对家禽免疫效果研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 主要符号对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 禽流感病毒概述 |
| 1.2 H5 亚型禽流感的流行与危害 |
| 1.3 H7 亚型禽流感的流行与危害 |
| 1.4 高致病性禽流感对人的危害 |
| 1.5 我国H5 亚型和H7 亚型高致病性禽流感的免疫防控 |
| 1.5.1 全病毒灭活疫苗 |
| 1.5.2 重组病毒活载体疫苗 |
| 1.5.3 DNA疫苗 |
| 1.5.4 杆状病毒载体疫苗 |
| 1.6 本研究的目的和意义 |
| 第二章 禽流感(H5+H7)重组杆状病毒载体三价灭活疫苗的安全性和有效性研究 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 病毒株、抗原及血清 |
| 2.1.2 疫苗 |
| 2.1.3 试验动物、鸡胚及试验场所 |
| 2.1.4 主要试剂和仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 安全性试验 |
| 2.2.1.1 单剂量接种的安全试验 |
| 2.2.1.2 超剂量接种的安全试验 |
| 2.2.2 免疫效力试验 |
| 2.2.2.1 免疫 |
| 2.2.2.2 HI抗体检测 |
| 2.2.2.3 攻毒试验 |
| 2.2.3 对H5 亚型和H7 亚型AIV异源代表株的攻毒保护效力试验 |
| 2.2.3.1 免疫 |
| 2.2.3.2 HI抗体检测 |
| 2.2.3.3 攻毒试验 |
| 2.2.4 HI抗体与攻毒保护关系试验 |
| 2.2.4.1 免疫 |
| 2.2.4.2 抗体测定与重新分组 |
| 2.2.4.3 攻毒试验 |
| 2.2.4.3.1 H5N6 亚型AIV攻毒试验 |
| 2.2.4.3.2 H5N1 亚型AIV攻毒试验 |
| 2.2.4.3.3 H7N9 亚型AIV攻毒试验 |
| 2.2.5 杆状病毒载体疫苗与市售商品疫苗的免疫效力比较 |
| 2.2.5.1 免疫及HI抗体检测 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 安全性试验结果 |
| 2.3.1.1 单剂量接种的安全试验结果 |
| 2.3.1.2 超剂量接种的安全试验结果 |
| 2.3.2 免疫效力试验结果 |
| 2.3.2.1 抗体检测结果 |
| 2.3.2.2 攻毒试验结果 |
| 2.3.3 杆状病毒载体疫苗对 H5 亚型和 H7 亚型异源代表株的攻毒保护效力试验结果 |
| 2.3.3.1 抗体测定结果 |
| 2.3.3.2 攻毒试验结果 |
| 2.3.4 HI抗体与攻毒保护关系试验结果 |
| 2.3.4.1 H5 亚型Re-11 株HI抗体效价与攻毒保护平行关系试验结果 |
| 2.3.4.1.1 HI抗体测定结果 |
| 2.3.4.1.2 重新分组及H5N6 亚型AIV攻毒试验结果 |
| 2.3.4.2 H5 亚型Re-12 株HI抗体效价与攻毒保护平行关系试验结果 |
| 2.3.4.2.1 HI抗体测定结果 |
| 2.3.4.2.2 重新分组及H5N1 亚型AIV攻毒试验结果 |
| 2.3.4.3 H7 亚型H7-Re2株HI抗体效价与攻毒保护平行关系试验结果 |
| 2.3.4.3.1 HI抗体测定结果 |
| 2.3.4.3.2 重新分组及H7N9 亚型AIV攻毒试验结果 |
| 2.3.5 杆状病毒载体疫苗与市售商品疫苗的免疫效力比较结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 禽流感(H5+H7)重组杆状病毒载体三价灭活疫苗对家禽的免疫持续期研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 病毒株、抗原及血清 |
| 3.1.2 疫苗 |
| 3.1.3 试验动物、鸡胚 |
| 3.1.4 主要试剂和仪器 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 SPF鸡免疫抗体持续期试验 |
| 3.2.2 商品蛋鸡免疫抗体持续期试验 |
| 3.2.2.1 免疫 |
| 3.2.2.2 HI抗体检测 |
