一、转移性肺癌中TPEN蛋白的表达及其临床意义（论文文献综述）
黄蓓蕾,陈芳[1]（2021）在《SRPX2在非小细胞肺癌中的表达及与pERK1/2蛋白表达的关系》文中进行了进一步梳理目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织中含Sushi重复蛋白X连锁2（SRPX2）蛋白的表达及与磷酸化RAS/MAPK信号通路活化蛋白（pERK1/2）表达的关系。方法选取温州医科大学附属第一医院病理科收集的84例NSCLC癌组织标本、42例癌旁组织标本, 采用免疫组化染色检测两组标本中的SRPX2蛋白表达, 采用Western blot检测两组标本中的SRPX2、pERK1/2蛋白表达, 并分析二者的相关性。结果 NSCLC组织中的SRPX2蛋白阳性表达率（60.71%）显着高于癌旁组织（21.43%）, 差异具有统计学意义（P<0.05）;在不同TNM分期、是否发生淋巴结转移的NSCLC组织中的SRPX2蛋白阳性表达率比较, 差异具有统计学意义（P<0.05）;不同年龄、性别、肿瘤长径、肿瘤分化的NSCLC患者SRPX2蛋白阳性表达率差异无统计学意义（P>0.05）;NSCLC组织中的SRPX2、pERK1/2蛋白相对表达量均高于癌旁组织（P<0.05）;NSCLC组织中的SRPX2、pERK1/2蛋白相对表达量呈正相关（r=0.559, P<0.05）。结论 NSCLC组织中的SRPX2蛋白表达显着增强, 并且与肿瘤的发生发展及MAPK信号通路蛋白pERK1/2的表达具有显着的相关性。
余凤强[2]（2021）在《缺氧诱导外泌体miR-31-5p对肺腺癌侵袭转移的影响及机制研究》文中指出原发性肺癌（肺癌）是对人类生命健康危害最大的恶性肿瘤之一,肺腺癌（Lung adenocarcinoma,LUAD）是最常见的组织亚分型。肺癌的早期症状隐匿、不易发现,因此多数患者确诊时疾病已进展到晚期,肿瘤的转移是最为主要的原因之一。外泌体是能够被各类细胞所分泌具有膜结构并携带多种生物活性物质的微小囊泡。近年来,肿瘤细胞分泌的外泌体在调节细胞间通信中的作用激发了学者们的热议。缺氧是肿瘤侵袭的关键调节因素,可诱导改变肿瘤细胞外泌体的释放量和其中的内容物肿瘤细胞外泌体的释放。其中,微小RNA（micro RNA,miRNA）是最主要的包裹于外泌体中的生物活性分子。研究报道,肿瘤细胞分泌外泌体中的miRNAs转移至受体细胞,调控其基因表达来影响细胞的生理或病理的状态,进而改变肿瘤的进程。然而,缺氧条件下肺腺癌细胞分泌外泌体对肺腺癌的功能作用还尚不清楚。本研究旨在探讨肺腺癌细胞缺氧来源外泌体（Hypoxic LUADderived exosomes,HExo）中miRNA在肺腺癌侵袭和转移中的作用及其相关机制,为揭示肺腺癌进展补充新的理论依据,同时为肺腺癌临床液体活检提供新型、可靠的诊断标志物。目的:1.探讨缺氧诱导的外泌体对肺腺癌细胞迁移和侵袭的影响;2.探索外泌体miR-31-5p调控肺腺癌侵袭转移的机制;3.探讨肺腺癌患者血浆来源外泌体miR-31-5p的表达及其临床意义;4.探索长链非编码RNA GCC2-AS1在肺腺癌中的作用及其预后价值。方法:1.采用超速离心方法提取分别在缺氧和常氧环境中肺腺癌细胞分泌至培养基中的外泌体;通过透射电子显微镜（TEM）、纳米粒子追踪分析（NTA）和免疫印迹（WB）三种方法鉴定外泌体;2.摄取实验观察HExo被肺腺癌细胞摄取情况;划痕、Transwell侵袭实验和WB分别检测HExo对肺腺癌细胞迁移、侵袭能力和上皮间充质转化（EMT）的影响;3.通过Illumina高通量测序技术检测缺氧和常氧肺腺癌细胞来源的外泌体中miRNA表达谱,并对其筛选和验证差异性miRNAs;4.分别采用RNA酶消化实验和GW4869处理观察miR-31-5p是否被包裹在HExo中;5.体外功能实验和体内肺转移模型探讨外泌体miR-31-5p是否促进肺腺癌的侵袭、转移和EMT;6.miRNA数据库查询和文献调研预测miR-31-5p的靶基因,并通过双荧光素酶实验和WB进行双重验证;7.通过RNA干扰及miR-31-5p inhibitor共处理的挽救实验,探讨外泌体miR-31-5p是否通过靶基因影响肺腺癌进展;8.检测外泌体miR-31-5p调控介导肺腺癌进展的相关信号通路。9.检测肺腺癌患者和健康人群血浆来源外泌体miR-31-5p的表达水平;分析外泌体miR-31-5p和肺腺癌患者临床病理特征的相关性;10.受试者工作特征曲线（ROC）分析肺腺癌患者血浆来源外泌体miR-31-5p在临床潜在的诊断价值;11.检测并分析GCC2-AS1在肺腺癌中的表达;观察GCC2-AS1对肺腺癌生物学功能的影响;分析GCC2-AS1在肺腺癌患者中的预后意义。结果:1.缺氧可诱导增加肺腺癌细胞外泌体释放;2.HExo可被肺腺癌细胞摄取并促进其迁移、侵袭和EMT;3.HExo中miR-31-5p在肺腺癌细胞系中表达升高最为显着,可随HExo转运至其他细胞中;4.外泌体miR-31-5p在体外促进肺腺癌细胞的迁移和侵袭;在裸鼠肺转移模型中,发现外泌体miR-31-5p促进肺转移和EMT,且缩短裸鼠生存时间;5.双荧光素酶实验和WB结果均证实外泌体miR-31-5p可直接调控SATB2的表达;挽救实验说明外泌体miR-31-5p调控肺腺癌细胞的迁移和侵袭的能力依赖于SATB2;6.外泌体miR-31-5p可激活MEK/ERK信号通路;7.外泌体miR-31-5p在肺腺癌及转移患者血浆中表达显着上调,且与肺腺癌患者的N分期和TNM分期密切相关。ROC分析血浆来源外泌体miR-31-5p具有较高的鉴别肺腺癌患者和健康人群的能力;8.长链非编码RNA GCC2-AS1在肺腺癌中显着上调,并促进肺腺癌细胞的增殖和侵袭;高表达GCC2-AS1与肺腺癌患者不良预后相关,且可被确定为独立预后标志物。结论:1.缺氧来源外泌体在体内外均可促进肺腺癌侵袭转移和EMT;2.外泌体miR-31-5p靶向调控SATB2基因介导的肺腺癌迁移和侵袭,并激活MEK/ERK信号通路;3.血浆来源外泌体miR-31-5p可作为肺腺癌外周循环诊断的生物标志物;4.高表达GCC2-AS1促进肺腺癌细胞增殖和侵袭,是肺腺癌患者预后的独立危险因素。
