一、激素对阿霉素肾硬化大鼠硬化进展的研究（论文文献综述）
吴其晶[1]（2021）在《基于“阿霉素肾病”模型探讨清利活血中药治疗慢性肾脏病的作用及机制研究》文中进行了进一步梳理背景/目的随着高血压、糖尿病等代谢性疾病发病人数的增多以及社会人口老龄化的加重,慢性肾脏病（Chronic kidney disease,CKD）的发病人数逐年增多,严重威胁着人们的生命健康,因此,如何科学有效地防治CKD成为临床医师亟需面对的问题。药物治疗是延缓CKD进展的主要手段,尽管随着现代医学的发展,CKD的治疗有了长足的进步,但临床可选择的保护肾脏、延缓CKD进展药物的种类较为局限,且多数造价昂贵,亟需寻找更多廉价高效的CKD治疗药物。中医药在CKD的传统治疗中发挥着重要作用,名老中医经验为我们寻找CKD治疗药物指明了方向。江苏省名中医、知名肾病专家孙伟教授投身临床实践40余载,在治疗CKD方面拥有丰富的临床经验,疗效显着,其用药经验是寻找CKD治疗药物的重要潜在宝库。本项目立足孙伟教授治疗CKD的临证经验,通过计算机数据挖掘方法总结疗效及用药规律,寻找潜在具有肾脏保护作用的中药,通过构建CKD药理学疾病模型对潜在有效药物的作用进行验证,并对作用机制进行探索,运用网络药理数据库对有效活性成分及机制进行进一步分析,以期科学高效地寻找中医药中潜在的CKD治疗药物,明确作用机制,为临床用药提供依据,为新药研发提供新思路。方法按统一标准对中国肾脏病大数据应用创新联盟大数据平台系统中实时记录的孙伟教授门诊CKD诊治病案及数据资料进行收集和整理,运用计算机数据挖掘和统计学方法对治疗前后疗效进行评价,并对用药规律进行分析,筛选出孙伟教授延缓CKD进展最常使用的药物。使用盐酸阿霉素（DOX）体外干预大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）,构建阿霉素肾小管上皮细胞损伤模型。分别使用不同浓度的中药提取物进行干预,观察不同中药对DOX引起的细胞损伤的影响。使用MTT法检测细胞活性。通过比色TUNEL染色和蛋白印迹法中cleaved Caspase-3蛋白表达的变化观察细胞凋亡情况。采用活性氧（ROS）/超氧化物（O2-）荧光探针评价细胞内氧化应激损伤情况。使用Western Blot法检测MAPK及其磷酸化蛋白的表达情况,观察中药对阿霉素诱导的MAPK信号通路的影响。另外,给予雄性Balb/c小鼠一次性尾静脉注射DOX（10mg/kg）,构建体内阿霉素肾损伤模型。分别使用相应不同浓度中药提取物灌胃治疗两周后,收集尿液、血清和组织标本。对肾脏组织进行H&E、Masson、PAS等染色,观察肾脏组织病理改变。使用试剂盒检测蛋白尿、血清白蛋白、血清肌酐（Scr）、血清尿素氮（BUN）和肾脏组织超氧化物歧化酶（SOD）的活性以及丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）含量的变化,观察中药在体内对阿霉素引起的肾损伤和氧化应激损伤的影响。利用TCMSP数据库及文献挖掘等方法获取有效中药的单体活性成分,构建“中药-活性成分”的网络图谱,寻找不同药物间的交叉活性成分,运用阿霉素肾损伤模型对中药单体疗效及机制进行探索,具体方法同前。结果运用数据挖掘及统计学方法对导师治疗CKD的病案资料进行分析,结果显示孙伟教授运用中医药治疗CKD延缓甚至逆转疾病进展的总体有效率为66.52%,中医整体症候改善有效率为79.96%,且肾小球滤过率、血肌酐、尿素氮、蛋白尿、尿隐血等均得到良好的控制。在遣方用药方面,随着CKD病程的进展,清利活血中药的使用比例逐渐升高,最常使用的清利活血中药包括石韦、虎杖、郁金、川芎、当归、土茯苓、穿山龙、白花蛇舌草、茵陈、鸡血藤、积雪草、六月雪、玉米须、泽兰、鬼箭羽等。阿霉素体外引起肾小管上皮细胞损伤,体内引起肾小球硬化、肾小管萎缩坏死以及肾间质纤维化。同时,清利活血中药泽兰、积雪草和鬼箭羽在体内与体外均能显着减轻阿霉素引起的肾损害,体外抑制阿霉素引起的ROS及超氧化物的过度生成及细胞凋亡,作用与抗氧化剂NAC的作用相似,且抑制阿霉素引起的MAPK信号通路的激活,体内显着减轻阿霉素引起的蛋白尿及低蛋白血症,减轻阿霉素诱导的组织病理损伤,抑制阿霉素引起的SOD活性下降、GSH含量降低以及MDA水平增加。清利活血中药重要的活性成分Apigenin在体内与体外均能够显着减轻阿霉素引起的肾小球、肾小管及间质的损伤,减轻阿霉素诱导的ROS过度生成,改善体内SOD活性,恢复GSH水平,抑制MDA的生成,抑制MAPK信号通路的激活,同时还能够抑制肾脏NLRP3,IL6,IL1β等炎症相关基因的表达。结论①孙伟教授运用清利活血中药治疗CKD疗效显着;②氧化应激损伤、细胞凋亡和MAPK信号通路的激活在阿霉素肾损伤进程中发挥着重要作用;③清利活血中药泽兰、积雪草和鬼箭羽能够通过抑制氧化应激和MAPK信号通路减轻阿霉素引起的肾损伤;④清利活血中药重要活性成分Apigenin能够通过抗氧化、抗凋亡、抑制MAPK通路以及抗炎作用减轻阿霉素引起的肾损伤。
朱艳姬[2]（2020）在《P2X7受体及其拮抗剂在儿童原发性肾病综合征中作用机制的研究》文中研究指明背景与目的:原发性肾病综合征（Primary nephrotic syndrome,PNS）是儿童时期常见的肾小球疾病,多数肾病患儿肾组织病理类型为微小病变型对激素治疗敏感,但部分肾病患儿对激素抵抗或依赖,使得病情反复引起肾小球硬化,最终发展为终末期肾脏疾病（End stage renal disease,ESRD）。临床上原发性肾病综合征的一个重要的病理生理改变—高脂血症主要是以血浆总胆固醇和低密度脂蛋白升高为突出表现。高脂血症出现后可引起ox-LDL在肾脏中沉积,从而发生肾脏固有细胞损伤和增殖、细胞外基质积聚,同时导致炎症细胞浸润增加、泡沫细胞形成,最终引起肾小球硬化。目前研究发现阿霉素诱导的肾病综合征模型产生的基本原理与人类肾病综合征的病理类型相似,早期病理表现为微小病变型,而晚期病理表现为FSGS,是研究肾病综合征的经典动物模型。足细胞是一种分化成熟的细胞,定位于肾小球基底膜外侧,其在维持肾小球滤过屏障结构和功能中发挥重要的作用。因此,肾小球足细胞成为慢性肾脏疾病干预的重要靶点。研究已证实足细胞损伤与微小病变型肾病（MCN）、局灶节段性肾小球硬化（FSGS）等肾脏疾病有关。足细胞功能障碍可导致肾性蛋白尿,甚至肾小球硬化的发生。脂质在肾小球足细胞中沉积也是肾小球硬化的重要危险因素,特别是ox-LDL在动脉粥样硬化发生和各种肾小球疾病的发展中发挥重要的作用。本课题组前期研究发现原发性肾病综合征儿童血清ox-LDL水平升高,且与血清CXCL16水平正相关;动物模型实验研究显示阿霉素肾病小鼠肾小球ox-LDL和CXCL16表达均增加;体外细胞实验证实了 CXCL16可作为清道夫受体摄取ox-LDL,促进小鼠足细胞内脂质蓄积,进而引起足细胞损伤。然而,目前ox-LDL对足细胞损伤机制尚不完全清楚。P2X7受体（P2X7R）属于P2X受体家族成员,是一个由ATP门控的三聚体离子通道。与其他家族成员相比,其结构上有其特异性,因此备受关注。研究发现P2X7R参与糖尿病肾病、多囊肾、高血压肾病及急性肾损伤等多种肾脏疾病的发生发展,并且证实在多种肾脏疾病模型中预防性使用P2X7R拮抗剂具有肾脏保护作用,因此P2X7R已成为一个具有吸引力的肾脏疾病的治疗靶点。在正常肾脏中P2X7R表达水平很低,但在高血压、1型糖尿病和急性肾小球肾炎等存在细胞损伤和炎症的模型中P2X7R表达增加。研究发现肾小球表达P2X7R增加可能反映早期肾小球炎症损伤。P2X7R可能在早期肾小球损伤和蛋白尿形成中发挥重要的作用。而足细胞凋亡也是肾小球早损的表型,并且在蛋白尿形成过程中也发挥重要的作用。既往研究显示ATP激活P2X7R可引起多种细胞凋亡,其中包括巨噬细胞、淋巴细胞、树突状细胞和系膜细胞。Sha W.等通过体外实验发现P2X7R可能参与足细胞凋亡。另一项研究发现P2X7R在体内调节脂质储存和代谢上发挥关键的作用。在动脉粥样硬化的研究中发现ox-LDL是上调P2X7R最可能的介质。我们通过应用基因表达综合数据库（Gene expression omnibus,GEO）中 2 个独立研究（GSE108113 和 GSE108109）分析显示在局灶节段硬化型肾病综合征中P2X7R基因表达与CXCL16基因表达正相关。然而,P2X7R是否参与儿童原发性肾病综合征的发生,其具体机制如何,国内外少见相关报道。为此,本研究观察P2X7R、ox-LDL及CXCL16在原发性肾病综合征儿童肾组织中的表达;构建阿霉素肾病幼年小鼠模型,观察肾组织P2X7R、ox-LDL、CXCL16、Bax、caspase-3、NLRP3、IL-1 β、IL-18 以及细胞凋亡的变化,同时观察小鼠体重、生化指标及尿蛋白的变化;构建ox-LDL诱导的人足细胞损伤模型,观察足细胞P2X7R、Bax、caspase-3及CXCL16的表达,同时观察足细胞凋亡、ROS产生及足细胞摄取ox-LDL的情况。体内外应用P2X7R拮抗剂后观察抑制P2X7R对肾病小鼠模型和足细胞损伤模型上述指标的变化。通过上述实验探讨P2X7R在原发性肾病综合征中的作用机制和P2X7R拮抗剂对原发性肾病综合征保护作用的机制,为P2X7R是否可作为发病初期原发性肾病综合征的诊疗靶点提供新的理论依据。对象与方法:1.临床选取15例既往行肾活检的原发性肾病综合征患儿作为研究对象,男:女=2:1,年龄3～12岁,其中9例肾活检病理组织类型为微小病变型（MCD）,6例为局灶节段硬化型（FSGS）;对照组4例肾母细胞瘤患儿癌旁正常肾组织,男:女=1:1,年龄3～10岁。2.建立阿霉素肾病模型小鼠:5周龄健康雄性Balb/c小鼠30只,平均体重（17.96±0.67）g,随机分成6组,即正常对照组（NC组,n=5）、阿霉素肾病组（ADR组,n=5）、阿霉素+A438079（100μmol/kg）组（ADR+A100组,n=5）、阿霉素+A438079（200μmol/kg）组（ADR+A200 组,n=5）、阿霉素+A438079（300μmol/kg）组（ADR+A300 组,n=5）、A438079（300μmol/kg）组（A300组,n=5）。阿霉素肾病小鼠模型采用一次性通过尾静脉注射阿霉素10.5mg/kg,1周后小鼠表现出大量蛋白尿者,即24h尿蛋白定量≥50mg/kg,视为阿霉素肾病小鼠。A438079处理方法:建模前6h分别给予腹腔注射 A438079（lOOμmol/kg,200μmol/kg,300μmol/kg）,建模后每天腹腔注射 A438079（100μmol/kg,200μmol/kg,300μmol/kg）,持续 1 周。3.体外培养条件永生化的人足细胞（HPC）,在37℃无干扰素-γ的1640完全培养基孵育2周至其分化成熟后,分别给予ox-LDL（80μg/ml）、P2X7R拮抗剂A438079（10μM）、ox-LDL和A438079孵育人足细胞。其中,A438079组和ox-LDL+A438079组人足细胞提前用拮抗剂A438079预处理15min。