| 3.2.2.3 攻毒试验 |
| 3.2.3 商品鸭的疫苗安全性试验 |
| 3.2.3.1 单剂量接种的安全试验 |
| 3.2.3.2 超剂量接种的安全试验 |
| 3.2.4 商品鸭免疫抗体持续期试验 |
| 3.2.4.1 免疫 |
| 3.2.4.2 HI抗体检测 |
| 3.2.4.3 攻毒试验 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 SPF鸡免疫抗体持续期试验结果 |
| 3.3.2 商品蛋鸡免疫抗体持续期试验结果 |
| 3.3.2.1 抗体测定结果 |
| 3.3.2.2 攻毒试验结果 |
| 3.3.3 商品鸭的疫苗安全性试验结果 |
| 3.3.3.1 单剂量接种的安全试验结果 |
| 3.3.3.2 超剂量接种的安全试验结果 |
| 3.3.4 商品鸭免疫抗体持续期试验结果 |
| 3.3.4.1 抗体测定结果 |
| 3.3.4.2 攻毒试验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（4）重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗研究及应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 禽流感病毒概述 |
| 1.2 H7亚型禽流感的流行 |
| 1.3 H5亚型禽流感的流行 |
| 1.4 高致病禽流感疫苗的研究进展 |
| 1.4.1 全病毒灭活疫苗 |
| 1.4.2 重组病毒活载体疫苗 |
| 1.4.3 DNA疫苗 |
| 1.4.4 通用流感疫苗 |
| 1.5 本研究的目的和意义 |
| 第二章 重组禽流感病毒H5N1 亚型Re-11 株、Re-12 株和H7N9 亚型H7-Re2 株生物特性研究 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 毒种 |
| 2.1.2 病毒株 |
| 2.1.3 试验动物 |
| 2.1.4 血清 |
| 2.1.5 主要试剂和仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 种毒的系统鉴定 |
| 2.2.2 种毒的传代及病毒含量的测定 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 种毒的系统鉴定 |
| 2.3.2 种毒的传代及病毒含量的测定结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗的实验室研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 制苗用种毒 |
| 3.1.2 攻毒用病毒株 |
| 3.1.3 试验动物 |
| 3.1.4 检测用HI抗原 |
| 3.1.5 主要试剂和仪器 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 抗原配比及有效成分相容性研究 |
| 3.2.2 3批三价疫苗物理性状检验 |
| 3.2.3 3批三价疫苗安全性试验 |
| 3.2.4 3批三价疫苗免疫效力试验 |
| 3.2.5 三价疫苗对流行毒株的免疫效力试验 |
| 3.2.6 HI抗体与攻毒保护关系研究 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 抗原配比及有效成分相容性研究 |
| 3.3.2 成品物理性状的检验 |
| 3.3.3 3批三价疫苗安全性试验 |
| 3.3.4 3批三价疫苗免疫效力试验 |
| 3.3.5 三价疫苗对流行毒株的免疫效力试验 |
| 3.3.6 HI抗体与攻毒保护关系研究 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗的临床应用评估 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 疫苗 |
| 4.1.2 抗原及标准阳性血清 |
| 4.1.3 试验动物 |
| 4.1.4 主要试剂和仪器 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 蛋种鸡安全性和免疫效果评估 |