栗家平[3]（2020）在《SALL4在非小细胞肺癌中表达的临床意义及作用分子机制的研究》文中认为目的:肺癌是临床上常见的恶性肿瘤,其发病率和死亡率在我国均居恶性肿瘤的首位,肺癌分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌,其中非小细胞肺癌占85%以上。目前肺癌的传统治疗方式包括手术切除、放疗和化疗等,但对于晚期肺癌患者,由于癌细胞发生转移、化疗敏感性低等因素,使得其治疗效果并不理想,五年生存率较低。肺癌的发生是一个涉及多种癌基因的异常表达及抑癌基因失活的过程,近年来,根据肺癌患者特定基因突变类型而进行的分子靶向治疗取得了巨大进展,并在一定程度上提高了肺癌患者的生存周期。因此,探究肺癌发生、转移的分子机制,为肺癌的临床治疗提供新的思路和干预靶标,对提高肺癌临床疗效具有重要意义。人类婆罗双树样基因（SALL4）是近年来发现的一种原癌基因,其编码一种锌指蛋白转录因子,在维持胚胎干细胞的自我更新和多能性方面发挥重要作用。SALL4可通过调节不同的信号通路、转录因子和表观遗传修饰等机制发挥其调控功能,参与了多种恶性肿瘤如肝癌、胃癌的发生和进展过程,且其表达水平影响肿瘤患者的预后。目前关于SALL4在肺癌中的调控作用和临床意义尚不多见,因此本研究旨在探讨SALL4在肺癌中的表达,分析SALL4表达水平与肺癌患者临床病理参数和预后的相关性,进而从细胞水平探讨SALL4对肺癌细胞生物学功能的调控作用及其可能的作用机制。方法:（1）采用RT-PCR检测30例肺腺癌患者肿瘤组织中SALL4 mRNA的表达水平,免疫组化（肺癌组织芯片,62例）检测肿瘤组织中SALL4表达并对染色结果进行评分,收集患者完整的临床资料,分析SALL4表达与患者各临床病理参数的相关性。根据回访情况绘制Kaplan-Meier生存曲线,分析SALL4表达对患者总生存周期和无病生存周期的影响,单因素和多因素回归分析SALL4表达对于预后判断的临床意义。（2）采用RT-PCR及Western blot法检测5种肺癌细胞系中S ALL4 mRNA和蛋白的表达水平,构建稳定敲低SALL4表达的肺癌细胞系,采用平板克隆形成实验和MTT法检测SALL4对肺癌细胞增殖能力的影响。流式细胞术检测SALL4对肺癌细胞的细胞周期和细胞凋亡情况的影响,并采用Western blot检测细胞周期及细胞凋亡相关蛋白的表达。细胞划痕实验检测各组肺癌细胞的迁移情况,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot法检测肺癌细胞EMT相关蛋白的表达。进而建立肺癌裸鼠皮下移植瘤模型,观察在体内敲低SALL4表达对移植瘤生长的影响,并采用Western blot检测瘤体中相关蛋白的表达水平。（3）Western blot法检测转染后肺癌细胞中STAT3的表达及其磷酸化水平,在敲低表达SALL4的细胞中激活STAT3的表达,采用MTT法、流式细胞术和Transwell法检测共转染siRNA-SALL4和激活STAT3后细胞增殖、凋亡和侵袭能力的变化。结果:（1）SALL4的表达（mRNA）在30例肺癌肿瘤组织显着高于癌旁正常组织（P<0.05）。免疫组化（肺癌组织芯片:62例）结果显示,SALL4在肿瘤组织中的阳性率为67.7%（42/62）,而在癌旁正常组织SALL4表达的阳性率为19.4%（12/62）（P<0.05）,表明SALL4在肺癌组织中表达上调。临床病理资料分析结果显示,SALL4表达与患者TNM分期和淋巴结转移密切相关（P<0.05）,而与患者性别、年龄、吸烟状况、肿瘤大小和分化程度无显着相关性（P>0.05）,其中SALL4高表达组相比于SALL4低表达组具有更多的淋巴结转移例数和更高的TNM分期。预后分析结果显示,SALL4低表达者相比于SALL4高表达者具有更长的总生存期和无病生存期,且SALL4表达是肺癌患者预后的独立危险因子。（2）SALL4 mRNA和蛋白表达在肺癌细胞系中显着上调,与组织中表达情况一致。在A549和H358细胞系中构建稳定敲低SALL4表达的肺癌细胞系,RT-PCR结果显示转染siRNA-SALL4后,A549和H358细胞中SALL4的表达水平显着降低（P<0.05）,表明转染成功。平板克隆实验结果显示,抑制SALL4表达后,克隆形成数显着下降（P<0.05）;MTT结果显示,siRNA-SALL4组细胞从第2天开始生长活性显着低于对照组（P<0.05）,表明敲低SALL4可抑制肺癌细胞的增殖能力。流式细胞实验结果显示,抑制SALL4表达后,肺癌细胞发生凋亡的比例显着升高（P<0.05）,且可将肺癌细胞阻滞在G0/G1期,从而抑制细胞周期的进展。细胞划痕实验和Transwell实验结果显示,抑制SALL4表达,肺癌细胞的迁移和侵袭能力均显着降低（P<0.05）。Western blot实验结果显示,抑制SALL4表达,肺癌细胞中Bax、Caspase3和Caspase9蛋白的表达增强,而Bcl-2蛋白表达减弱,同样,细胞周期相关蛋白CyclinB,CyclinE和Cyclin D1的表达也显着降低,且细胞EMT过程得到抑制。动物实验结果显示,敲低SALL4表达后,移植瘤体积和重量的增长速度均显着降低,即在体内水平降低SALL4表达可抑制肺癌移植瘤的生长;（3）Westernblot结果显示,敲低SALL4表达后,磷酸化p-STAT3的表达水平均显着下降,表明敲低SALL4可同时抑制STAT3的磷酸化过程。在转染siRNA-SALL4和激活STAT3后,si-SALL4+激活STAT3组肺癌细胞相比于siRNA-SALL4组的生长活性和侵袭能力显着增强,而凋亡能力显着减弱,表明激活STAT3可逆转敲低SALL4对肺癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。结论:SALL4在肺癌组织和细胞系中表达均上调,其表达与患者TNM分期、淋巴结转移和预后明显相关;敲低SALL4表达可显着降低肺癌细胞的增殖活性、迁移和侵袭能力及EMT过程,并阻滞细胞周期进展,促进细胞凋亡,其可能机制与SALL4可靶向激活STAT3信号通路有关。本研究为明确肺癌发生发展的分子机制提供了新的思路,并为寻找新的肺癌诊治的作用靶点提供理论基础。