各组在5%C02的37℃孵育箱中培养48h后进行处理。4.临床儿童肾组织指标的检测:①苏木素-伊红（Hematoxin Eosin,HE）染色,光镜下观察肾小球病理改变;②透射电镜观察足细胞、基底膜及系膜区超微结构改变;③免疫组织化学SABC法检测肾组织P2X7R、ox-LDL、CXCL16的表达情况。5.阿霉素肾病小鼠模型指标检测:①小鼠体重;②应用全自动生化分析仪测定血清白蛋白（ALB）、血清总胆固醇（TC）和24h尿蛋白定量;③利用双抗体夹心ELISA测定肾组织IL-1β、IL-18;④免疫组织化学SABC法检测肾组织 P2X7R、ox-LDL、CXCL16、Bax、caspase-3、NLRP3;⑤应用 TUNEL 法评估肾组织细胞凋亡情况。6.体外细胞实验指标检测:①利用高内涵共聚焦成像观察足细胞摄取ox-LDL的情况;②应用流式细胞仪检测足细胞凋亡及ROS;③Western blot和/或免疫荧光检测足细胞P2X7R、Bax、caspase-3、CXCL16的表达。结果:1.临床肾组织检测结果（1）各组肾组织形态学改变:光镜下微小病变型肾小球基本正常,而局灶节段硬化型显示肾小球局灶、节段硬化,系膜基质增多并伴毛细血管闭塞、硬化、玻璃样变、可见泡沫细胞、节段性瘢痕形成、球囊粘连;电镜下微小病变型足突融合、消失,无明显系膜细胞增生、基质增宽和免疫球蛋白沉积,而局灶节段硬化型足突广泛融合,系膜基质增多,系膜区及系膜旁区可见细颗粒状电子致密物的沉积,节段硬化处GBM扭曲、增厚,毛细血管袢塌陷。（2）各组肾组织P2X7R、ox-LDL、CXCL16蛋白表达的变化:与正常对照组肾组织相比,肾病综合征患儿肾组织P2X7R、ox-LDL、CXCL16表达明显增加（P<0.01）,而且与MCD患儿相比,FSGS患儿肾组织P2X7R、ox-LDL、CXCL16 表达更明显（P<0.01）。2.阿霉素肾病小鼠模型指标检测结果（1）各组小鼠体重的变化:与正常对照组相比,阿霉素肾病组小鼠体重随时间逐渐下降（3天:P<0.05;5天、7天:P<0.01）;与阿霉素肾病组比较,阿霉素+A438079（200μmol/kg,300μmol/kg）治疗组体重下降明显减轻（P<0.05 和 P<0.01）,而阿霉素+A438079（100μmol/kg）治疗组无差异（P>0.05）。A438079（300μmol/kg）组与正常对照组无差异（P>0.05）。（2）各组血清及尿液生化指标的变化:与正常对照组相比,阿霉素肾病组小鼠注射阿霉素1周后呈现大量蛋白尿（P<0.01）,血清ALB降低（P<0.01）,血清TC升高（P<0.01）;与阿霉素肾病组比较,阿霉素+A438079（200μmol/kg,300μmol/kg）治疗组24h尿蛋白、TC改变明显减轻（P<0.01）,而阿霉素+A438079（100μmol/kg）治疗组无差异（P>0.05）,而血清ALB仅阿霉素+A438079（300μmol/kg）治疗组改变减轻（P<0.05）。A438079（300μmol/kg）组与正常对照组无差异（P>0.05）。（3）各组肾组织IL-1β、IL-18的变化:与正常对照组相比,阿霉素肾病组小鼠肾组织IL-1β、IL-18水平明显增高（P<0.01）;与阿霉素肾病组相比,阿霉素+A438079（100μmol/kg,200μamol/kg,300μmol/kg）治疗组肾组织 IL-1β改变皆较轻（P<0.05或P<0.01）,而肾组织IL-18仅阿霉素+A438079（300μmol/kg）治疗组改变减轻明显（P<0.01）。A438079（300μmol/kg）组与正常对照组无差异（P>0.05）。（4）各组肾组织 P2X7R、ox-LDL、CXCL16、Bax、caspase-3、NLRP3 蛋白表达的变化:与正常对照组相比,阿霉素肾病组小鼠肾组织P2X7R、ox-LDL、CXCL16、Bax、caspase-3 和 NLRP3 表达明显增加（P<0.01）;与阿霉素肾病组相比,阿霉素+A438079（200μmol/kg,300μmol/kg）治疗组各指标表达均降低（P<0.05或P<0.01）,阿霉素+A438079（100μmol/kg）治疗组无差异（P>0.05）。A438079（300μmol/kg）组与正常对照组无差异（P>0.05）。（5）各组肾组织细胞凋亡的变化:与正常对照组相比,阿霉素肾病组小鼠肾小球中细胞凋亡增加（P<0.01）;与阿霉素肾病组相比,阿霉素+A438079（100μmol/kg,200μmol/kg,300μmol/kg）治疗组肾小球中细胞凋亡均减少（P<0.01）。A438079（300μmol/kg）组与正常对照组无差异（P>0.05）。3.体外细胞实验指标检测结果（1）各组足细胞摄取ox-LDL的变化:与正常对照组相比,ox-LDL组足细胞摄取 Dil-oxLDL 增多（P<0.05）,而与 ox-LDL 组相比,ox-LDL+A438079 组足细胞摄取Dil-oxLDL减少（P<0.05）。A438079组与正常对照组无差异（P>0.05）。（2）各组足细胞凋亡与ROS产生的变化:与正常对照组相比,ox-LDL组足细胞凋亡及ROS产生增加（P<0.05）;而与ox-LDL组相比,ox-LDL+A438079组足细胞凋亡及ROS产生减少（P<0.05）。A438079组与正常对照组无差异（P>0.05）。（3）各组足细胞P2X7R、Bax、caspase-3及CXCL16蛋白表达的变化:与正常对照组相比,ox-LDL组足细胞P2X7R、Bax、caspase-3及CXCL16蛋白表达增加（P<0.05）,而与 ox-LDL 组相比,ox-LDL+A438079 组 P2X7R、Bax、caspase-3及CXCL16蛋白表达减少（P<0.05）。A438079组与正常对照组无差异（P>0.05）。结论:1.P2X7R、ox-LDL及CXCL16在原发性肾病综合征儿童和阿霉素肾病小鼠肾组织中表达增加,且肾病小鼠中P2X7R拮抗剂可减少CXCL16和ox-LDL表达,提示P2X7R、ox-LDL及CXCL16可能与儿童原发性肾病和小鼠阿霉素肾病有关,抑制P2X7R可能通过下调CXCL16通路减少ox-LDL表达减轻阿霉素肾病小鼠肾损伤。2.激活的P2X7R可能通过下游P2X7R/NLRP3通路促进炎症细胞因子IL-1β、IL-18释放和上调凋亡蛋白Bax、caspase-3表达促进细胞凋亡,参与阿霉素肾病过程;抑制P2X7R可能通过下调P2X7R/NLRP3通路减少IL-1β、IL-18释放和下调凋亡蛋白Bax、caspase-3表达减少细胞凋亡,进而减轻阿霉素肾病小鼠肾损伤。3.ox-LDL激活P2X7R可能引起CXCL16表达增加,促进足细胞摄取ox-LDL,进而引起足细胞损伤;抑制P2X7R后可能通过下调CXCL16表达,减少足细胞摄取ox-LDL,改善ox-LDL诱导的足细胞损伤。4.ox-LDL激活P2X7R可能促进凋亡蛋白Bax和caspase-3的表达,促进ROS的产生,进而引起足细胞凋亡;抑制P2X7R后可能通过下调凋亡蛋白Bax和caspase-3表达,减少ROS产生改善ox-LDL诱导的足细胞凋亡。创新和意义:1.首次在儿童原发性肾病综合征观察P2X7R在肾组织中的表达,通过建立阿霉素肾病小鼠模型观察P2X7R在阿霉素肾病小鼠肾组织中的表达及作用机制,为早期干预治疗原发性肾病综合征提供了新的理论依据。2.首次应用ox-LDL诱导的人足细胞模型观察P2X7R的表达及作用机制,证实ox-LDL诱导的人足细胞损伤可能与P2X7R促进CXCL16表达,摄取ox-LDL增加和促进凋亡蛋白、ROS表达有关,进一步验证了 P2X7R对足细胞损伤的作用机制。3.首次体内外应用P2X7R拮抗剂A438079观察抑制P2X7R对阿霉素肾病小鼠肾损伤和ox-LDL诱导的人足细胞损伤的影响,证实抑制P2X7R可能通过下调P2X7R/NLRP3通路、CXCL16通路、减少凋亡蛋白表达及ROS产生来发挥拮抗剂对阿霉素肾病小鼠肾损伤和ox-LDL诱导的人足细胞损伤的保护作用,这为P2X7R拮抗剂治疗原发性肾病综合征提供了理论依据。
杨涛[3]（2020）在《阿霉素联合羟基脲诱导大鼠CKD肾阳虚证模型的建立与评价及真武汤干预机制研究》文中研究表明慢性肾脏病（chronic kidney disease,CKD）的发病率在我国及世界范围内逐年递增,给众多患者增加经济、精神负担的同时也给公共卫生事业带来了巨大问题。CKD是指肾脏结构或功能异常>3个月的疾病,其诊断标准包括:（1）白蛋白尿[AER≥30 mg/24 h;ACR≥30mg/g（或≥3mg/mmol）];（2）尿沉渣异常;（3）肾小管相关病变;（4）组织学异常;（5）影像学所见结构异常;（6）肾移植病史,肾小球滤过率（GFR）下降[eGFR<60 mL/（min·1.73m2）],任何一项指标异常持续时间超过3个月即可确诊。2012年我国有关于CKD流行病学调查结果显示:成年人CKD患病率为10.8%,并预估已有成年慢性肾脏病患者1.2亿,而其知晓率仅为12.5%。肾阳虚证候要素包括温煦失职、腰府失养、髓海空虚、生殖减退、水液泛滥、阳虚水泛、冲气上逆、冲任不调等多种特征。中医认为慢性肾脏病可归于（水肿、关格、腰痛）等病证范畴,且在临床诊疗中对本病虚证所采用的治法方药与肾阳虚证关系密切。慢性肾脏病病位主要在肾,病变发展与肾阳虚证密切相关,本虚标实为其基本病机,虚、瘀、浊、毒贯穿于疾病始终,相互影响、相互发展。以此为基础,现代中医药工作者针对二者的内在联系进行了较多的临床研究,如慢性肾脏病病理改变与中医辩证分期的对应关系、中医证候在慢性肾脏病中分布规律等方面。由此,以临床中医证候规范化要素为基础,构建慢性肾脏病肾阳虚证大鼠模型是基础实验研究最适合的介质,并对相关模型筛选评价具有重要意义。本次研究以SD雄性大鼠为实验对象,采用尾静脉注射盐酸阿霉素,联合羟基脲药物因素诱导大鼠成模,并以真武汤干预药物反证,且对其宏观行为学、生物指标等进行检测,进而对本类模型作出较为客观的评价以及真武汤对本类模型的可能干预机制进行一定的研究阐释。目的:1.探索应用盐酸阿霉素联合羟基脲诱导建立慢性肾脏病肾阳虚证动物模型的具体方法,为慢性肾脏病肾阳虚证的实验和药学研究提供较为标准的中医病证结合动物模型。2.探索总结与中医理论相合的慢性肾脏病肾阳虚证大鼠模型评价体系,包括症状体征、客观指标确立、药物反证等,并将真武汤对本类模型可能干预机制进行阐释,为慢性肾脏病肾阳虚证辨证标准系统化研究奠定一定生物学基础。方法:1.慢性肾脏病“肾阳虚”证大鼠模型的建立采用盐酸阿霉素尾静脉注射建立CKD大鼠模型,并复合羟基脲灌胃构建CKD肾阳虚证大鼠模型。使用SPF级6～8周龄SD雄性大鼠64只,喂食普通饲料。其中选取48只大鼠隔周分两次进行尾静脉注射阿霉素（3mg/kg、4mg/kg）,并检测大鼠24h尿蛋白≥50mg,即为诱导慢性肾脏病动物模型成功。以尿蛋白和体重为依据将造模成功的SD雄性大鼠,使用分层随机方法分为正常组、阿霉素组、阿霉素羟基脲组、真武汤组分别灌胃给药。