| 4.2.2 白羽肉种鸡安全性和免疫效果评估 |
| 4.2.3 北京油鸡安全性和免疫效果评估 |
| 4.2.4 固始鸡安全性和免疫效果评估 |
| 4.2.5 商品白羽肉鸡安全性和免疫效果评估 |
| 4.2.6 种鸭安全性和免疫效果评估 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 安全性评估结果 |
| 4.3.2 蛋种鸡免疫效果评估 |
| 4.3.3 白羽肉种鸡免疫效果评估 |
| 4.3.4 北京油鸡免疫效果评估 |
| 4.3.5 固始鸡免疫效果评估 |
| 4.3.6 商品白羽鸡免疫效果评估 |
| 4.3.7 种鸭免疫效果评估 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（5）表达H7N9亚型禽流感病毒血凝素基因的重组新城疫病毒载体疫苗的构建及血凝素抗原表位鉴定（论文提纲范文）
| 摘要 Abstract 符号说明 综述 |
| H7N9亚型禽流感疫苗研究进展 1. |
| H7N9亚型禽流感病毒流行现状 2. |
| H7N9禽流感疫苗的临床前研究 3. |
| H7N9疫苗诱导的抗体应答特征 4. |
| B细胞表位鉴定对疫苗设计的启示 参考文献 第一章 |
| 表达H7N9亚型禽流感病毒血凝素基因的重组新城疫病毒载体疫苗的构建与评价 1. |
| 材料 2. |
| 方法 3. |
| 结果 4. |
| 讨论 参考文献 第二章 |
| H7N9禽流感病毒HA蛋白B细胞抗原表位的预测及排谱 1. |
| 材料 2. |
| 方法 3. |
| 结果 4. |
| 讨论 参考文献 第三章 |
| H7N9禽流感病毒HA蛋白优势表位的鉴定 1 |
| 材料 2 |
| 方法 3 |
| 结果 4 |
| 讨论 参考文献 全文小结 致谢 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录 |
（6）重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗研究及应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略表 |
| 第一章 引言 |
| 1.1 禽流感病毒概述 |
| 1.2 高致病性禽流感在家禽中的危害 |
| 1.2.1 H5 亚型禽流感在家禽中的危害 |
| 1.2.2 H7 亚型禽流感在家禽中的危害 |
| 1.3 高致病性禽流感对人的危害 |
| 1.4 高致病性禽流感的疫苗研究进展 |
| 1.4.1 重组病毒活载体疫苗 |
| 1.4.2 DNA疫苗 |
| 1.4.3 全病毒灭活疫苗 |
| 1.5 本研究的目的和意义 |
| 第二章 H7-Re1 株疫苗种毒的生物学特性研究 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 病毒 |
| 2.1.2 试验鸡和鸡胚 |
| 2.1.3 血清 |
| 2.1.4 主要试剂和仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 鸡半数致死量(LD_(50))的测定 |
| 2.2.2 种毒的传代 |
| 2.2.3 病毒含量的测定 |
| 2.2.3.1 鸡胚半数感染量测定(EID_(50)) |
| 2.2.3.2 红细胞凝集价的测定 |
| 2.2.4 鸡胚毒力鉴定 |
| 2.2.5 雏鸡毒力鉴定 |
| 2.2.6 种毒的序列测定 |
| 2.2.7 特异性测定 |
| 2.2.8 纯净性检验 |
| 2.2.8.1 无菌检验 |
| 2.2.8.2 支原体检验 |
| 2.2.8.3 鸡胚法外源病毒检验 |
| 2.2.8.4 细胞法外源病毒检验 |
| 2.2.9 免疫原性试验 |
| 2.2.9.1 疫苗的制备 |
| 2.2.9.2 免疫 |
| 2.2.9.3 抗体测定 |
| 2.2.9.4 攻毒试验 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 鸡半数致死量(LD_(50))测定结果 |
| 2.3.2 病毒含量的测定结果 |
| 2.3.2.1 鸡胚半数感染量测定(EID_(50)) |
| 2.3.2.2 红细胞凝集价的测定结果 |
| 2.3.3 鸡胚毒力鉴定结果 |
| 2.3.4 雏鸡毒力鉴定结果 |