周玫余[4]（2020）在《长链非编码RNA SFTA1P在非小细胞肺癌中的作用》文中提出目的:本研究将从分子细胞、动物和临床样本多个层次研究lnc RNA SFTA1P在非小细胞肺癌中的临床意义和生物学功能。方法:1.采用NCBI数据库和蛋白质编码能力预测工具分析SFTA1P的分子特征。2.利用q RT-PCR试验检测62对非小细胞肺癌组织和正常组织中的SFTA1P表达量,并用Kaplan-Meier Plotter分析SFTA1P与非小细胞肺癌患者预后的关联。3.通过NCBI获得SFTA1P的全长序列,设计合成SFTA1P过表达质粒和干扰RNA（si RNA）,用于构建SFTA1P过表达细胞模型和细胞干扰模型。4.运用CCK-8检测SFTA1P过表达或干扰对细胞增殖能力的影响。有或无基质胶的Transwell小室实验检测SFTA1P对细胞迁移能力和侵袭能力的影响,运用Annexin V-APC/7-AAD试剂盒、流式细胞术检测SFTA1P对细胞凋亡能力的影响。5.裸鼠皮下和尾静脉注射SFTA1P过表达的肺癌细胞株,观察SFTA1P在体内对非小细胞肺癌生长和转移的影响。结果:1.SFTA1P位于10p14染色体上,全长为693bp,CAPT软件分析发现其蛋白质编码能力较低。2.相较于正常肺组织,SFTA1P在非小细胞肺癌组织中的表达较低（P<0.05）;Kaplan-Meier Plotter分析发现SFTA1P的表达水平越低,非小细胞肺癌患者预后越差（HR=0.63,95%CI=0.53–0.74,P<0.01）。3.与肺上皮细胞系HBE相比,SFTA1P在A549和H460细胞系中相对低表达（P<0.01）,在H1299和H1975细胞系中相对高表达（P<0.01）;4.A549和H460细胞中过表达SFAT1P后,相比于对照组,细胞增殖、迁移和侵袭能力明显下降,并促进细胞的凋亡（P<0.05）;在H1299细胞中干扰SFTA1P的表达后,细胞增殖、迁移、侵袭能力相比于对照组显着升高（P<0.05）,细胞的凋亡能力显着下降（P<0.05）。5.裸鼠皮下成瘤实验和尾静脉转移试验表明,皮下和尾静脉注射SFTA1P过表达的细胞后,可观察到肿瘤在体内的生长和转移能力显着低于对照组（P<0.05）。结论:1.SFTA1P在非小细胞肺癌组织中表达明显低于相应的癌旁正常组织,且SFTA1P低表达的非小细胞肺癌患者预后较差。2.SFTA1P可以抑制非小细胞肺癌的增殖、迁移和侵袭能力,并促进细胞的凋亡。3.SFTA1P可以抑制非小细胞肺癌在体内的生长和转移。
胡早秀[5]（2019）在《miR-339-5p在非小细胞肺癌中的作用及机制研究》文中指出[背景和目的]2018年发布的GLOBOCAN 2018全球癌症统计报告数据显示,肺癌的发病率和死亡率在全球癌症中均位居第一位。中国肺癌的发展趋势与全球肺癌类似,既是发病率最高的肿瘤,也是肿瘤相关死因之首。“宣威地区”在我国乃至世界都是肺癌的高发区,且因宣威肺癌中不吸烟女性肺腺癌的死亡率是中国平均水平的20倍等明显的区域特异性,使其在我国肺癌防治中具有特殊地位。我们课题组前期研究发现,宣威地区肺癌的高发生率和高死亡率与使用当地特殊燃煤引起的室内污染有关,该类室内污染环境可能会导致特异的miRNA谱,进而引起宣威肺癌。我们前期对24对宣威肺癌组织标本进行miRNA芯片检测,发现155条差异表达的miRNA,其中,miR-339-5p是上调表达的miRNA之一,根据已有研究报道,miR-339-5p在大部分肿瘤中的表达低于相对应的正常组织,而在肺癌中仅见一篇相关研究,但其表达出现了不一致结果且并未对miR-339-5p的作用机制进行进一步研究。鉴于以上情况,我们利用癌症和肿瘤基因图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库分析发现miR-339-5p在肺腺癌和肺鳞癌中均为高表达,前期细胞实验,我们同样发现miR-339-5p在肺癌细胞株中为高表达。因此,我们提出了几个问题:miR-339-5p在肺癌与正常肺组织中会出现差异表达吗?宣威肺癌和非宣威肺癌中的表达是否不一致?如果存在差异表达,miR-339-5p在肺癌的发生发展中起什么作用?机制又如何?本研究检测非小细胞肺癌（Non Small-Cell Lung Cancer,NSCLC）癌组织和配对正常肺组织以及NSCLC血清和对照中miR-339-5p的表达水平,并分析miR-339-5p与临床因素的关系以及其诊断价值;同时通过体内外实验,探究下调miR-339-5p的表达水平以观察对细胞增殖、迁移、侵袭及裸鼠成瘤的影响;并初步研究miR-339-5p的靶基因及信号通路。通过以上研究探讨miR-339-5p在NSCLC中扮演的角色及其作用机制,以期能够进一步为肺癌的防治诊疗工作拓展新的方法。第一部分miR-339-5p在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其临床意义[目的]分析组织芯片和TCGA中miR-339-5p表达相关数据,同时检测非小细胞肺癌患者组织样本（癌组织、癌旁）和血清样本（肺癌患者、非癌患者）的miR-339-5p表达水平,分析其表达与临床因素之间的关系,探讨miR-339-5p在非小细胞肺癌（NSCLC）中的作用和临床意义。[方法]1.分析前期芯片数据,探究miR-339-5p在宣威肺腺癌及配对远端正常肺组织中的表达情况。2.分析TCGA数据库数据,探究miR-339-5p在非小细胞肺癌（NSCLC）及正常肺组织中的表达情况。3.qPCR检测63例（30例宣威籍,33例非宣威籍）非小细胞肺癌（NSCLC）癌组织及其远端正常肺组织中miR-339-5p表达量,分析癌与正常组织的表达情况,结合患者临床病理特征（年龄,性别,吸烟状态,地区,组织学类型,淋巴结转移和分期）,对miR-339-5p的表达水平与患者临床病理特征进行相关性分析。最后分析miR-339-5p对肺癌组织的诊断价值。4.qPCR检测104例非小细胞肺癌和50例非癌血清样本中miR-339-5p表达量,探讨其是否适宜作为非小细胞肺癌诊断的血清标记物。[结果]1.前期宣威肺腺癌芯片数据显示,与正常肺组织相比,有155条miRNA出现差异表达（65条上调,90条下调）,其中miR-339-5p为上调表达（FC=2.0189,p=0.0001,FDR=0.0017）。2.TCGA数据库数据显示,与正常肺组织相比,肺腺癌（Fold Change=2.334,p=2.618×10-11<0.001）和肺鳞状细胞癌（Fold Change=1.589,p=4.323 ×10-6<0.001）中miR-339-5p的表达均上调。3.在63例（30例宣威籍,33例非宣威籍）NSCLC中,与配对正常肺组织相比,miR-339-5p在癌组织的表达量明显增高（p=0.007<0.01）。临床病理特征分析,miR-339-5p高表达者淋巴结转移率更高（p=0.02<0.05）,而miR-339-5p的表达水平与年龄,性别,吸烟状态,地区,组织学类型和分期的相关性分析均无统计学意义（p>0.05）。应用MedCalc软件对肺癌组织中 miR-339-5p 进行 ROC（Receiver Operation Characteristic Curve,受试者工作特征曲线）分析,当截值（cutoffvalue）为0.1195时,miR-339-5p达到最高诊断效率,其敏感性为55.6%,特异性为74.6,AUC（Area Underthe Curve,曲线下面积）为0.639。