记录实验大鼠体征状态,体质量称重,收集大鼠24小时尿液,检测24h尿蛋白含量。各组大鼠于第26周股动脉取血,分离血清后测定各项指标。将大鼠肾脏、脾脏、睾丸称重,计算肾重/体重比、脾脏、睾丸指数。2.肾脏石蜡包埋、切片,使用HE、Masson染色,分析大鼠肾脏病理学变化;3.比色法:检测大鼠血清 AST、ALT、UA、UREA、TP、ALB、TC、TG 和 SOD 含量。4.酶联免疫法:检测大鼠血清T3、T4、TSH、FSH、LH、T、E2含量。5.实验数据使用SPSS 23.0进行统计分析。结果:1.CKD大鼠模型的建立与评价经阿霉素诱导后,实验第4周,SD大鼠逐渐出现双下肢水肿,毛色暗淡、光泽度降低;模型组大鼠24h尿蛋白于实验第5周起高于正常组大鼠（P<0.05）;模型组大鼠于实验第7、9、11周24h尿蛋白定量显着高于正常组（P<0.011）,且≥50mg确认为模型成功。2.CKD肾阳虚证大鼠模型的建立与评价2.1一般情况实验第12周左右,大鼠出现阳虚类症状,如脱毛、弓背、懒动、蜷缩,部分大鼠体型较为瘦弱、行动迟缓。2.2 24h尿蛋白定量实验第12周,CKD肾阳虚证大鼠24h尿蛋白量统计结果显示:阿霉素组、阿霉素羟基脲组尿蛋白显着高于正常组（P<0.01）;阿霉素羟基脲组显着高于真武汤组（P<0.01）。实验第16、20、24周,CKD肾阳虚证大鼠24h尿蛋白定量统计结果均显示各组趋势与12周时相似。2.3体质量变化复合因素作用于大鼠后,体重呈现一定变化趋势。实验第12周,阿霉素组、阿霉素羟基脲组体重显着低于正常组（P<0.01）;阿霉素羟基脲组体重低于真武汤组（P<0.05）。实验第15周,阿霉素组及阿霉素羟基脲组体重显着低于正常组（P<0.01）;实验第18、21、23、26周,较前实验节点相似,阿霉素组、阿霉素羟基脲组及真武汤组体重显着低于正常组（P<0.01）。2.4游泳实验实验第16周,正常组大鼠平均游泳时间最长,与正常组相比,阿霉素组、阿霉素羟基脲组有显着差异（P<0.01）;实验第20、24周各组大鼠游泳时间趋势与第16周相似。2.5红外测温红外测温是通过红外感应动物体表红外线辐射后,反应为一定的数字温度。红外热成像通过红外采集镜头将动物体表辐射红外线接收后,以不同色阶标识从低温到高温不同温度,进而把动物表面不可见的热场信息与分布以人眼可见的图像显示,通过观察和分析所采集对象的色阶分布所代表的红外辐射轨迹进行定性评价,近年来有较多研究应用这两项技术对动物模型的阳虚程度作出评判。经测温后,CKD肾阳虚证大鼠左前爪温度统计结果显示:与真武汤组比较,阿霉素羟基脲组统计学差异不明显,但在平均数值水平具有一定趋势。CKD肾阳虚证大鼠尾根部温度统计结果显示:与正常组相比,阿霉素组及阿霉素羟基脲组温度有显着差异（P<0.01）。选取大鼠鼻尖、上下肢、尾根部及左右肾脏投影区作为红外热成像检测位点,鼻尖部位中,阿霉素羟基脲组与阿霉素组相比,有显着差异（P<0.01）;左上肢中,阿霉素羟基脲组与正常组相比,有显着差异（P<0.01）;左下肢、右上肢、右下肢各组比较没有统计学意义;尾根部及左右肾投影区,各组比较没有统计学意义。2.6 CKD肾阳虚证大鼠肾脏病理变化大鼠肾脏组织HE、Masson染色结果显示阿霉素组、阿霉素羟基脲组大鼠相较于正常组而言肾小球系膜区变宽,系膜细胞呈现不同程度增生,病变累及的肾小球处部分肾小管上皮细胞发生空泡样变,肾间质有大量炎性细胞浸润。真武汤组肾小球系膜细胞轻度增生,肾间质有少量炎性细胞浸润。3.真武汤对CKD肾阳虚证大鼠模型干预机制研究3.1肾重体重比及脏器指数实验第26周取材后,阿霉素组大鼠肾重体重比平均值水平高于正常组;阿霉素羟基脲组大鼠肾重体重比高于正常组（P<0.05）。各组脾脏指数比较未有统计学差异;阿霉素羟基脲组、真武汤组大鼠睾丸外观相较于正常组及阿霉素组明显缩小,且和正常组、阿霉素组相比,大鼠睾丸指数显着降低（P<0.01）。3.2血清学指标1)肝功能AST:阿霉素组、阿霉素羟基脲组与正常组相比,统计学差异不显着,但各组间平均值水平有一定趋势;ALT:与正常组、真武汤组相比,阿霉素组有显着差异（P<0.01）。2)肾功能Scr:各组间比较没有统计学差异;UA:真武汤组与正常组相比,有统计学差异（P<0.05）;BUN:真武汤组显着低于阿霉素组（P<0.01）。3)血脂及白蛋白TC:各组间无统计学差异,但阿霉素组、阿霉素羟基脲组、真武汤组均值水平高于正常组,其中真武汤组水平低于阿霉素羟基脲组。TG:阿霉素组高于正常组（P<0.05）,阿霉素羟基脲组、真武汤组均值水平高于正常组。TP、ALB:阿霉素组、阿霉素羟基脲组、真武汤组均值均低于正常组,其中真武汤组与正常组有统计学差异（P<0.05）。4)甲状腺激素T3:阿霉素羟基脲组、真武汤组显着低于正常组（P<0.01）,阿霉素羟基脲组、真武汤组显着低于阿霉素组（P<0 01）;T4:阿霉素组、阿霉素羟基脲组、真武汤组较正常组显着降低（P<0.01）;真武汤组较阿霉素羟基脲组水平显着升高（P<0.01）;TSH:阿霉素组、阿霉素羟基脲组、真武汤组较正常组显着升高（P<0.01）;真武汤组相较阿霉素羟基脲组显着升高（P<0.01）。5)性腺激素T:各组均值水平具有趋势性,阿霉素羟基脲组、真武汤组低于正常组,真武汤组均值高于阿霉素羟基脲组;E2:阿霉素组水平较正常组显着降低（P<0.01）;阿霉素羟基脲组水平低于正常组（P<0.05）;阿霉素羟基脲组高于阿霉素组（P<0.05）;真武汤组水平相较于阿霉素组显着升高（P<0.01）;FSH:阿霉素组、阿霉素羟基脲组、真武汤组水平较正常组显着降低（P<0.01）;真武汤组高于阿霉素羟基脲组（P<0.05）;LH:阿霉素组、阿霉素羟基脲组、真武汤组水平较正常组相比显着降低（P<0.01）;真武汤组相较于阿霉素组显着升高（P<0.01）。6)超氧化物歧化酶与正常组相比,阿霉素组、阿霉素羟基脲组、真武汤组有显着差异（P<0.01）;真武汤组相较于阿霉素组显着升高（P<0.01）;真武汤组显着高于阿霉素羟基脲组（P<0.01）。7)cAmp、cGmpcAmp:阿霉素羟基脲组水平较于正常组显着升高（P<0.01）;真武汤组相较于正常组升高（P<0.05）,其余组间无差异;cGmp:阿霉素羟基脲组相较于正常组升高（P<0.05）;真武汤组相较于阿霉素组升高（P<0.05）,其余组间无差异;cAmp/cGmp:各组间比较无统计学差异。结论:1.通过分次尾静脉注射盐酸阿霉素（3mg/kg、4mg/kg）复合羟基脲（375mg/kg）剂量可以成功诱导大鼠CKD肾阳虚证模型;2.通过模型一般情况、耐力变化、代谢能力各项评价性实验检测CKD肾阳虚证大鼠模型的稳定性,阿霉素羟基脲组大鼠表现与临床辨证中的主要症状较为符合,对本次实验诱导模型是否确立具有佐证作用;3.成模后的阿霉素羟基脲组大鼠甲状腺、性腺等器官功能处于抑制状态,而真武汤作为药物反证组和干预因素,结果表明真武汤组表现优于模型组。说明真武汤对于阿霉素联合羟基脲诱导CKD肾阳虚证大鼠模型具有治疗作用,也佐证了本次建立模型的科学可行性。
郑佳颖[4]（2020）在《活肾降浊方对阿霉素肾病大鼠NF-κB、PGSK-3β表达的影响》文中提出目的:通过观察活肾降浊方对阿霉素肾病大鼠尿蛋白排泄率、生化指标、致纤维化因子表达及肾组织病理损伤状态的影响,为活肾降浊方延缓阿霉素肾病大鼠肾纤维化提供理论依据,并探讨活肾降浊方治疗CKD的疗效机制,为活肾降浊方的临床用药方向提供思考。方法:采取对Wistar雄性大鼠尾静脉进行单次注射阿霉素的方法,建立阿霉素肾病病理模型。分为活肾降浊方组（治疗组）、肾炎康复片组（对照组）、模型组、空白组四组。观察大鼠的一般状态、尿微量白蛋白/尿肌酐、24小时尿蛋白定量、血清肌酐、尿素氮动态变化;肾脏切片马苏染色,观察阿霉素肾病大鼠肾组织的病理改变情况;光镜下观察肾脏的病理组织结构;免疫组化观察肾组织p-JAK2、p-STAT3、NF-κB、PGSK-3β的表达情况。结果:1.治疗后与模型组相比,治疗组、对照组大鼠血肌酐、尿素氮、尿微量白蛋白/尿肌酐、24小时尿蛋白定量均低于模型组,差异有统计学意义（P<0.05）;2.免疫组化分析:治疗后与模型组相比,治疗组、对照组p-JAK2、p-STAT3、NF-κB、PGSK-3β在肾小球系膜细胞和肾小管上皮细胞及肾间质的表达减少,差异有统计学意义（P<0.05）;3.肾组织病理形态学观察:光镜下可见:空白组肾小球、肾小管及间质未见明显病理改变,排列分布正常,仅见少量肾小管基膜处呈线状分布的蓝染胶原组织;模型组成纤维细胞数量明显增多,胶原纤维增多,纤维束增粗且排列紊乱,纤维间隙变窄或消失。随着实验时间进程,间质中蓝染的胶原纤维逐渐增多,提示纤维化进行性加重;治疗组及对照组部分小管纤维化,局灶性间质纤维化,肾间质胶原纤维增加。结论:1.活肾降浊方可以降低阿霉素肾病大鼠24小时尿蛋白定量、尿微量白蛋白/尿肌酐比值,减少尿蛋白的排泄;2.活肾降浊方能够下调阿霉素肾病大鼠肾组织中p-JAK2、p-STAT3、NF-κB、PGSK-3β的表达;3.活肾降浊方能改善阿霉素肾病大鼠肾组织纤维化病理发展。
潘雅婧[5]（2020）在《肾康注射液调节UUO小鼠肾纤维化及HUVEC血管生成的机制研究》文中研究说明目的:以VEGF为切入点,在动物和细胞实验探讨肾康注射液对UUO小鼠肾纤维化和HUVEC血管生成的调控作用及作用机制。方法:1.动物实验:将雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组（sham）、单侧输尿管梗阻组（UUO）、氯沙坦钾组（ARB）及高、中、低剂量肾康组（SKI-H、SKI-M、SKI-L）。除sham组外的各组行UUO手术;次日ARB组予氯沙坦钾（13 mg/kg·d）灌胃;SK]-H、SKI-M、SKI-L 组分别予 7.8 g/kg·d、3.9 g/kg·d、1.95 g/kg·d SKI 尾静脉注射。观察小鼠一般状态、记录体重变化。给药14天后检测血Scr、BUN、CysC水平;micro-CT检测肾脏血管分布;HE染色观察肾组织形态改变;天狼星红染色观察胶原沉积;IHC染色观察VEGF、VEGFR-2表达。2.细胞实验:将HUVEC分为空白组（CON）、SKI高剂量组（SKI-11）、SKI-低剂量组（SKI-L）、VE GF 沉默组（Si）、VEGF 沉默-SKI 高剂量组（Si-SKI-H）、VEGF 沉默-SKI 低剂量组（Si-SKI-L）。SKI-H、SKI-L 组分别予 8 mg/ml、2 mg/ml SKI干预 24 h;Si组通过RNAi转染沉默VEGF基因;Si-SKI-H、Si-SKI-L组在转染同时分别予8 mg/ml、2 mg/ml SKI干预24 h。观察血管生成情况,计算血管生成参数;real-time PCR和western blot法分别检测VEGF通路重要靶点基因和蛋白表达。结果:1.动物实验:给药14天后UUO组体重较sham组减轻（P<0.01）;ARB、SKI-H、SKI-M组体重较UUO组增高（P<0.05）。