| 2.3.5 序列测定结果 |
| 2.3.6 特异性测定结果 |
| 2.3.7 种毒的纯净性检验结果 |
| 2.3.8 种毒的免疫原性试验结果 |
| 2.3.8.1 抗体测定结果 |
| 2.3.8.2 攻毒试验 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗的安全性和有效性研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 病毒株、抗原及血清 |
| 3.1.2 抗原及血清 |
| 3.1.3 试验动物和鸡胚 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 抗原配比研究 |
| 3.2.2 安全性试验 |
| 3.2.2.1 不同途径一次单剂量接种不同日龄SPF鸡的安全性试验 |
| 3.2.2.2 单剂量重复接种的安全性试验 |
| 3.2.2.3 大剂量接种的安全性试验 |
| 3.2.3 免疫效力试验 |
| 3.2.3.1 免疫 |
| 3.2.3.2 抗体检测 |
| 3.2.3.3 攻毒试验 |
| 3.2.4 最小免疫剂量试验 |
| 3.2.5 HI抗体与攻毒保护关系试验 |
| 3.2.6 免疫程序试验 |
| 3.2.6.1 免疫 |
| 3.2.6.2 抗体测定 |
| 3.2.6.3 攻毒试验 |
| 3.2.7 免疫持续期试验 |
| 3.2.7.1 免疫 |
| 3.2.7.2 抗体测定 |
| 3.2.7.3 攻毒试验 |
| 3.2.8 统计学分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 抗原配比研究结果 |
| 3.3.2 安全性试验结果 |
| 3.3.2.1 不同途径一次单剂量接种不同日龄SPF鸡的安全性试验结果 |
| 3.3.2.2 单剂量重复接种的安全性试验结果 |
| 3.3.2.3 大剂量接种的安全性试验结果 |
| 3.3.3 免疫效力试验结果 |
| 3.3.3.1 抗体检测结果 |
| 3.3.3.2 攻毒试验结果 |
| 3.3.4 最小免疫剂量试验结果 |
| 3.3.4.1 抗体检测结果 |
| 3.3.4.2 攻毒试验结果 |
| 3.3.5 HI抗体与攻毒保护关系试验结果 |
| 3.3.6 免疫程序试验结果 |
| 3.3.6.1 抗体测定结果 |
| 3.3.6.2 攻毒试验结果 |
| 3.3.7 免疫持续期试验结果 |
| 3.3.7.1 抗体测定结果 |
| 3.3.7.2 攻毒试验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗的临床应用评估 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 病毒株、抗原及血清 |
| 4.1.2 疫苗 |
| 4.1.3 试验用动物及鸡胚 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 安全性试验 |
| 4.2.2 蛋鸡免疫效力试验 |
| 4.2.2.1 免疫 |
| 4.2.2.2 抗体检测 |
| 4.2.2.3 攻毒试验 |
| 4.2.3 白羽肉鸡免疫效力试验 |
| 4.2.3.1 免疫 |
| 4.2.3.2 抗体检测 |
| 4.2.3.3 攻毒试验 |
| 4.2.4 黄羽肉鸡免疫效力试验 |
| 4.2.4.1 免疫 |
| 4.2.4.2 抗体检测 |
| 4.2.4.3 攻毒试验 |
| 4.2.5 蛋鸭免疫效力试验 |
| 4.2.5.1 免疫 |
| 4.2.5.2 HI抗体效价检测 |
| 4.2.5.3 攻毒试验 |
| 4.2.6 肉鸭免疫效力试验 |
| 4.2.6.1 免疫 |
| 4.2.6.2 HI抗体效价检测 |
| 4.2.6.3 病毒分离 |
| 4.2.7 种鹅免疫效力试验 |
| 4.2.7.1 免疫 |
| 4.2.7.2 HI抗体效价检测 |
| 4.2.7.3 攻毒试验 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 安全性试验结果 |
| 4.3.2 蛋鸡免疫效力试验结果 |
| 4.3.2.1 HI抗体效价检测结果 |
| 4.3.2.2 免疫后攻毒保护性试验 |
| 4.3.3 白羽肉鸡免疫效力试验结果 |