4.血清miR-339-5p在非小细胞肺癌和非癌对照组中的表达差异无统计学意义（p=0.07>0.05）。[结论]1.miR-339-5p在非小细胞肺癌组织中高表达,且与淋巴结转移有关;miR-339-5p在宣威非小细胞肺癌组织中的表达量与非宣威非小细胞肺癌组织的表达量差异无统计学意义。2.miR-339-5p在肺癌组织的诊断中仅有较低的准确性,对肺癌组织的诊断有一定参考价值。3.miR-339-5p在NSCLC和非癌对照组中血清中的表达无显着差异,其可能不适合作为NSCLC诊断的血清标记物。第二部分 miR-339-5p对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系生物学行为的影响[目的]探索下调miR-339-5p对非小细胞肺癌细胞系SPC-A1、XWLC-05增殖、迁移、侵袭等生物学功能的影响。[方法]1.运用qPCR技术检测正常支气管上皮细胞BEAS-2B和肺癌细胞株SPC-A1、A549、XWLC-05、YTLMC、GLC 的 miR-339-5p 表达量,筛选出 miR-339-5p高表达的肺癌细胞株。2.将miR-339-5p inhibitor转染对SPC-A1、XWLC-05细胞中,测定转染效率,筛选稳定转染的SPC-A1、XWLC-05细胞系,检测细胞增殖、迁移及侵袭能力。[结果]1.与BEAS-2B细胞中miR-339-5p表达水平相比,miR-339-5p在肺癌细胞株SPC-A1、A549、XWLC-05、YTLMC、GLC 中均明显高表达（P<0.05）,其中SPC-A1的表达最高。2.成功转染miR-339-5p inhibitor后,与正常组和阴性对照相比,SPC-A1、XWLC-05细胞中的细胞miR-339-5p表达明显下降（p<0.05）。3.肺癌细胞系的生物学功能检测:（1）转染 miR-339-5p inhibitor 能抑制 SPC-A1、XWLC-05 细胞的增殖能力,差异有统计学意义（p<0.05）。（2）转染 miR-339-5p inhibitor 能抑制 SPC-A1、XWLC-05 细胞的迁移能力,差异有统计学意义（p<0.05）。（3）转染 miR-339-5p inhibitor 能抑制 SPC-A1、XWLC-05 细胞的侵袭能力,（p<0.05）。[结论]肺癌细胞株 SPC-A1、A549、XWLC-05、YTLMC、GLC 中 miR-339-5p均呈高表达,以SPC-A1最高;下调miR-339-5p可以抑制肺癌细胞SPC-A1、XWLC-05增殖、迁移、侵袭能力。miR-339-5p在非小细胞肺癌的发生发展中可能发挥促进作用,是促癌基因。第三部分mmiR-339-5p对非小细胞肺癌（NSCLC）体内实验的研究[目的]探讨下调miR-339-5p对非小细胞肺癌细胞SPC-A1裸鼠成瘤的影响。[方法]1.通过慢病毒转染SPC-A1细胞,构建miR-339-5p低表达稳定转染细胞系和阴性对照稳定转染细胞系。2.在裸鼠腋下分别接种空白对照（Control）、阴性对照（NC）和miR-339-5p低表达（miR-339-5p inhibitor）细胞系,观察裸鼠一般情况,测量裸鼠瘤体大小。37天处死裸鼠,测瘤体大小,称瘤体重量。瘤体制成石蜡块,行HE染色,并通过免疫组化（immunohistochemistry,IHC）检测Ki-67的表达量。[结果]1.慢病毒转染SPC-A1细胞后,荧光显微镜观察细胞的转染效率大于50%,qPCR检测结果显示miR-339-5p在inhibitor组的表达明显低于NC组,差异有统计学意义（p<0.05）。2.在24天后,miR-339-5p低表达（miR-339-5p inhibitor）组瘤体体积小于阴性对照（NC）和空白对照（Control）,差异有统计学意义（p<0.05）;处死裸鼠后,miR-339-5p低表达（miR-339-5p inhibitor）组瘤体重量轻于阴性对照（NC）和空白对照（Control）组,差异有统计学意义（p<0.05）。3.Ki-67在低表达（miR-339-5p inhibitor）组的表达高于阴性对照（NC）和空白对照（Control）组,差异有统计学意义（P<0.05）。[结论]下调miR-339-5p表达可显着抑制非小细胞肺癌（NSCLC）细胞裸鼠成瘤能力及使 Ki-67 指数（immunoreactive score,IRS）降低。第四部分BCL6作为miR-339-5p直接基因的研究[目的]探讨BCL6是否为非小细胞肺癌中miR-339-5p的直接靶基因,并分析BCL6在肺癌组织及细胞中的表达情况以及其与预后的关系。[方法]1.生物信息学方法预测miR-339-5p的靶基因。2.荧光素酶报告基因系统检测BCL6是否为miR-339-5p的直接靶基因。3.蛋白印迹（Western blot）检测下调miR-339-5p后,肺癌细胞株SPC-A1中BCL6的表达变化。4.qPCR检测63例非小细胞肺癌（NSCLC）组织和其配对远端正常肺组织中BCL6的表达情况,回归分析其与miR-339-5p表达的相关性。5.利用GEPIA在线芯片数据,分析BCL6在非小细胞肺癌（NSCLC）和正常肺组织的表达情况。6.利用KM plotter软件分析BCL6表达与非小细胞肺癌（NSCLC）预后的关系。[结果]1.生物信息学预测BCL6为miR-339-5p的靶基因。2.荧光素酶报告系统证实miR-339-5p的直接靶基因是BCL6。3.下调SPC-A1细胞中的miR-339-5p表达后,蛋白印迹（Western blot）证实BCL6的表达上调。4.与远端正常肺组织相比,BCL6在63例非小细胞肺癌（NSCLC）中低表达（P<0.05）,且与 miR-339-5p 的表达呈负相关（R=0.236,P=0.044<0.05）。5.GEPIA分析结果显示:与正常肺组织相比,BCL6在肺腺癌和肺鳞癌中的表达均为低表达。6.KM plotter分析结果显示:BCL6高表达者总生存期（overall survival,OS）更长（HR=0.71,95%CI:0.6-0.84,p=6.2×10-5<0.001）,BCL6 高表达者有无进展生存期（progression-free survival,PFS）延长的趋势（HR=0.77,95%CI:0.58-1.01）,然而并未达到统计学差异（p=0.056>0.05）。[结论]miR-339-5p的直接靶基因是BCL6;BCL6在非小细胞肺癌（NSCLC）中低表达,且与miR-339-5p的表达呈负相关,提示miR-339-5p可能通过靶向BCL6来调控非小细胞肺癌（NSCLC）的发生发展。