UUO组Scr、BUN、CysC水平较sham组升高（P<0.05,P<0.01）;ARB、SKI-H 组 Scr、BUN、CysC 水平较 UUO 组降低（P<0.05,P<0.01）。肉眼观察sham组双肾无明显异常改变;UUO组患侧肾脏表面粗糙、膨大、积水,肾盂肾盏扩张,实质变薄;SKI组患肾结构破坏较UUO组减轻。micro-CT见sham组肾血管密集,走向清晰;UUO组患肾血管疏松,分支减少、曲度下降;SKI组患肾血管损伤较UUO组减轻。HE染色见sham组肾脏结构完整,无明显病理损害;UUO组肾小管扩张,上皮细胞肿胀坏死,间质增宽伴炎性浸润;SKI组肾脏损伤较UUO组减轻。天狼星红染色（光镜）见sham组肾脏几乎无红染胶原;UUO组肾间质大量红色胶原聚集;SKI组红染程度较UUO组减轻。偏振光镜荧光信号变化与普通光镜所见大体一致。IHC示UUO组患肾VEGF、VEGFR-2表达较sham组降低（P<0.01）;SKI 组 VEGF、VEGFR-2 表达较 UUO 组降低（P<0.01）。剂量方面,SKI 减轻肾脏纤维化损伤和促进血管生成,以中、高剂量效果更优。2.细胞实验:沉默VEGF 24 h后Si组VEGF基因表达较CON组显着降低（P<0.01）,阴性对照组与CON组VEGF无显着差异（P>0.05）,验证转染稳定可行。血管生成方面,SKI组血管连接较CON组增多、血管网密度增大,血管生成参数提高,SKI促进HUVEC血管生成（P<0.01,P<0.05）。基因表达方面,与CON组相比,SKI-H 组 VEGF、VEGFR-2、eNOS 水平升高（P<0.05,P<0.01）;与 Si 组相比,Si-SKI-H 和 Si-SKI-L 组 VEGF、eNOS 水平升高（P<0.05,P<O.01）,SKI 上调 VEGF 通路靶点基因,且该效应在VEGF沉默时更突出。蛋白表达方面,在正常培养及VEGF沉默状态,SKI 均提高 VEGFR-2、p-VEGFR-2、eNOS、p-eNOS 表达水平（P<0.05,P<0.01）。结论:1.肾康注射液可改善UUO小鼠肾功能,缓解肾纤维化病理改变,减轻纤维化损伤;可缓解肾脏微血管网损伤,上调VEGF、VEGFR-2表达,促进患侧肾脏血管生成。2.肾康注射液可促进HUVEC血管生成;可上调HUVEC的VEGF、VEGFR-2基因表达;可提高VEGFR-2、eNOS总蛋白水平及磷酸化蛋白水平。3.肾康注射液可能通过调节VEGF/VEGFR-2及下游eNOS来改善肾纤维化损伤和促进血管生成。
唐建[6]（2020）在《补肾活血祛风中药复方对阿霉素肾病大鼠的实验研究及基于p38MAPK信号转导通路研究治疗阿霉素肾病大鼠的分子机制》文中提出目的:中药复方是目前临床上治疗肾病综合征的重要方式,其在临床上的功效显着。本课题通过动物实验旨在研究补肾活血祛风中药复方（BSHXQF）对阿霉素肾病大鼠肾脏病理组织结构及p38MAPK信号转导通路的影响;研究BSHXQF中药复方单用和（或）联合糖皮质激素对阿霉素肾病大鼠干预的差异性,进一步探讨BSHXQF中药复方提高肾病综合征治疗效果可能的作用机制,为临床中西医结合治疗肾病综合征提供生物依据。方法:筛选健康雄性Spraque-Dawley（SD）大鼠140只,测定24时尿蛋白定量后（小于10mg）,随机分为空白对照组（A组）20只,造模组120只。造模组采用阿霉素（adriamycin,ADR）尾静脉注射方式（分两次注射）建立肾病综合征大鼠模型,3周后检测24小时尿蛋白定量大于100mg者即为肾病综合征模型复制成功。再将成模大鼠随机分为模型组（B组）、泼尼松组（C组）、中药组（D组）、中药+泼尼松组（E组）,每组各18只。各组大鼠给予相应的干预:空白对照组不干预,模型组予以蒸馏水灌胃,泼尼松组予以醋酸泼尼松片溶液,中药组予以补肾活血祛风方中药复方汤剂,中药+泼尼松组予以补肾活血祛风方中药复方汤剂和醋酸泼尼松片溶液,各组大鼠干预8周。分别在干预4周、8周末时每组随机抽取9只大鼠观察治疗效果,收集尿、血标本检测24h尿蛋白定量、肾功、凝血、血脂和白蛋白等相关指标,取肾脏组织观察病理变化,采用Real-time PCR技术和免疫组织化学法检测肾组织p38MAPK信号通路中的蛋白及m RNA表达量。结果:（1）.大鼠一般情况:A组一般情况良好;B组大鼠皮毛松散,活动下降,尾部出现不同程度的水肿和溃烂,饮食量减少,体重增加缓慢,部分大鼠出现门齿松动和脱落的情况;C、D、E组较模型组大鼠均有不同程度的好转。（2）.各组大鼠24小时尿蛋白定量和生化指标改变:与A组比较,B、C、D、E组大鼠24h尿蛋白量明显升高、血清白蛋白降低、总胆固醇（TC）和甘油三酯（TG）升高（P<0.05）;与B组比较,C、D、E组24h尿蛋白均降低（P<0.05）,C组TC、TG升高,而D组TC、TG明显降低（P<0.05）,C、D、E组白蛋白差异无统计学意义（P>0.05）;各组组间比较发现所有组别大鼠血肌酐和尿素氮无明显差异（P>0.05）。（3）.各组大鼠肾脏病理组织结构改变:A组大鼠肾脏结构正常,各造模组大鼠肾脏病理可见肾小球肿大、肾小管上皮细胞变性肿胀、间质纤维组织增生及肾小球基底膜增厚等改变,且电镜可见足细胞排列紊乱和局部融合,肾小管上皮细胞核染色质聚集,胞浆内线粒体肿胀;与B组比较,各干预组肾脏病理损害不同程度的改善,其中E组大鼠肾脏病理病变最轻。（4）.各组大鼠肾组织p38MAPK表达的改变:与A组比较,B组大鼠肾脏组织p38MAPK蛋白和m RNA的表达明显增加（P<0.05）;与B组比较,各干预组表达有所下降（P<0.05）,C、D、E三组组间比较发现表达无明显差异（P>0.05）。结论:（1）.补肾活血祛风中药复方可改善阿霉素肾病大鼠一般情况,降低24小时尿蛋白定量,减轻或者延缓阿霉素肾病大鼠的肾脏病理损害,且当与糖皮质激素类药物联用时具有增强疗效的作用。（2）.补肾活血祛风中药复方可以下调阿霉素肾病大鼠肾组织p38MAPK的表达,提示BSHXQF中药复方减轻阿霉素肾病大鼠的肾脏病理损害的作用机制可能与干预p38MAPK信号通路有关。（3）.补肾活血祛风中药复方和糖皮质激素均对阿霉素肾病大鼠具有明显疗效,但在调节血脂代谢上BSHXQF中药复方明显优于糖皮质激素。（4）.与单用糖皮质激素治疗阿霉素肾病大鼠相较,BSHXQF中药复方+糖皮质激素对阿霉素肾病大鼠的综合治疗更优,体现了目前中西医结合治疗肾病综合征的优势。
王新斌[7]（2020）在《基于miRNA探讨右归丸对激素抵抗型肾病综合征大鼠的增敏作用及机制研究》文中提出研究背景与目的:激素抵抗型肾病综合征（SRNS）致病因素复杂,临床治疗较为棘手,疗效不尽如人意,随着病情的变化,常易发展为终末期肾病而危及患者的生命。足细胞损伤与慢性肾病发生、发展密切关联,足细胞相关蛋白、基因突变及表达异常是SRNS发生的关键环节。有研究表明,miRNA表达失调与肾病有关,成熟的Dicer酶可以通过一些非编码的微小RNA来介导调节SD分子的应答。故调控Dicer-miRNA通路,使SD分子的表达得以改善,减少蛋白尿。右归丸可通过减毒增敏来减缓SRNS肾病足细胞的损伤,发挥减少尿蛋白和保护肾脏的作用,其分子机制尚未完全阐明。方法:1.64只雄性SPF级Wistar大鼠适应性饲养1周,按体重随机分为空白组（Control,12只）和造模组（52只）。造模成功后随机分为模型组（Model）;泼尼松组（PAT）;泼尼松+右归丸高、中、低组（PAT+YGh、PAT+YGm、PAT+YGl）。一次性尾静脉注射阿霉素6mg/kg（10mg/支,用0.9%氯化钠溶液2ml稀释成浓度为5mg/ml）,同时给予臀部肌肉注射氢化可的松25mg/kg/d（50mg/支,用0.9%氯化钠2ml溶液稀释成浓度为25mg/ml）,2周,复制阿霉素肾病肾阳虚证模型。空白组大鼠左右后肢交替肌注等剂量生理盐水。2.各组大鼠成功造模2周后,固定时间灌胃,持续6周。分别于造模前、造模后14天、药物干预后14、28、42天代谢笼收集各实验大鼠24小时尿液标本,记录尿量。实验第55天晚上8点测定大鼠自主活动,开启自主活动仪测定5min的活动次数与抬头次数。第56天各组实验大鼠心脏采血,全自动生化分析仪检测血生化指标。3.实验第56天,局麻摘取双肾,将大鼠左侧肾脏切除取上下级分别加入4%戊二醛、4%多聚甲醛固定液固定组织,用于电镜、光镜、免疫荧光镜;右肾储存于-70oC冰箱,肾小球cRNA提取,用于基因芯片检测及RT-PCR相互验证。4.HE、PAS、PASM-Masson观察肾组织病理变化;免疫组化、western-blotting、real-time PCR等方法检测肾组织中dicer、nephrin、podocin、CD2AP、synaptopodin、Bax?Bcl-2?caspase-3蛋白及mRNA的表达。结果:1.大鼠一般状态造模后第7d大鼠腹腔中出现少量腹水,同时每日排出尿量减少,精神状态欠佳,食量减少,体重停止增长且下降。2周大鼠腹水明显增多,出现大量尿蛋白,且24h尿蛋白定量>100mg/kg,同时大鼠出现嗜睡、反应迟钝,有弓背耸肩现象,蜷卧少动,体毛发灰发暗,大便稀溏等中医阳虚体征。提示SRNS模型大鼠复制成功。2.血肌酐、血尿素氮、总蛋白、白蛋白、24h尿蛋白、血脂检测结果各干预组均有不同程度的改善,右归丸中剂量组减少尿蛋白量、降低血脂疗效优于各干预组,各治疗组血肌酐、血尿素氮降低有统计学意义（p<0.05）。3.肾小球病理形态改变光镜下空白组肾小球结构形态稳定;模型组肾小球略显肿胀,基底膜不规则增厚,系膜细胞轻度增生,肾小管内出现透明的管型;各治疗组肾小球病理形态的改变介于空白组与模型组之间。电镜下发现足细胞有足突融合、消失的改变,空白组足细胞未发现异常改变;且在电镜下,右归丸中剂量组对减轻足细胞融合,足细胞恢复效果明显。4.miRNA芯片分析结果模型组与空白组相比较,差异表达的miRNA 23个,且高表达miRNA 15个、低表达miRNA 8个;与模型组比较,右归丸干预组中高表达的miRNA9个,低表达miRNA 6个,其中SRNS肾病大鼠模型组织中rno-mir-29b-3P、rno-mir-26b-5P表达上调,rno-mir-205表达下调,经右归丸治疗后,上调的rno-mir-29b-3P、rno-mir-26b-5P得到抑制,而下调的rno-mir-205得到增强。通过real-time PCR对特异基因相互验证结果显示:模型组rno-mir-29b-3P、rno-mir-26b-5P与空白组rno-mir-29b-3P、rno-mir-26b-5P表达量比分别为1.94、2.53倍;rno-mir-205表达量其模型组与空白对照组的比值为0.28,所得结果与基因芯片接近,证实以上所筛选miRNA是SRNS最有代表性的miRNA。5.Dicer酶、SD蛋白分子的检测结果SRNS大鼠肾组织中Dicer酶免疫荧光强度、蛋白与mRNA表达均上调,而nephrin、podocin、CD2AP与synaptopodin结果相反,二者呈负相关。