| 4.3.3.1 HI抗体效价检测结果 |
| 4.3.3.2 免疫后攻毒保护性试验 |
| 4.3.4 黄羽肉鸡免疫效力试验结果 |
| 4.3.4.1 HI抗体效价检测结果 |
| 4.3.4.2 免疫后攻毒保护性试验 |
| 4.3.5 蛋鸭免疫效力试验结果 |
| 4.3.5.1 HI抗体效价检测结果 |
| 4.3.5.2 免疫后攻毒保护性试验 |
| 4.3.6 肉鸭免疫效力试验结果 |
| 4.3.6.1 HI抗体效价检测结果 |
| 4.3.6.2 病毒分离结果 |
| 4.3.7 种鹅免疫效力试验结果 |
| 4.3.7.1 HI抗体效价检测结果 |
| 4.3.7.2 免疫后攻毒保护性试验 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（7）H5、H7疫苗对珍禽的免疫效果评估（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言 |
| 1.1 禽流感概述 |
| 1.1.1 禽流感病原学特征 |
| 1.1.2 禽流感病毒基因和主要蛋白 |
| 1.1.3 禽流感流行病学特征 |
| 1.1.4 临床症状和病理变化 |
| 1.2 国内外研究进展 |
| 1.2.1 诊断 |
| 1.2.2 禽流感的防控 |
| 1.2.3 禽流感疫苗研究进展 |
| 1.3 本研究的目的和意义 |
| 第二章 重组禽流感病毒二价灭活疫苗(H5+H7)对雉鸡免疫效果的研究 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 疫苗 |
| 2.1.2 试验动物 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 血清 |
| 2.1.5 主要仪器 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.3 血清采集与分离 |
| 2.4 抗体检测 |
| 2.4.1 1 %红细胞悬液 |
| 2.4.2 血凝(HA)试验 |
| 2.4.3 抗原回滴 |
| 2.4.4 血凝抑制(HI)试验 |
| 2.5 判断标准 |
| 2.6 结果 |
| 2.6.1 试验雉鸡血清中H5 AIV(Re-8)抗体检测结果 |
| 2.6.2 试验雉鸡血清中H7 AIV(H7N9)抗体检测结果 |
| 2.6.3 试验雉鸡血清中H5和H7 亚型抗体检测结果比较 |
| 2.7 分析与讨论 |
| 2.7.1 分析 |
| 2.7.2 讨论 |
| 2.8 小结 |
| 第三章 重组禽流感病毒二价灭活疫苗(H5+H7)对珍珠鸡免疫效果的研究 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 疫苗 |
| 3.1.2 试验动物 |
| 3.1.3 主要试剂 |
| 3.1.4 血清 |
| 3.1.5 主要仪器 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.3 血清采集与分离 |
| 3.4 抗体检测 |
| 3.5 判断标准 |
| 3.6 结果 |
| 3.6.1 试验珍珠鸡血清中H5AIV(Re-8)抗体检测结果 |
| 3.6.2 试验珍珠鸡血清中H7 AIV(H7N9)抗体检测结果 |
| 3.6.3 试验珍珠鸡血清中H5和H7 亚型抗体检测结果比较 |
| 3.7 分析与讨论 |
| 3.7.1 分析 |
| 3.7.2 讨论 |
| 3.8 小结 |
| 第四章 重组禽流感病毒二价灭活疫苗(H5+H7)对孔雀免疫效果的研究 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.1.1 疫苗 |
| 4.1.2 试验动物 |
| 4.1.3 主要试剂 |
| 4.1.4 血清 |
| 4.1.5 主要仪器 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.3 血清采集与分离 |
| 4.4 抗体检测 |
| 4.5 判断标准 |
| 4.6 结果 |
| 4.6.1 试验孔雀血清中H5 AIV(Re-8)抗体检测结果 |
| 4.6.2 试验孔雀血清中H7 AIV(H7N9)抗体检测结果 |
| 4.6.3 试验孔雀血清中H5和H7 亚型抗体检测结果比较 |