吴淑红,荣福,欧阳雁弟[6]（2019）在《HER-2在非小细胞肺癌中的表达和临床意义》文中研究指明目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织中表皮生长因子受体-2（HER-2）的表达及临床意义。方法 20例经皮肺活检、电子气管镜患者的石蜡包埋癌组织标本,包括15例腺癌组织标本, 5例鳞癌组织标本;另选取10例癌旁正常组织标本。应用免疫组化方法分别检测不同组织的HER-2表达情况,观察比较HER-2蛋白在不同组织类型中表达情况,分析HER-2蛋白表达与性别和年龄相关性。结果腺癌组织HER-2蛋白过度表达率为73.33%,鳞癌组织HER-2蛋白过度表达率为20.00%,癌旁正常组织HER-2蛋白无过度表达;腺癌组织HER-2蛋白过度表达率高于鳞癌组织、癌旁正常组织,差异有统计学意义（P<0.05）;鳞癌组织、癌旁正常组织过度表达率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。经免疫组化结果分析,男性患者HER-2蛋白过度表达率为53.85%（7/13）,女性为71.43%（5/7）, HER-2蛋白过度表达率与性别无相关性（r=0, P>0.05）;年龄≤60岁患者HER-2蛋白过度表达率为83.33%（10/12）,年龄>60岁为25.00%（2/8）, HER-2蛋白过度表达率与年龄呈负相关（r=-0.657, P<0.05）。结论 HER-2在非小细胞肺癌组织中有不同程度的表达, HER-2可能参与非小细胞肺癌的早期病理演变,并可为临床制定非小细胞肺癌个体化治疗方案提供依据。
贺荟静[7]（2019）在《EB病毒对胃癌中Caveolin-1表达的调控作用和机制研究》文中进行了进一步梳理背景和目的:EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）可通过干扰宿主基因的表达参与肿瘤的发生发展。窖蛋白-1（Caveolin-1,CAV-1）是多种信号通路的枢纽中心,在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。CAV-1在肿瘤发生发展中具有抑癌和促癌的双面作用,在胃癌中的作用尚存在争议。CAV-1在肿瘤组织中的表达及发挥何种作用与肿瘤组织和细胞类型有关,而EBV相关胃癌（EBV-associated gastric carcinoma,EBVaGC）是胃癌中的一种独特亚群,对以往高通量表达谱数据分析及我们前期实验结果提示在胃癌细胞中EBV可能抑制CAV-1的表达,但EBV对CAV-1的调控作用和机制尚不明确。本研究旨在通过组织和细胞学实验明确胃癌中EBV对CAV-1的调控作用,探讨EBV调控CAV-1表达的机制及CAV-1基因在胃癌发生发展中的作用,为揭示EBV致癌机制提供依据。方法:采用real-time PCR以及Western blotting检测EBV阳性和阴性细胞系中CAV-1表达水平;免疫组化检测EBVaGCC、EBV阴性胃癌（EBV-negative gastric carcinoma,EBVnGC）组织以及癌旁组织中CAV-1表达;通过miRNA mimics、inhibitor转染,检测EBV-miR-BART1-3p对CAV-1的靶向抑制作用;采用亚硫酸氢盐基因组测序法（BGS）检测EBV阳性和阴性胃癌细胞中CAV-1基因启动子及第一外显子甲基化状态,采用甲基化特异性PCR（MSP）检测胃癌组织中CAV-1启动子基因甲基化状态;采用real-time PCR检测EBV阳性和阴性胃癌细胞系DNA甲基化转移酶（DNMTs,包括DNMT1、DNMT3a和DNMT3b）的表达及DNMTs抑制剂5-Aza-dC作用EBV阳性细胞系中CAV-1的表达;采用CCK-8、平板克隆形成试验、凋亡诱导试验以及迁移侵袭试验检测CAV-1 siRNA慢病毒稳定转染的胃癌细胞生物学行为的改变。结果:（1）EBV阳性胃癌和鼻咽癌细胞系中CAV-1的转录水平以及蛋白水平均低于EBV阴性胃癌和鼻咽癌细胞系（P<0.05）;EBVaGC组织中CAV-1阳性表达率（2.5%,1/40）低于各项临床指标匹配的EBVnGC组织（22.6%,12/53）,差异有统计学意义（P<0.05）。（2）软件预测3种EBV编码miRNAs可与CAV-1基因3’UTR结合（P<0.05）,其中EBV-miR-BART1-3p在EBV阳性细胞中呈高表达,但EBV-miR-BART1-3p inhibitor和mimics对EBV阳性细胞系和阴性细胞系中CAV-1的表达无明显影响。（3）EBV阳性胃癌细胞系中CAV-1启动子和第一外显子区37个甲基化位点呈高甲基化,而EBV阴性胃癌细胞系呈低甲基化（P<0.05）;MSP结果显示15例EBVaGC组织标本,13例（86.7%,13/15）出现甲基化条带;20例EBVnGC中,12例（60.0%,12/20）出现甲基化条带。（4）EBV阳性胃癌细胞系中DNMT3a表达水平明显高于EBV阴性细胞系,5-Aza-dC作用EBV阳性细胞系中CAV-1表达水平升高。（5）CAV-1 siRNA转染EBV阴性BGC823细胞后有效抑制CAV-1表达,细胞增殖率以及平板克隆形成率增高、抗顺铂诱导凋亡能力提高及细胞迁移和侵袭能力提高（P<0.05）;胃癌组织中的CAV-1的阳性表达率（26.5%,13/49）低于配对癌旁组织（83.7%,41/49）,差异有统计学意义（P<0.05）;91例EBVnGC组织中CAV-1的表达率为28.8%（25/91）,CAV-1在分化型胃癌中的表达率高于未分化型（P<0.05）,在无淋巴结转移病例中的表达率高于有淋巴结转移的病例组（P<0.05）。结论:（1）EBV对胃癌中CAV-1的表达具有负调控作用,EBV可能通过诱导CAV-1基因启动子高甲基化而非EBV-miRNAs抑制CAV-1表达。（2）与癌旁组织比较,CAV-1在胃癌组织中表达下调,CAV-1表达与胃癌分化程度和淋巴结转移呈负相关,胃癌细胞中CAV-1表达下调可促进细胞增殖、迁移、侵袭以及增强其抗凋亡能力,提示CAV-1在胃癌发生发展中以抑癌基因参与肿瘤。