提示dicer酶通过Dicer-miRNA负向调控足细胞裂隙孔膜相关蛋白分子,同时骨架蛋白表达减少及足细胞的凋亡与miRNA有一定的相关性。6.右归丸干预后dicer、nephrin、podocin、CD2AP免疫荧光、蛋白与核酸的表达结果与模型组比较,右归丸组肾组织Dicer酶免疫荧光强度减弱,呈线状分布,核酸与蛋白表达下降,而SD相关分子免疫荧光表达增强,呈颗粒状分布,mRNA与蛋白表达量均升高。7.细胞凋亡相关因子免疫荧光、蛋白与mRNA的表达检测结果与空白组比较,模型组Bax、caspase-3免疫荧光强度均增强,蛋白及mRNA表达均升高（p<0.05）,而Bcl-2表达降低（p<0.05）,各干预组对Bax/Bcl-2、caspase-3表达水平均有改善,但右归丸干预各组Bax、caspase-3蛋白及mRNA表达下调,Bcl-2蛋白和mRNA表达明显上升（p<0.01）。说明右归丸通过骨架蛋白及细胞凋亡因子发挥保护足细胞作用,这一作用与右归丸对类固醇激素的增敏作用有关。结论:1.本实验在复制激素抵抗型肾病综合征动物模型时采用“病证结合”的方式,即单次尾静脉注射阿霉素6mg/kg建立FSGS肾病模型,同时肌注氢化可的松25mg/kg,造成肾阳虚证,成功地模拟典型的SRNS临床病证,效果确切。2.基因芯片对SRNS大鼠肾组织中miRAN筛选显示,SRNS肾病大鼠皮质中23个miRNAs特异性表达,其中15个高表达,8个低表达,Fold Change从0.3到3.4。筛选出SRNS特征性miRNA:rno-mir-29b-3P、rno-mir-26b-5P的表达显着上调,提示这些miRNA可能参与足细胞损伤。rno-mir-205在激素抵抗型肾病综合征模型大鼠中低表达,提示miRNA可能通过抑制足细胞凋亡和增强激素对药物的敏感性而发挥作用。3.SRNS肾病大鼠足细胞裂孔隔膜分子及骨架蛋白的表达是通过Dicer酶介导miRNA负向来调控。足细胞的损伤及足细胞的凋亡还可能通过Dicer-miRNA来参与。提示Dicer-miRNA是防治SD蛋白分子与尿蛋白异常的靶向点。4.右归丸可下调激素抵抗型肾病综合征模型大鼠Dicer表达,同时右归丸对SRNS肾病大鼠足细胞裂孔隔膜分子nephrin、CD2AP、podocin及骨架蛋白synaptopodin表达的影响可能是通过Dicer-miRNA途径来调控。提示Dicer、rno-mir-29b-3P、rno-mir-26b-5P可能是右归丸治疗SRNS肾病,维护保护肾小球滤过屏障,保护足细胞,减少蛋白尿的靶点。5.右归丸可抑制SRNS大鼠肾组织中Bax升高,Bcl-2的下降,修复足细胞Bax/Bcl-2平衡态,降低凋亡标志性蛋白caspase-3活性,改善足突融合,从而维持足细胞数目的稳定,保护足细胞免于凋亡。6.右归丸各剂量组均可改善激素抵抗型肾病综合征蛋白尿、改变低蛋白血症、降低胆固醇和甘油三酯的水平,减轻足细胞足突融合、降低或减少细胞膜外基质积聚、肾小球系膜增生及肾小管上皮细胞变性等发挥减毒增敏作用。然右归丸中剂量组疗效显着。
张菲菲[8]（2019）在《肾病一号方对阿霉素肾病模型小鼠Angptl3及足细胞相关蛋白表达的影响》文中进行了进一步梳理目的:采用尾静脉注射构建阿霉素肾病BALB/c小鼠模型,观察肾病一号方对阿霉素肾病BALB/c小鼠的生化指标、病理形态学和对Angptl3及足细胞相关分子Nephrin、Podocin、CD2AP表达的影响,研究肾病一号方对阿霉素肾病小鼠足细胞的保护作用。方法:1.建模及干预:取8周龄BALB/c小鼠,20-25g,雄性,随机分为5组,每组10只,分别为盐水对照组（C）、模型组（M）、中药干预组（M+Z）、激素干预组（M+S）、中西医结合组（M+Z+S）;其中M组、M+Z组、M+S组、M+Z+S组用阿霉素（10mg/kg）一次性尾静脉注射构建肾病综合征模型,C组注射等剂量生理盐水作为对照,中药肾病一号方煎剂剂量为（26.1g/（kg.d））,激素泼尼松剂量为（18mg/（kg.d））,对相应的组别进行灌胃,从造模后第一天开始,每天1次,连续28天。2.观察并记录小鼠的基本情况;并分别于造模第7天、14天、21天、28天用代谢笼收集24小时尿液,最后于第29天处死小鼠摘眼球取血,收集血清、尿液、肾组织标本。3.检测指标:（1）尿生化指标:尿蛋白/肌酐比值;血清生化指标:血清白蛋白、总胆固醇、甘油三酯、血肌酐、尿素氮;（2）肾脏病理形态:光镜及电镜下观察肾脏形态结构及足细胞超微结构;（3）检测Angptl3、Nephrin、Podocin及CD2AP分子的表达。结果:（1）尿生化指标（尿蛋白/肌酐）1)各组阿霉素造模后,第一周出现蛋白尿,模型组（2.13±0.25）与对照组（1.63±0.49）比较差异有统计学意义（P<0.05）,至第四周末蛋白/肌酐比值达到最大值（2.54±0.39）且与同一时间点对照组（1.64±0.67）比较差异有统计学意义（P<0.05）。2)与模型组相比,第一周和第二周中药干预组的尿蛋白/肌酐比值降低,但差异无统计学意义（P>0.05）,第三周（2.02±0.09）、第四周（2.06±0.21）尿蛋白/肌酐比值与模型组比较降低,且差异有统计学意义（P<0.05）。3)激素干预组尿蛋白/肌酐比值第一周（1.69±0.38）与模型组（2.13±0.25）比较降低,且差异有统计学意义（P<0.05）;第二周（1.87±0.12）与模型组（2.19±0.33）比较尿蛋白/肌酐比值降低,且差异有统计学意义（P<0.05）;第三周（1.97±0.04）与模型组（2.30±0.28）比较尿蛋白/肌酐比值降低,且差异有统计学意义（P<0.05）;第四周（2.04±0.07）与模型组（2.54±0.39）比较尿蛋白/肌酐比值降低,且差异有统计学意义（P<0.05）。4)中西医结合组尿蛋白/肌酐比值第一周（1.64±0.23）与模型组（2.13±0.25）比较降低,且差异有统计学意义（P<0.05）;第二周（1.82±0.06）与模型组（2.19±0.33）比较尿蛋白/肌酐比值降低,且差异有统计学意义（P<0.05）;第三周（1.86±0.21）与模型组（2.30±0.28）比较尿蛋白/肌酐比值降低,且差异有显着统计学意义（P<0.01）;第四周（1.93±0.09）与模型组（2.54±0.39）比较尿蛋白/肌酐比值降低,且差异有显着统计学意义（P<0.01）。（2）血清生化指标1)阿霉素造模4周后,与对照组小鼠（31.14±3.66）相比,模型组小鼠的血清白蛋白含量（g/l）（25.38±5.53）显着降低,且差异有统计学意义（P<0.05）;中药干预组血清白蛋白水平（25.32±2.89）与模型组（25.38±5.53）相比差异无统计学意义（P>0.05）;激素干预组血清白蛋白水平（31.53±4.12）高于模型组（25.38±5.53）,且差异有统计学意义（P<0.05）;中西医结合组血清白蛋白水平（32.68±4.38）高于模型组（25.38±5.53）,且差异有显着统计学意义（P<0.01）。2)与对照组小鼠相比,模型组小鼠甘油三酯（mmol/l）（3.76±0.94）水平高于对照组（1.73±0.25）,且差异有统计学意义（P<0.05）;中药干预组（2.72±0.81）、激素干预组（2.34±0.59）、中西医结合组（1.84±0.68）甘油三酯水平均低于模型组（3.76±0.94）,且差异均有统计学意义（P<0.05）;中西医结合组较显着。3)与对照组小鼠相比,模型组小鼠总胆固醇（mmol/l）含量（6.42±1.39）高于对照组（2.84±0.44）,且差异有统计学意义（P<0.05）;激素干预组（3.23±0.44）、中西医结合组（3.02±0.37）与模型组比较总胆固醇降低,且差异有统计学意义（P<0.05）。4)各组小鼠血肌酐和尿素氮水平均无明显改变,差异无统计学意义（P>0.05）。（3）肾脏组织病理形态变化造模4周后光镜下各组小鼠肾小球结构均无明显病理变化,电镜下模型组小鼠肾小球足突融合消失,中药干预组、激素干预组和中西医结合组均出现不同程度的缓解,其中以中西医结合组对阿霉素肾病小鼠肾小球足突融合程度缓解较明显。（4）Angptl3及足细胞相关蛋白的表达（各蛋白分子灰度值比较）1)Nephrin:与对照组（1.02±0.13）比较,模型组小鼠Nephrin（0.49±0.09）表达水平降低,且差异有统计学意义（P<0.05）;中药干预组（0.84±0.26）、激素治疗组（0.80±0.33）、中西医结合组（0.99±0.26）与模型组小鼠（0.49±0.09）比较Nephrin表达水平均降低,且差异均有统计学意义（P<0.05）;以中西医结合组Nephrin表达水平降低较为明显,且差异有显着统计学意义（P<0.01）。2)Podocin:与对照组（0.72±0.15）比较,模型组小鼠Podocin（0.44±0.12）表达水平降低,且差异有统计学意义（P<0.05）;中药干预组（0.62±0.05）、激素治疗组（0.67±0.19）、中西医结合组（0.69±0.17）与模型组小鼠（0.44±0.12）比较Podocin表达水平均降低,且差异均有统计学意义（P<0.05）;以中西医结合组Podocin表达水平降低较为明显,且差异有显着统计学意义（P<0.01）。3)CD2AP:与对照组（1.39±0.47）比较,模型组小鼠CD2AP（0.53±0.24）表达水平降低,且差异有统计学意义（P<0.05）;中药干预组（1.03±0.20）、激素治疗组（1.17±0.55）、中西医结合组（1.36±0.46）与模型组小鼠（0.53±0.24）比较CD2AP表达水平均降低,且差异均有统计学意义（P<0.05）;以中西医结合组CD2AP表达水平降低较为明显,且差异有显着统计学意义（P<0.01）。4)Angptl3:与对照组（0.04±0.02）比较,模型组小鼠Angptl3（0.18±0.05）表达水平升高,且差异有统计学意义（P<0.05）;中药干预组（0.11±0.06）、激素干预组（0.10±0.07）、中西医结合组（0.09±0.03）与模型组小鼠（0.18±0.05）比较Angptl3表达水平均降低,且差异均有统计学意义（P<0.05）;以中西医结合组Angptl3表达水平降低较为明显,且差异有显着统计学意义（P<0.01）。结论:肾病一号方可以减轻阿霉素肾病小鼠蛋白尿程度,升高血清白蛋白,降低血脂,减少足突融合,减轻足细胞受损程度,保护足细胞的作用可能与降低Angptl3及升高足细胞相关蛋白Nephrin、Podocin和CD2AP的表达有密切关系。