| 4.7 分析与讨论 |
| 4.7.1 分析 |
| 4.7.2 讨论 |
| 4.8 小结 |
| 第五章 重组禽流感病毒二价灭活疫苗(H5+H7)对鸸鹋免疫效果的研究 |
| 5.1 试验材料 |
| 5.1.1 疫苗 |
| 5.1.2 试验动物 |
| 5.1.3 主要试剂 |
| 5.1.4 血清 |
| 5.1.5 主要仪器 |
| 5.2 试验方法 |
| 5.3 血清采集与分离 |
| 5.4 抗体检测 |
| 5.5 判断标准 |
| 5.6 结果 |
| 5.6.1 试验鸸鹋血清中H5 AIV(Re-8)抗体检测结果 |
| 5.6.2 试验鸸鹋血清中H7 AIV(H7N9)抗体检测结果 |
| 5.6.3 试验鸸鹋血清中H5和H7 亚型抗体检测结果比较 |
| 5.7 分析与讨论 |
| 5.7.1 分析 |
| 5.7.2 讨论 |
| 5.8 小结 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（8）近4年湖南地区H9N2病毒遗传进化分析与灭活疫苗的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 Abstract 缩略语 第1章 绪论 |
| 1.1 流感病毒的分类和理化特征 |
| 1.1.1 流感病毒分类 |
| 1.1.2 流感病毒理化特征 |
| 1.2 A型流感病毒的分子形态结构和基因组蛋白 |
| 1.2.1 A型流感病毒的分子形态结构 |
| 1.2.2 A型流感病毒的基因组蛋白 |
| 1.3 H9亚型禽流感病毒的流行特征及公共危害 |
| 1.3.1 H9亚型禽流感病毒的流行特征 |
| 1.3.2 H9亚型禽流感病毒公共危害 |
| 1.3.3 H9亚型禽流感防控现状 |
| 1.4 禽流感疫苗研究进展 |
| 1.4.1 全病毒灭活疫苗 |
| 1.4.2 核酸疫苗 |
| 1.4.3 禽流感亚单位疫苗 |
| 1.4.4 重组活载体疫苗 |
| 1.4.5 减毒活疫苗 |
| 1.5 禽流感疫苗佐剂研究进展 |
| 1.5.1 铝敖 |
| 1.5.2 油乳剂 |
| 1.5.3 免疫刺激复合物 |
| 1.5.4 脂质体 |
| 1.6 结语 第2章 H9N2亚型流感病毒分离鉴定及遗传分析 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 试验材料 |
| 2.2.1 采样样本 |
| 2.2.2 试验材料 |
| 2.2.3 试验仪器 |
| 2.2.4 试验动物 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.3.1 样本的增殖 |
| 2.3.2 鸡红血球凝集试验 |
| 2.3.3 病毒RNA的提取 |
| 2.3.4 反转录PCR鉴定 |
| 2.3.5 PCR扩增HA、NA全长基因片段 |
| 2.3.6 PCR产物纯化及p MD18-T载体连接 |
| 2.3.7 目的基因序列测定与分析 |
| 2.3.8 进化树的绘制 |
| 2.3.9 病毒的纯化 |
| 2.4 结果与分析 |
| 2.4.1 HA基因遗传进化分析 |
| 2.4.2 NA基因遗传进化分析 |
| 2.5 讨论 第3章 H9N2亚型流感病毒复制能力及致病性分析 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 试验材料 |
| 3.2.1 病毒 |
| 3.2.2 试验试剂 |
| 3.2.3 实验动物 |
| 3.2.4 试验仪器 |
| 3.3 试验方法 |
| 3.3.1 病毒的EID50测定 |
| 3.3.2 热稳定性测定 |
| 3.3.3 XYK46株继代培养 |
| 3.3.4 XYK46株对雏鸡的毒力 |
| 3.3.5 XKY46株的抗原特异性试验 |
| 3.3.6 XKY46株HI滴定及交叉免疫攻毒保护试验 |
| 3.3.7 毒种保存期试验 |
| 3.4 结果 |
| 3.4.1 分离株EID50测定结果 |
| 3.4.2 热稳定性结果 |
| 3.4.3 候选株XKY46概述 |
| 3.4.4 XKY46 株病毒的继代EID50 结果 |
| 3.4.5 XKY46株对雏鸡的致病力分析 |
| 3.4.6 XKY46株的抗原特异性分析 |
| 3.4.7 XKY46株的免疫原性分析 |