宋姮[8]（2019）在《LncRNA FEZF1-AS1在非小细胞肺癌中的表达及其作用机制研究》文中提出在我国及世界范围内,肺癌的发病率及死亡率均位于常见恶性肿瘤的前列。非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）为最主要的组织学类型,主要包括鳞癌与腺癌等。深入探讨NSCLC的病因及发病机制对于肺癌的有效治疗具有重要意义。长链非编码RNA（Long non-codingRNA,LncRNA）指长度大于200个核苷酸的非编码RNA,可参与细胞内X染色体沉默、基因印记、染色质重塑、转录激活、转录干扰、核内运输等多种生物过程的调节,在多种肿瘤的发生发展中具有重要作用。为了揭示NSCLC中关键lncRNA分子的作用机制,我们通过Human mRNA+LncRNA表达谱芯片检测了8对NSCLC肿瘤及其配对正常肺组织中差异分子的表达情况,发现FEZF1-AS1、Linc01296、DUXAP8及DUXAP10等lncRNAs在癌组织中显着高表达。本研究中我们主要围绕FEZF1-AS1在非小细胞肺癌中的表达、功能和作用机制进行探讨,研究内容主要包括以下三方面:1.FEZF1-AS1在非小细胞肺癌中的表达及其生物学作用的研究;2.FEZF1-AS1作为ceRNA调控miRNAs-靶基因参与非小细胞肺癌进展的机制研究;3.FEZF1-AS1对非小细胞肺癌中miR-516b-5p-ITGA11表达调控作用的研究。通过以上研究工作,明确FEZF1-AS1在非小细胞肺癌中的作用机制,为非小细胞肺癌的病因及发病机制提供理论依据。第一部分FEZF1-AS1在非小细胞肺癌中的表达及其生物学作用的研究目的:筛选并验证FEZF1-AS1在非小细胞肺癌中的表达;从细胞增殖与凋亡、细胞周期分布、迁移与侵袭等方面观察FEZF1-AS1在NSCLC细胞中的作用;并初步探讨m6A修饰相关分子对FEZF1-AS1表达的影响。方法:采用Human mRNA+LncRNA表达谱芯片筛选8对NSCLC肿瘤及其配对的正常肺组织（4对鳞癌、4对腺癌）中差异分子的表达;采用qRT-PCR方法检测FEZF1-AS1在45对NSCLC肿瘤及其配对正常肺组织中的表达,并分析与临床病理特征的关系;体外培养NSCLC细胞株-H1299和H520,转染siRNA敲低细胞中FEZF1-AS1表达,分别通过CCK8法检测细胞增殖的改变、Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力的变化、流式细胞术检测细胞周期分布与凋亡率的变化。此外,转染siRNA敲低细胞中m6A修饰相关分子-METTL3、METTL14、YTHDF1及YTHDF2表达,观察对FEZF1-AS1表达的影响。进一步观察去甲基化药物3-脱氮腺苷（10μM）处理对H1299和H520细胞中FEZF1-AS1表达的影响。每组实验重复三次。所有数据应用SPSS Statistics 23.0统计软件进行分析,P<0.05为有显着差异。结果:1.表达谱芯片筛选结果和验证Human lncRNA/mRNA表达谱芯片筛选发现,肿瘤组织中505个lncRNAs显着上调,652个显着下调（FC≥2且P<0.05）。进一步以FC≥5且P<0.05为阈值,共筛选到20个显着上调、26个显着下调lncRNAs。从中选出15个lncRNAs在20对肺癌组织及配对的正常肺组织中进行了验证,结果发现FEZF1-AS1、DUXAP8、LINC01296、DUXAP10等在癌组织中的表达显着增加,本研究主要围绕FEZF1-AS1进行研究。2.FEZF1-AS1在非小细胞肺癌中显着高表达,并与淋巴结转移相关qRT-PCR方法检测FEZF1-AS1在45对NSCLC中的表达情况。与正常肺组织相比,FEZF1-AS1在肿瘤组织中的表达显着增加（P<0.0001）,与患者淋巴结转移呈显着正相关（P=0.020）。AUC曲线进一步表明单独检测FEZF1-AS1对NSCLC具有较好的诊断意义（AUC=0.759,P<0.0001）。3.体外实验检测FEZF1-AS1在NSCLC中的生物学作用FEZF1-AS1在非小细胞肺癌细胞株H1299和H520中相对高表达。敲低FEZF1-AS1表达可显着抑制H1299和H520细胞的增殖能力（CCK8,P<0.05）和迁移能力（Transwell,P<0.05）。在侵袭实验中,si-FEZF1-AS1组较NC组穿膜细胞数减少（P<0.05）。此外,流式细胞术检测表明,敲低FEAF1-AS1后可引起H1299和H520发生G2/M期阻滞（P<0.05）,但对细胞凋亡无明显影响。4.m6A修饰相关分子以及去甲基化药物对FEZF1-AS1表达的影响利用m6A预测软件SRAMP对FEZF1-AS全长序列（2,653 bp）进行了预测,共预测到7个m6A修饰位点,提示FEZF1-AS1表达可能受m6A修饰调节。siRNA转染敲低H1299细胞中m6A修饰相关分子-METTL3、METTL14、YTHDF1及YTHDF2表达后观察了对FEZF1-AS1表达的影响。qRT-PCR检测表明,细胞中FEZF1-AS1的表达均出现一定程度的下调。与对照组相比,给予H1299和H520细胞去甲基化药物-3-脱氮腺苷处理4h,FEZF1-AS1的表达显着降低（H1299:降低81.1%;H520:降低70.6%）。初步结果提示m6A修饰可调控NSCLC细胞中FEZF1-AS1的表达。小结:1.FEZF1-AS1在非小细胞肺癌中呈高表达,并且其表达与患者淋巴结转移显着正相关。结合AUC曲线分析,提示FEZF1-AS1可作为NSCLC诊断和预后相关生物标记分子。2.敲低FEZF1-AS1表达可显着抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、细胞周期进展、迁移与侵袭能力,提示其在NSCLC中具有癌基因作用。3.m6A修饰可影响NSCLC细胞中FEZF1-AS1的表达。第二部分FEZF1-AS1作为ceRNA调控miR-320e/940-靶基因参与非小细胞肺癌进展的机制研究目的:从ceRNA的作用角度,探讨FEZF1-AS1在NSCLC中发挥癌基因作用的可能机制。方法:核浆分离检测FEZF1-AS1在细胞中的表达定位;通过RNA结合蛋白免疫共沉淀实验（RNA-binding protein immunoprecipitation,RIP）检测FEZF1-AS1与Ago2蛋白的结合;通过ceRNA预测分析可能与之结合的miRNAs;依据筛选结果合成miRNAs mimics文库转染细胞,检测对FEZF1-AS1表达的影响（其中以miR-320e和miR-940对FEZF1-AS1的抑制最为显着）;体外实验观察过表达miR-320e和miR-940对H1299和H520细胞增殖、细胞周期分布、迁移与侵袭的影响;筛选并验证FEZF1-AS1-miR-320e和FEZF1-AS1-miR-940调控的下游靶基因;RNA pull-down实验验证FEZF1-AS1与miR-320e、miR-940的结合作用。