皮艾琳[9]（2019）在《禾肾丸对阿霉素肾病大鼠足细胞α3β1 integrin蛋白表达的影响》文中认为目的:通过实验研究观察禾肾丸对阿霉素肾病大鼠24h蛋白尿、血生化的影响,及肾脏病理变化,并通过免疫组化法观察肾组织足细胞α3β1 integrin蛋白表达情况。方法:选110只健康雄性SD大鼠随机分为空白组和造模组,适应性喂养5天后,造模组一次性尾静脉注射阿霉素6mg/kg,建立阿霉素肾病大鼠模型,将造模成功后的大鼠随机分为禾肾丸组、依那普利组、模型组三个组。分别在干预后灌胃2、4、6、8周处死大鼠,并检测24h尿蛋白定量、血肌酐、血尿素氮、血清白蛋白,光学显微镜观察肾组织形态学变化,免疫组化法检测肾组织足细胞α3β1 integrin蛋白表达量的变化。结果:1.阿霉素肾病模型部分:实验期间,共有8只大鼠在造模后死亡,模型组死亡4只,禾肾丸组死亡3只,依那普利组死亡1只,1只大鼠因造模失败被剔除实验,造模成功率为89.4%。与空白组相比,各造模组大鼠体重、血清白蛋白、肾功能水平逐渐降低（P<0.05）,24h尿蛋白定量水平逐渐增多（P<0.05）。2.与模型组相比,随着禾肾丸及依那普利组给药干预,大鼠体重、血清白蛋白、肾功能水平逐渐增高（P<0.05）,24h尿蛋白定量水平逐渐减少（P<0.05）。3.光镜下示禾肾丸组肾脏病理改变明显轻于模型组（P<0.05）,与盐酸依那普利组相当;免疫组化法显示禾肾丸能上调足细胞α3β1 integrin蛋白的表达,与模型组比较（P<0.05）,与依那普利组相比无统计学差异。结论:禾肾丸可以减少阿霉素肾病大鼠尿蛋白的排泄,提高阿霉素肾病大鼠血清白蛋白水平,保护肾功能;禾肾丸可以改善阿霉素肾病大鼠肾组织病理损伤;禾肾丸可能通过上调阿霉素肾病大鼠肾组织足细胞α3β1 integrin蛋白的表达,维持肾小球足细胞结构和功能稳定,减轻肾小球滤过屏障损伤。
朱尧焓[10]（2019）在《抗纤灵方对阿霉素肾纤维化大鼠miRNAs表达谱的影响》文中指出目的观察阿霉素肾纤维化大鼠miRNAs的表达差异并探究低中高剂量抗纤灵方对阿霉素肾纤维化大鼠miRNAs表达谱的影响,以及验证不同剂量抗纤灵方通过抑制TGF-β/Smad信号通路改善肾纤维化。方法60只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、低中高剂量抗纤灵组、科素亚组6组。右肾摘除加尾静脉重复注射阿霉素建立肾纤维化模型,治疗八周后处死,检测血肌酐、尿素氮、24h尿蛋白定量观察肾功能,HE、Masson染色观察肾组织病理改变,Real-time PCR检测TGF-β1、Smad3、Col1α1、Col1α2基因表达水平。使用Illumina Hiseq2500测序,主成分分析和聚类分析分析评估各组大鼠间miRNAs表达水平相关性,进行差异表达基因分析并采用基因表达倍数变化大于1.5和P值<0.05为标准进行差异表达基因的筛选。结果1.与假手术组相比,模型组肾功能显着下降,Scr、Bun、24h UPro升高（P<0.05）;与模型组相比,低中高剂量抗纤灵方组、科素亚组明显改善肾功能,Scr、Bun、24h UPro明显降低（P<0.05）,抗纤灵方改善效果呈剂量依赖性。2.光镜观察,假手术组肾组织结构基本正常;模型组肾小球多呈中重度局灶节段性硬化,肾小管多颗粒、空泡样变性,大量炎症细胞浸润,间质纤维化,肾纤维化程度明显大于假手术组（P<0.05）;低中高剂量抗纤灵方组、科素亚组肾小球呈轻中度局灶节段性硬化,少量炎症细胞浸润,纤维化程度较模型组减轻,中、高剂量组差异明显（P<0.05）,低剂量组无统计学差异（P>0.05）。3.Real-time PCR结果显示,与假手术组相比,模型组、低中高剂量抗纤灵方组、科素亚组肾组织中TGF-β1、Smad3、Col1a1、Col1a2基因表达均明显升高（P<0.05）。与模型组相比,低中高剂量抗纤灵方组、科素亚组表达量降低,抗纤灵方组随着用药剂量增加差异逐渐显着（P<0.05）,低剂量组无统计学意义（P>0.05）。4.主成分分析显示中剂量抗纤灵方组和科素亚组相距最远,其他组介于中间位置,高剂量抗纤灵方组与假手术组相距最近。聚类分析显示假手术组样本聚集,低中高剂量抗纤灵方组与假手术组聚在一起。5.差异表达基因分析显示,与模型组相比较,假手术组存在21个miRNA差异表达,低中高剂量抗纤灵方组分别存在6、11、18个miRNA差异表达（P<0.05）,其中miR-21、miR-147、miR-542-3、miR-15b、miR-6216、miR-344a-2、miR-3085在模型组中表达上调,在高剂量抗纤灵方组中表达下调,miR-107在模型组中表达下调,在高剂量抗纤灵方组中表达上调。结论1.抗纤灵方能显着改善阿霉素肾病大鼠的肾功能,并通过抑制TGF-β/Smad信号通路抑制I型胶原基因的表达,改善肾脏纤维化,其中高剂量抗纤灵方作用效果最强。2.阿霉素肾纤维化大鼠存在miRNAs差异表达,抗纤灵方能影响miRNAs的表达,其中高剂量抗纤灵方的干预效果最明显。
二、激素对阿霉素肾硬化大鼠硬化进展的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、激素对阿霉素肾硬化大鼠硬化进展的研究（论文提纲范文）
（1）基于“阿霉素肾病”模型探讨清利活血中药治疗慢性肾脏病的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 1 CKD的基本概念 |
| 1.1 现代医学中CKD的定义 |
| 1.2 祖国医学中CKD的含义 |
| 2 对CKD的病因机制的认识 |
| 2.1 现代医学对CKD病因及发病机制的认识 |
| 2.2 祖国医学对CKD病因病机的认识 |
| 3 CKD的治疗 |
| 3.1 CKD的现代医学治疗 |
| 3.2 CKD的中医药治疗 |
| 4 清利活血法治疗CKD的理论基础 |
| 4.1 CKD的分子机制 |
| 4.2 CKD的常用研究模型 |
| 4.3 清利活血法在CKD治疗中的作用机理 |
| 4.4 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 临床资料研究 |
| 引言 |
| 1. 研究对象 |
| 1.1 病案来源 |
| 1.2 纳入标准 |
| 1.3 排除标准 |
| 2. 研究方法 |
| 2.1 病案预处理 |
| 2.2 信息采集方法 |
| 2.3 信息处理方法 |
| 2.4 疗效评估方法 |
| 2.5 统计分析方法 |
| 3. 研究结果 |
| 3.1 一般情况 |
| 3.2 入选病例的疗效评价结果 |
| 3.3 辨证及方药统计分析结果 |
| 4. 讨论 |
| 第三部分 清利活血中药延缓CKD进展的作用机制研究 |
| 引言 |
| 1. 目的 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 药物和试剂 |
| 2.2 药品制备 |
| 2.3 细胞 |
| 2.4 动物 |
| 2.5 血清和尿液检测 |
| 2.6 组织病理检测 |
| 2.7 蛋白质印迹检测 |
| 2.8 细胞活性检测 |
| 2.9 流式细胞分析 |
| 2.10 细胞凋亡检测 |
| 2.11 氧化损伤检测 |
| 2.12 统计分析 |
| 3. 结果 |
| 3.1 阿霉素体外引起肾小管上皮细胞损伤 |
| 3.2 阿霉素体内引起肾损害 |
| 3.3 氧化应激介导的细胞凋亡是阿霉素引起肾小管上皮细胞损伤的重要原因 |
| 3.4 MAPK信号通路的激活参与阿霉素诱导的肾小管上皮细胞损伤过程 |
| 3.5 清利活血中药泽兰、积雪草、鬼箭羽和六月雪体外减轻阿霉素引起的肾小管上皮细胞损伤 |
| 3.6 清利活血中药泽兰、积雪草和鬼箭羽体内减轻阿霉素引起的肾损害 |
| 3.7 清利活血中药泽兰、积雪草和鬼箭羽能够通过抗氧化作用抑制阿霉素引起的细胞凋亡 |
| 3.8 泽兰、积雪草和鬼箭羽抑制阿霉素引起的MAPK信号通路的激活 |
| 4. 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 清利活血药延缓CKD进展的中药活性成分研究 |
| 引言 |
| 1. 泽兰、积雪草、鬼箭羽活性成分分析 |
| 2. 泽兰、积雪草和鬼箭羽共有的活性成分分析 |
| 3. Apigenin延缓CKD进展的作用验证与机制探索 |
| 3.1 目的 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 存在的问题与展望 |
| 1.问题与不足 |
| 2.解决方法 |
| 3.展望 |
| 结语 |
| 攻读学位期间取得的成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（2）P2X7受体及其拮抗剂在儿童原发性肾病综合征中作用机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 第一部分 体内研究P2X7R及其拮抗剂在儿童原发性肾病综合征中的作用机制 |
| 背景与目的 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 体外研究P2X7R及其拮抗剂在ox-LDL诱导的足细胞损伤中的作用机制 |
| 背景与目的 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 学位论文总结 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的论文及学术成果 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 英文论文一 |
| 英文论文二 |
（3）阿霉素联合羟基脲诱导大鼠CKD肾阳虚证模型的建立与评价及真武汤干预机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 慢性肾脏病肾阳虚证临床及实验研究概况 |
| 1.慢性肾脏病病因及发病机制 |
| 2.中医对慢性肾脏病及肾阳虚证的认识 |
| 3.慢性肾脏病肾阳虚证动物模型研究 |
| 4.慢性肾脏病肾阳虚证临床研究 |
| 5.总结展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 真武汤的理论渊源应用及与CKD相关研究进展 |
| 1.真武汤的临床应用 |
| 2.真武汤与CKD相关研究 |
| 2.1 真武汤与CKD相关的临床研究 |
| 2.2 真武汤与CKD相关的实验研究 |
| 3.总结与展望 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 阿霉素诱导大鼠CKD模型的建立与评价 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 实验二 阿霉素联合羟基脲诱导大鼠CKD肾阳虚证模型的建立与评价 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 观察指标 |
| 4 统计学方法 |
| 结果 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 实验三 真武汤对阿霉素联合羟基脲诱导大鼠CKD肾阳虚证模型干预机制的研究 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 检测指标 |