| 3.4.8 毒种保存期分析 |
| 3.5 讨论 第4章 H9N2亚型流感病毒灭活疫苗制备的研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 试验材料 |
| 4.2.1 病毒 |
| 4.2.2 试验试剂 |
| 4.2.3 试验仪器 |
| 4.3 试验方法 |
| 4.3.1 不同灭活方法效力实验 |
| 4.3.2 乳化疫苗不同佐剂的效力试验 |
| 4.3.3 疫苗检验 |
| 4.3.4 疫苗免疫SPF鸡及效力检验 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 不同灭活方法免疫效力分析 |
| 4.4.2 乳化疫苗不同佐剂的效力分析 |
| 4.5 讨论 结论 参考文献 攻读学位期间发表的学术论文 致谢 |
（9）H7N9亚型禽流感病毒检测方法的建立及标记疫苗的研制（论文提纲范文）
| 摘要 Abstract 符号说明 综述 参考文献 第一章 |
| 鉴别九种禽流感病毒神经氨酸酶基因的一步法多重探针组合rRT-PCR方法的建立 1 |
| 材料与方法 2 |
| 结果 3 |
| 讨论 参考文献 第二章 |
| 快速检测H7亚型禽流感病毒的免疫胶体金试纸条的研制 1 |
| 材料 2 |
| 方法 3 |
| 结果 4 |
| 讨论 参考文献 第三章 |
| H7N9亚型禽流感病毒灭活标记疫苗的研制 1 |
| 材料与方法 2 |
| 结果 3 |
| 讨论 参考文献 第四章 |
| 区分H7N9亚型禽流感标记疫苗免疫血清和野毒株感染血清的竞争抑制ELISA方法的建立 1 |
| 材料 2 |
| 方法 3 |
| 结果 4 |
| 讨论 参考文献 全文总结 致谢 攻读博士学位期间发表的论文 |
（10）二价禽流感DNA疫苗的构建及免疫效力评估（论文提纲范文）
| 摘要 abstract 英文缩略表 第一章 引言 |
| 1.1 流感病毒概述 |
| 1.1.1 主要流行病原和多变原因 |
| 1.1.2 H5亚型流感危害 |
| 1.1.3 H7N9流感危害 |
| 1.2 流感病毒血凝素 |
| 1.3 宿主因素对传播能力影响 |
| 1.4 免疫的作用 |
| 1.4.1 免疫策略 |
| 1.5 禽流感疫苗概述 |
| 1.5.1 灭活疫苗 |
| 1.5.2 重组病毒活载体疫苗 |
| 1.5.3 RNA疫苗 |
| 1.5.4 亚单位疫苗 |
| 1.5.5 DNA疫苗 |
| 1.6 DNA疫苗研究进展 |
| 1.6.1 DNA疫苗的基本原理 |
| 1.6.2 DNA疫苗的主要特点 |
| 1.6.3 流感DNA疫苗的发展 |
| 1.6.4 影响DNA疫苗免疫应答的因素 |
| 1.7 本研究的目的和意义 第二章 clade2.3.2e和clade2.3.4.4H5亚型DNA疫苗的构建与免疫效力评估 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 质粒、毒株和细胞 |
| 2.1.2 实验中主要试剂 |
| 2.1.3 实验动物和鸡胚 |
| 2.1.4 血清与抗体 |
| 2.1.5 主要用的仪器 |
| 2.1.6 优化基因的合成 |
| 2.1.7 重组质粒pCA-S1246的构建与鉴定 |
| 2.1.8 重组质粒pCA-S1246在293T细胞中表达 |
| 2.1.9 重组质粒pCA-S1246和pCA-GZ4的有效免疫剂量测定 |
| 2.1.10 重组质粒pCA-GZ4的异源攻毒保护实验 |
| 2.1.11 重组质粒pCA-GZ4和pCA-S1246的HI抗体持续期检测 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 重组质粒pCA-S1246的鉴定 |
| 2.2.2 IFA鉴定结果 |
| 2.2.3 HA蛋白的Westernblotting结果鉴定 |
| 2.2.4 重组质粒pCA-S1246的免疫效力评估 |
| 2.2.5 重组质粒pCA-GZ4的免疫效力评估 |
| 2.3 讨论 第三章 共表达CK/GZ/4/13(H5N1)和DK/AH/S1246/15(H5N1)HA蛋白的双价DNA质粒的构建和免疫效力评估 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 毒株、质粒和细胞 |