每组实验重复三次。所有数据应用SPSS Statistics 23.0统计软件进行分析,P<0.05为有显着差异。结果:1.FEZF1-AS1表达的定位及ceRNA预测分析核浆分离实验表明FEZF1-AS1主要分布于细胞浆中,可能以ceRNA机制发挥其作用。为了检测FEZF1-AS1与miRNAs间的ceRNA作用,我们利用Ago2抗体进行了RIP实验。与阴性对照Ig G组相比,Ago2组结合的FEZF1-AS1水平显着增加。在此基础上,进一步结合第一部分表达谱芯片检测结果对FEZF1-AS1进行了ceRNA预测分析。筛选出12个miRNAs并制成模拟物文库转染H1299和H520细胞,结果表明miR-320e与miR-940过表达可显着抑制FEZF1-AS1表达。2.miR-320e和miR-940在非小细胞肺癌组织中的表达利用GEO数据库（GSE53882）检索miR-320e和miR-940在397例NSCLC组织及151例正常肺组织中的表达情况,表明miR-320e（P<0.05）和miR-940（P<0.001）在癌组织中均显着低表达。在前述45例NSCLC及其配对肺组织中,miR-320e在55.56%（25/45）肿瘤组织中显着低表达,而miR-940在31.11%（14/45）肿瘤组织中显着低表达。3.miR-320e和miR-940在非小细胞肺癌细胞中的生物学作用将miR-320e和miR-940 mimics转染H1299与H520细胞,观察过表达miRNAs对NSCLC细胞在增殖、迁移与侵袭能力的影响。与对照组相比较,过表达miR-320e、miR-940均可显着抑制H1299与H520细胞的迁移与侵袭能力（P<0.05）,并是对细胞的增殖能力有一定的抑制作用。4.FEZF1-AS1作为ceRNA参与miR-320e对E2F1的调控作用进一步对miR-320e调控的下游靶基因进行了筛选与验证,包括E2F1和SKA3基因。WB检测结果证实,过表达miR-320e可显着抑制E2F1蛋白表达。同时,敲低H1299和H520细胞中FEZF1-AS1表达可降低E2F1在mRNA与蛋白水平的表达。RNA pull-down实验结果表明,与Bio-miR-NC相比,Bio-miR-320e-WT转染组FEZF1-AS1显着被富集（P<0.05）,而Bio-miR-320e-MUT组未检测到FEZF1-AS1表达。上述检测基础上,进一步通过回复实验观察了FEZF1-AS1参与miR-320e对E2F1的调控作用。结果表明,过表达FEZF1-AS1可一定程度逆转miR-320e对E2F1的抑制作用。综合结果表明,NSCLC中FEZF1-AS1作为ceRNA参与miR-320e对E2F1的调控作用。5.FEZF1-AS1作为ceRNA参与miR-940对SRC的调控作用对miR-940调控的下游靶基因进行了筛选与验证,包括SRC和SKA3基因。WB检测结果表明过表达miR-940可显着抑制SRC蛋白的表达。同时,敲低H1299和H520细胞中FEZF1-AS1表达可降低SRC在mRNA与蛋白水平表达。RNA pull-down实验结果表明,与阴性对照Bio-miR-NC相比,Bio-miR-940-WT转染组FEZF1-AS1显着被富集（P<0.05）,而Bio-miR-940-MUT组未检测到FEZF1-AS1表达。回复实验结果表明,过表达FEZF1-AS1可一定程度逆转miR-940对SRC的抑制作用。综合结果表明,NSCLC中FEZF1-AS1作为ceRNA参与miR-940对SRC的调控作用。小结:1.FEZF1-AS1主要分布在细胞浆内,并且与Ago2蛋白结合,提示FEZF1-AS1与miRNAs间存在ceRNA作用机制。2.过表达miR-320e及miR-940可显着抑制NSCLC细胞的迁移、侵袭与增殖能力,提示其在NSCLC中具有抑癌基因作用。3.FEZF1-AS1作为ceRNA对miR-320e-E2F1、miR-940-SRC的调控是其参与NSCLC发生发展的重要机制。第三部分FEZF1-AS1对非小细胞肺癌中miR-516b-5p-ITGA11表达调控作用的研究目的:以mRNA-FEZF1-AS1为依据,进一步揭示FEZF1-AS1在NSCLC中的调控机制。方法:将mRNA表达谱芯片检测结果与ceRNA预测结果取交集,以mRNA为依据筛选出FEZF1-AS1可能相关的9个mRNAs;采用qRT-PCR方法检测敲低FEZF1-AS1对上述基因在mRNA水平的变化（ITGA11显着下调）;Western blot方法进一步验证FEZF1-AS1对ITGA11蛋白表达的影响;采用qRT-PCR方法检测ITGA11在45对NSCLC肿瘤及其配对正常肺组织中的表达情况;并通过体外实验观察敲低ITGA11对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响;筛选并验证与ITGA11结合的miRNAs;进一步通过RNA pull-down实验验证FEZF1-AS1与516b-5p的结合作用。每组实验重复三次。所有数据应用SPSS Statistics 23.0统计软件进行分析,P<0.05为有显着差异。结果:1 FEZF1-AS1相关mRNA的筛选与验证将ceRNA预测分析结果与8对非小细胞肺癌组织的mRNA芯片结果进行交叉比对,筛选出ITGA11、RHOV、ONECUT2、SOX4、MARK4、UBN1、COL1A1、PRKAB2、PIP5K1A共9个可能与FEZF1-AS1相关的靶基因。在筛选基础上,利用qRT-PCR方法检测了敲低FEZF1-AS1后上述9个基因表达的变化。结果表明,ITGA11 mRNA表达随FEZF1-AS1的敲低而显着降低。Western blot结果进一步证实敲低细胞中FEZF1-AS1表达可显着抑制ITGA11蛋白的表达。2 ITGA11在NSCLC中的表达及其生物学作用qRT-PCR检测结果表明,ITGA11 mRNA在45对NSCLC肿瘤组织中的表达显着高于配对的正常肺组织（P<0.05）。转染siRNA敲低ITGA11表达后检测了对NSCLC细胞功能的影响。与对照组相比,敲低ITGA11后H1299和H520细胞的增殖活性、迁移能力均明显受到抑制（P<0.05）。在侵袭实验中,H1299细胞si-ITGA11组较NC组穿膜细胞数减少（P<0.05）,但在H520细胞中并未见明显变化。