| 4 统计学方法 |
| 结果 |
| 小结 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附图 |
（4）活肾降浊方对阿霉素肾病大鼠NF-κB、PGSK-3β表达的影响（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 1.祖国医学对肾纤维化的认识 |
| 1.1 肾纤维化的病名 |
| 1.2 肾纤维化的病因病机 |
| 1.3 肾纤维化的中医治疗 |
| 2.现代医学对NF-κB、PGSK-3β及肾纤维化的认识 |
| 2.1 NF-κB信号通路 |
| 2.2 磷酸化糖原合成酶激酶-3β |
| 2.3 肾纤维化发展机制及与NF-κB?PGSK-3β的联系 |
| 2.4 现代医学对于肾纤维化的治疗 |
| 材料与方法 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 实验试剂 |
| 1.5 实验环境 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 实验动物分组及模型复制 |
| 2.2 给药方法 |
| 2.3 实验取材 |
| 2.4 观察项目及方法 |
| 2.5 统计学方法 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 大鼠一般状态改变 |
| 3.2 大鼠尿蛋白排泄率测定 |
| 3.3 大鼠生化指标测定 |
| 3.4 大鼠肾组织病理学改变 |
| 讨论 |
| 1.阿霉素肾病大鼠模型的选择 |
| 2.关于肾炎康复片的选择 |
| 3.活肾降浊方方药分析 |
| 3.1 补益药 |
| 3.2 活血药 |
| 3.3 祛风除湿药 |
| 4.活肾降浊方治疗阿霉素肾病大鼠肾纤维化机理分析 |
| 4.1 大鼠一般状态改变 |
| 4.2 降低尿蛋白排泄 |
| 4.3 降低p-JAK2及p-STAT3 水平 |
| 4.4 活肾降浊方对NF-κB、PGSK-3β的下调 |
| 4.5 活肾降浊方对阿霉素肾病大鼠肾组织的病理发展变化 |
| 5.问题与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 致谢 |
| 攻读硕士期间发表的论文 |
| 个人简历 |
（5）肾康注射液调节UUO小鼠肾纤维化及HUVEC血管生成的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 中医药防治慢性肾脏病肾纤维化研究进展 |
| 1. 病名 |
| 2. 病因病机 |
| 3. 临床治疗 |
| 4. 实验研究 |
| 参考文献 |
| 综述二 肾康注射液治疗肾脏疾病研究概述 |
| 1. 药物基本情况 |
| 2. 临床疗效研究 |
| 3. 基础药理机制研究 |
| 4.发展前景 |
| 参考文献 |
| 综述三 血管生成在肾纤维化发生发展中作用的研究进展 |
| 1. 血管生成发生发展 |
| 2. 肾纤维化发生发展 |
| 3. 血管生成障碍与肾纤维化密切相关 |
| 参考文献 |
| 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 肾康注射液对UUO小鼠肾纤维化和血管生成的影响 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验二 肾康注射液对HUVEC血管生成和VEGF/VEGFR-2/eNOS的影响 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 致谢 |
| 在学期间主要成果 |
（6）补肾活血祛风中药复方对阿霉素肾病大鼠的实验研究及基于p38MAPK信号转导通路研究治疗阿霉素肾病大鼠的分子机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写词表 |
| 前言 |
| 第一部分 补肾活血祛风中药复方对阿霉素肾病大鼠的实验研究 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验药物和试剂 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 阿霉素肾病大鼠模型制备及分组 |
| 2.2 实验药物溶液的制备方法 |
| 2.3 实验给药方法 |
| 2.4 实验标本采集 |
| 2.5 检测指标和方法 |
| 2.5.1 大鼠一般情况观察 |
| 2.5.2 大鼠24h尿蛋白检测 |
| 2.5.3 大鼠血清生化指标 |
| 2.5.4 大鼠肾脏组织病理结构观察 |
| 2.6 统计学处理 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 大鼠一般情况 |
| 3.2 24h尿蛋白情况 |
| 3.3 大鼠血清生化指标 |
| 3.4 各组大鼠肾脏病理变化 |
| 3.4.1 HE染色肾组织病理光镜观察 |
| 3.4.2 电镜观察 |
| 4 讨论 |
| 4.1 关于模型的建立和认识 |
| 4.2 现代医学对肾病综合征的认识 |
| 4.3 祖国医学对肾病综合征的认识 |
| 4.4 补肾活血祛风中药复方评价 |
| 4.5 补肾活血祛风中药复方对阿霉素肾病大鼠的干预作用 |
| 第二部分 基于p38MAPK信号转导通路研究补肾活血祛风中药复方治疗阿霉素肾病大鼠分子机制 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验药物和试剂 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 阿霉素肾病大鼠模型制备及分组 |
| 2.2 实验药物溶液的制备方法 |
| 2.3 实验给药方法 |
| 2.4 实验标本采集 |
| 2.5 检测指标和方法 |
| 2.5.1 免疫组织化学法检测肾组织p-p38MAPK蛋白表达 |
| 2.6 统计学处理 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 PCR检测各组大鼠肾组织p38MAPKm RNA表达量结果 |
| 3.2 各组大鼠肾组织免疫组化法检测p38MAPK的实验结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 补肾活血祛风中药复方调控阿霉素肾病大鼠肾组织p38MAPK信号转导通路分子机制的探讨 |
| 4.2 p38MAPK信号转导通路激活后肾脏损害的关系 |
| 4.3 抑制p38MAPK信号转导通路表达与肾脏损害的关系 |
| 结论 |
| 问题与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 一、中医药治疗肾病综合征的临床研究进展 |
| 1.肾病综合征的中医病名 |
| 2.肾病综合征的中医病因病机 |
| 3.肾病综合征中医证型分布 |
| 4.现代中医药治疗肾病综合征的进展 |
| 二、p38MAPK信号通路与肾病综合征等肾脏疾病关系的研究进展 |
| 1.p38MAPK信号通路的简介 |
| 2.p38MAPK信号通路与肾病综合征的关系 |
| 3.p38MAPK信号通路与其他肾脏疾病的关系 |
| 4.小结 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间公开发表的文章 |
（7）基于miRNA探讨右归丸对激素抵抗型肾病综合征大鼠的增敏作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语 |
| 前言 |
| 第一章 研究背景 |
| 1 SRNS现代医学研究 |
| 2 足细胞损伤是导致SRNS的关键环节 |
| 3 miRNA诱导SRNS的作用机制 |
| 3.1 miRNA与足细胞 |
| 3.2 miRNA与足细胞相关基因的表达 |
| 4 传统医学对激素抵抗型肾病综合征的研究 |
| 4.1 SRNS病因病机 |
| 4.2 右归丸治疗肾病综合征的新机制 |
| 5 戴恩来教授“病证结合”以“益火之源,以消阴翳”立论 |
| 6 建立假说 |
| 第二章 右归丸治疗SRNS肾病减毒增敏机制实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物、试剂与器材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验分组 |
| 2.2 复制SRNS肾病大鼠模型 |
| 2.3 给药的剂量及方法 |
| 2.4 标本的采集及检测 |
| 3 结果 |
| 3.1 右归丸对SRNS大鼠一般状态的影响 |
| 3.2 右归丸对模型大鼠体重质数的影响 |
| 3.3 各组大鼠24 小时尿蛋白定量结果 |
| 3.4 右归丸对SRNS大鼠自主活动的影响 |
| 3.5 各组大鼠总蛋白、白蛋白、血脂指标变化 |
| 3.6 各组大鼠肾功能指标的变化 |
| 3.7 光镜观察各组大鼠肾组织病理变化 |
| 3.8 电镜观察各组大鼠肾组织超微结构变化 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三章 激素抵抗型肾病综合征大鼠肾皮质miRNA的差异性表达 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验的主要药物、试剂与器材 |
| 1.3 实验分组和动物模型的复制 |
| 1.4 指标检测及方法 |
| 1.5 基因芯片检测肾皮质miRNA的表达 |
| 1.6 Real-time PCR验证候选miRNAs |
| 2 统计方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 SRNS模型大鼠一般情况 |
| 3.2 用药前后各组大鼠尿蛋白定量变化 |
| 3.3 各组大鼠肾组织HE染色(光镜) |
| 3.4 透射电镜观察足细胞微结构变化 |
| 3.5 各组大鼠肾皮质miRNA芯片检测 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第四章 基于Dicer-microRNA对 SRNS大鼠足细胞SD分子调控及右归丸的干预作用 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物与分组 |
| 1.2 实验的主要药物、试剂与器材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 SRNS大鼠模型制备 |