| 3.1.2 实验中主要试剂 |
| 3.1.3 实验动物和鸡胚 |
| 3.1.4 血清与抗体 |
| 3.1.5 主要用的仪器 |
| 3.1.6 禽流感DNA疫苗双表达载体的构建及鉴定 |
| 3.1.7 重组双表达质粒在293T细胞中表达 |
| 3.1.8 重组双表达质粒的免疫效力评估 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 重组质粒pCA-CGZ4-S1246和pCA-FGZ4-S1246的酶切鉴定结果 |
| 3.2.2 重组质粒pCA-CGZ4-S1246和pCA-FGZ4-S1246的IFA的鉴定结果 |
| 3.2.3 重组质粒的Westernblotting鉴定结果 |
| 3.2.4 重组质粒针对CK/GZ/4/13的免疫效力评估结果 |
| 3.2.5 重组质粒针对DK/AH/S1246/15的免疫效力评估结果 |
| 3.3 讨论 第四章 表达H7N9HA蛋白的DNA疫苗和共表达H5和H7亚型HA蛋白的DNA疫苗的构建及免疫效力评估 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 毒株、质粒和细胞 |
| 4.1.2 实验中主要试剂 |
| 4.1.3 实验动物和鸡胚 |
| 4.1.4 血清与抗体 |
| 4.1.5 主要用的仪器 |
| 4.1.6 禽流感DNA疫苗pCA-SD098表达载体的构建及鉴定 |
| 4.1.7 重组质粒pCA-SD098在293T细胞中表达 |
| 4.1.8 禽流感DNA疫苗双表达载体pCA-GZ4-SD098的构建及鉴定 |
| 4.1.9 重组双表达质粒pCA-GZ4-SD098在293T细胞中表达 |
| 4.1.10 重组质粒的免疫效力评估 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 重组质粒pCA-SD098的鉴定 |
| 4.2.2 IFA鉴定结果 |
| 4.2.3 HA蛋白的Westernblotting结果鉴定 |
| 4.2.4 重组质粒pCA-GZ4-SD09的酶切鉴定结果 |
| 4.2.5 重组质粒pCA-GZ4-SD098的IFA鉴定结果 |
| 4.2.6 重组质粒pCA-GZ4-SD0986的Westernblotting鉴定结果 |
| 4.2.7 重组质粒针对CK/GX/SD098/17(H7N9)的免疫效力评估结果 |
| 4.2.8 重组质粒针对CK/CQ/SD057/17(H7N9)的免疫效力评估结果 |
| 4.2.9 重组质粒针对CK/GZ/4/13(H5N1)的免疫效力评估 |
| 4.3 讨论 第五章 全文结论 参考文献 致谢 作者简历 |
四、免疫禽流感疫苗HI抗体的试验研究（论文参考文献）
- [1]重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（H5N1 Re-11株+Re-12株，H7N9 H7-Re3株）研究[D]. 刘艳晶. 中国农业科学院, 2021
- [2]H5+H7亚型禽流感病毒样颗粒疫苗的构建及免疫效果评估[D]. 李军. 扬州大学, 2021(02)
- [3]禽流感（H5+H7）重组杆状病毒载体三价灭活疫苗对家禽免疫效果研究[D]. 潘舒心. 中国农业科学院, 2021
- [4]重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗研究及应用[D]. 陈晓涵. 中国农业科学院, 2020
- [5]表达H7N9亚型禽流感病毒血凝素基因的重组新城疫病毒载体疫苗的构建及血凝素抗原表位鉴定[D]. 石磊. 扬州大学, 2020
- [6]重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗研究及应用[D]. 吴姣姣. 中国农业科学院, 2019(09)
- [7]H5、H7疫苗对珍禽的免疫效果评估[D]. 翟旺. 湖南农业大学, 2019(08)
- [8]近4年湖南地区H9N2病毒遗传进化分析与灭活疫苗的初步研究[D]. 张爽. 北京工业大学, 2019(06)
- [9]H7N9亚型禽流感病毒检测方法的建立及标记疫苗的研制[D]. 孙志豪. 扬州大学, 2018(05)
- [10]二价禽流感DNA疫苗的构建及免疫效力评估[D]. 潘俊慧. 中国农业科学院, 2018(12)