| 2.2 给药的方法和剂量 |
| 2.3 指标检测及方法 |
| 2.4 肾皮质dicer、nephrin、podocin、CD2AP、synaptopodin免疫荧光染色 |
| 2.5 肾组织Dicer与 SD分子蛋白检测(Western Blotting) |
| 2.6 肾皮质Dicer与 SD分子mRNA检测(RT-PCR) |
| 2.7 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 SRNS大鼠一般情况 |
| 3.2 用药前后各组大鼠尿蛋白定量变化 |
| 3.3 光镜观察各组大鼠肾脏病理改变(PASM染色) |
| 3.4 肾皮质Dicer与 SD分子免疫荧光染色变化 |
| 3.5 肾皮质Dicer与 SD蛋白表达 |
| 3.6 各组大鼠肾皮质Dicer与 SD分子mRNA表达 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第五章 右归丸对SRNS大鼠足细胞凋亡因子Bax、Bcl-2、caspase-3 的干预作用 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验主要试剂与药物 |
| 1.2 动物与分组 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 SRNS大鼠模型的建立 |
| 2.2 24h-upr及血清生化指标的检测 |
| 2.3 肾小球微结构检查(透射电镜) |
| 2.4 免疫荧光法检测肾组织Bax?Bcl-2?caspase-3 的表达 |
| 2.5 肾皮质Bax?Bcl-2?caspase-3 蛋白检测(Western Blotting法) |
| 2.6 大鼠肾皮质Bax?Bcl-2?caspase-3 mRNA表达检测(RT-PCR法) |
| 2.7 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组大鼠24h尿蛋白量变化 |
| 3.2 足细胞电镜观察结果 |
| 3.3 各组大鼠肾组织Bax?Bcl-2?baspase-3 免疫荧光染色 |
| 3.4 肾皮质Bax?Bcl-2?caspase-3 蛋白表达 |
| 3.5 肾皮质Bax?Bcl-2?caspase-3 mRNA表达水平 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 创新点 |
| 结语 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 附录 |
（8）肾病一号方对阿霉素肾病模型小鼠Angptl3及足细胞相关蛋白表达的影响（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 1 肾病一号方对阿霉素诱导肾病模型小鼠理化指标的影响 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 实验主要仪器 |
| 1.1.2 主要材料与试剂 |
| 1.1.3 实验方法 |
| 1.1.3.1 实验动物 |
| 1.1.3.2 药物干预 |
| 1.1.3.3 标本的留取 |
| 1.1.3.4 检测 |
| 1.1.3.4.1 尿生化指标检测 |
| 1.1.3.4.2 血清生化指标检测 |
| 1.1.3.4.3 光镜观察 |
| 1.1.3.4.4 电镜观察肾脏超微病理 |
| 1.1.4 统计学方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 体重变化 |
| 1.2.2 尿蛋白/肌酐比值 |
| 1.2.3 血清生化指标结果 |
| 1.2.4 光镜、电镜结果 |
| 1.3 小结 |
| 1.3.1 阿霉素肾病BALB/C小鼠模型构建 |
| 1.3.2 肾病一号方可改善阿霉素肾病BALB/C小鼠血尿生化及肾脏病理 |
| 2 肾病一号方对阿霉素诱导肾病模型小鼠Angptl3 及足细胞相关蛋白表达的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 主要实验仪器 |
| 2.1.2 主要材料与试剂 |
| 2.1.3 实验方法 |
| 2.1.3.1 总蛋白提取并检测 |
| 2.1.3.2 Western-Blot检测组织中Nephrin、Podocin、Angptl3、CD2AP的含量 |
| 2.1.4 统计学分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 各组Nephrin蛋白水平的表达 |
| 2.2.2 各组Podocin蛋白水平的表达 |
| 2.2.3 各组CD2AP蛋白水平的表达 |
| 2.2.4 各组Angptl3 蛋白水平的表达 |
| 2.3 小结 |
| 3 讨论 |
| 4 全文总结 |
| 5 结论 |
| 6 展望与不足 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 1:综述 儿童肾病综合征常用模型及 中医药对足细胞保护作用的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 2 发表文章摘要 |
| 附录 3 |
（9）禾肾丸对阿霉素肾病大鼠足细胞α3β1 integrin蛋白表达的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 实验材料与方法 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 实验药物配置 |
| 1.4 实验仪器 |
| 1.5 实验试剂与耗材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 阿霉素肾病大鼠模型的建立 |
| 2.2 实验动物分组 |
| 2.3 给药干预方案 |
| 2.4 实验标本的采集 |
| 2.5 实验室指标的检测 |
| 2.6 病理学检测 |
| 2.7 统计学分析 |
| 第二部分 实验结果 |
| 1 大鼠的一般情况观察 |
| 2 各组大鼠体重变化情况 |
| 3 各组大鼠24h尿蛋白定量变化情况 |
| 4 各组大鼠血清白蛋白变化情况 |
| 5 各组大鼠肾功能(血肌酐、尿素氮)变化情况 |
| 6 光镜下观察各组大鼠肾脏病理变化 |
| 6.1 HE染色 |
| 6.2 Masson染色 |
| 7 免疫组化法检测各组大鼠足细胞α3β1 integrin蛋白的表达 |
| 第三部分 讨论 |
| 1 阿霉素肾病大鼠模型的探讨与建立 |
| 2 α3β1 integrin与肾性蛋白尿的关系及现代研究进展 |
| 3 禾肾丸的制定和方药分析 |
| 3.1 禾肾丸的组方原则 |
| 3.2 禾肾丸的方药分析 |
| 4 禾肾丸对阿霉素肾病大鼠的作用 |
| 4.1 禾肾丸对AN大鼠一般状态的影响 |
| 4.2 禾肾丸对AN大鼠24h尿蛋白定量、肾功能、血白蛋白的影响 |
| 4.3 禾肾丸对AN大鼠肾脏病理组织形态的影响 |
| 4.4 禾肾丸对AN大鼠肾足细胞α3β1 integrin蛋白表达的影响 |
| 5 不足与展望 |
| 第四部分 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 附录 综述 |
| 参考文献 |
（10）抗纤灵方对阿霉素肾纤维化大鼠miRNAs表达谱的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 试剂和仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 动物分组及给药 |
| 2.2 肾纤维化大鼠模型建立 |
| 2.3 动物实验标本的收集和处理 |
| 2.4 肾功能检测 |
| 2.5 肾组织病理检测 |
| 2.6 荧光定量PCR实验 |
| 2.7 miRNAs表达谱检测 |
| 2.8 统计学方法 |
| 结果 |
| 1.大鼠一般状况 |
| 2.大鼠肾功能的改变 |
| 3.大鼠肾组织的病理改变 |
| 3.1 HE染色观察及肾纤维化评估 |
| 3.2 Masson染色观察及肾纤维化评估 |
| 4.Real time-PCR检测结果 |
| 5.miRNA测序分析 |
| 5.1 miRNA主成分分析/聚类分析 |
| 5.2 miRNA差异表达分析 |
| 分析与讨论 |
| 1.中医对肾纤维化的认识 |
| 1.1 对病名的认识 |
| 1.2 对病因病机的认识 |
| 1.3 抗纤灵方配伍特点 |
| 1.4 抗纤灵方防治肾纤维化前期研究 |
| 2.抗纤灵方对肾功能的作用 |
| 3.抗纤灵方对肾纤维化的作用 |
| 4.抗纤灵方对阿霉素肾纤维化的miRNA表达谱的影响 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 文献综述 MicroRNAs调控肾脏纤维化的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士期间发表的论文 |
四、激素对阿霉素肾硬化大鼠硬化进展的研究（论文参考文献）
- [1]基于“阿霉素肾病”模型探讨清利活血中药治疗慢性肾脏病的作用及机制研究[D]. 吴其晶. 南京中医药大学, 2021(01)
- [2]P2X7受体及其拮抗剂在儿童原发性肾病综合征中作用机制的研究[D]. 朱艳姬. 山东大学, 2020(04)
- [3]阿霉素联合羟基脲诱导大鼠CKD肾阳虚证模型的建立与评价及真武汤干预机制研究[D]. 杨涛. 北京中医药大学, 2020(04)
- [4]活肾降浊方对阿霉素肾病大鼠NF-κB、PGSK-3β表达的影响[D]. 郑佳颖. 黑龙江省中医药科学院, 2020(02)
- [5]肾康注射液调节UUO小鼠肾纤维化及HUVEC血管生成的机制研究[D]. 潘雅婧. 北京中医药大学, 2020(04)
- [6]补肾活血祛风中药复方对阿霉素肾病大鼠的实验研究及基于p38MAPK信号转导通路研究治疗阿霉素肾病大鼠的分子机制[D]. 唐建. 成都中医药大学, 2020(02)
- [7]基于miRNA探讨右归丸对激素抵抗型肾病综合征大鼠的增敏作用及机制研究[D]. 王新斌. 甘肃中医药大学, 2020(08)
- [8]肾病一号方对阿霉素肾病模型小鼠Angptl3及足细胞相关蛋白表达的影响[D]. 张菲菲. 上海中医药大学, 2019(03)
- [9]禾肾丸对阿霉素肾病大鼠足细胞α3β1 integrin蛋白表达的影响[D]. 皮艾琳. 湖南中医药大学, 2019(02)
- [10]抗纤灵方对阿霉素肾纤维化大鼠miRNAs表达谱的影响[D]. 朱尧焓. 上海中医药大学, 2019(03)