3筛选验证与ITGA11结合的miRNAs结合本研究中ceRNA预测结果及已经验证ITGA11结合的miRNAs,共筛选出包括miR-126a-3p、miR-29b、miR-145、miR-486-3p、miR-516b-5p及miR-584-3p在内的6个miRNAs进行验证。qRT-PCR检测结果表明,过表达miR-516b-5p可显着抑制ITGA11 mRNA水平的表达。Western blot结果进一步证实过表达miR-516b-5p可显着抑制ITGA11蛋白表达。4 miR-516b-5p在非小细胞肺癌中的表达和生物学作用在45对组织中检测miR-516b-5p的表达情况,结果表明miR-516b-5p在肿瘤组织中的表达显着性低于正常肺组织（P<0.01）。过表达miR-516b可显着抑制H1299和H520细胞的增殖、迁移和侵袭能力。5 miR-516b-5p与FEZF1-AS1的结合作用转染生物素标记的Bio-miR-516b-MUT、Bio-miR-516b-WT以及阴性对照Bio-miR-NC,进行RNA pull-down实验检测FEZF1-AS1的富集情况,可见WT组出现FEZF1-AS1的明显富集（P<0.05）。结合前面miR-516b过表达后FEZF1-AS1的表达减少,可知miR-516b-5p与FEZF1-AS1具有结合作用,共同竞争与下游基因ITGA11的结合。6 FEZF1-AS1-miR-516b-5p-ITGA11的回复实验分别转染NC、miR-516b mimics、pc DNA3.1 FEZF1-AS1+miR-516b mimics,48小时后提取蛋白检测ITGA11表达。相较于NC组,miR-516b mimics组ITGA11表达降低,共转染组较miR-516b mimics组有所回升。小结:1.ITGA11在NSCLC肿瘤组织中的表达显着高于匹配的正常肺组织,敲低ITGA11可显着抑制NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭能力,提示其在NSCLC中发挥重要癌基因作用。2.miR-516b-5p在NSCLC肿瘤组织中的表达显着低于匹配的正常肺组织,过表达miR-516b-5p能够抑制细胞的增殖、迁移和侵袭能力,提示其在NSCLC中发挥重要抑癌基因作用。3.FEZF1-AS1作为ceRNA调控miR-516b-5p-ITGA11通路参与NSCLC的进展过程。结论:1.FEZF1-AS1在非小细胞肺癌中呈高表达,并且其表达与患者淋巴结转移显着正相关。敲低FEZF1-AS1表达可显着抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、细胞周期进展、迁移与侵袭能力。结合AUC曲线分析提示,FEZF1-AS1在NSCLC中具有癌基因作用,可作为NSCLC诊断和预后相关的生物标记分子。2.FEZF1-AS1主要分布在细胞浆内,并且与Ago2蛋白结合,提示FEZF1-AS1可通过ceRNA作用机制参与NSCLC的进展过程。3.过表达miR-320e、miR-940、miR-516b-5p可显着抑制NSCLC细胞的迁移、侵袭与增殖能力,提示上述miRNAs在NSCLC中具有抑癌基因作用。4.FEZF1-AS1作为ceRNA调控miR-320e-E2F1、miR-940-SRC以及miR-516b-5p-ITGA11通路从而参与NSCLC的发生发展过程。5.m6A修饰参与NSCLC细胞中FEZF1-AS1的表达。
赵云峰,张明周,游雅婷,钱澜兰,郭亮,吴学玲[9]（2017）在《胸膜转移性肺癌环状RNA表达谱及其临床意义》文中研究表明目的探讨环状RNA（circRNA）在胸膜转移性肺癌和胸膜结核表达谱中的差异。方法利用circRNA芯片技术检测3例胸膜转移性肺癌和胸膜结核患者的表达谱,经过对原始数据进行预处理,均一化后,找出差异表达的circRNA,经qRT-PCR进行验证。根据表达差异倍数较高和样本间一致性较好的原则筛选circRNA,借助生物信息学软件预测可能受其调控的miRNA,结合文献检索初步确定可能在胸膜转移性肺癌中具有重要作用的circRNA。结果与胸膜结核比较,胸膜转移性肺癌中1.5倍以上变化,并且差异有统计学意义的circRNA定义为差异表达的circRNA。胸膜转移性肺癌中,1.5倍以上变化且P≤0.05的circRNA共3条,其中上调2条,下调1条。分别为在胸膜转移性肺癌中明显上调的hsa-circ-103212（1.671倍,P=0.0245）、hsa-circ-104822（1.514倍,P=0.0478）和明显下调的hsa-circ-100548（1.808倍,P=0.0287）。生物信息学分析和文献检索显示,hsa-miR-613和hsa-miR-24-3p可能受hsa-circRNA-104822的调控而影响肺癌的发生、发展和转移。结论与胸膜结核比较,胸膜转移性肺癌circRNA表达谱发生了显着变化;hsa-circRNA-104822可能在肺癌、发展和转移中起重要作用。
陈静[10]（2017）在《循环肿瘤细胞上皮—间质转化表型检测及糖代谢特征分析》文中认为背景:肿瘤转移是恶性肿瘤预后不良和致死率升高的首要原因,也是临床肿瘤治疗面临的重大挑战。上皮-间质转化（Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT）是指在特定生理或病理条件下,上皮细胞失去原有的极性并转化为可在细胞外基质之间自由移动的间质细胞的现象,肿瘤细胞可通过EMT变得更具侵袭性从而促进肿瘤的转移。细胞代谢重编程（Metabolism Reprogramming）是肿瘤细胞的重要特征,表现为线粒体氧化呼吸障碍、高度依赖有氧糖酵解、磷酸戊糖途径和谷氨酰胺代谢增强。肿瘤细胞通过代谢重组摄入和消耗大量葡萄糖,以保障细胞生长和转移过程中能量消耗和大分子合成的需要。循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cells,CTCs）是指来源于肿瘤原发灶或转移灶、因自发或诊疗因素释放到外周血液循环中的肿瘤细胞,CTCs可随血液系统播散至远处器官或组织并定植形成新的转移灶。外周血CTCs的水平与肿瘤患者的疾病进展和转移复发密切相关,CTCs计数和分子特征分析对于患者的临床分期辅助诊断、治疗反应性和预后判断、复发转移监测等方面有重要意义。因此,本研究主要旨在从EMT表型分型和细胞代谢功能状态方面对肿瘤患者外周血CTCs进行特征分析,研究内容包括循环肿瘤细胞EMT分型检测技术应用分析（第二章）、肿瘤转移相关的糖代谢差异基因筛选及验证（第三章）、外周血循环肿瘤细胞代谢特征分析及其临床意义（第四章）三部分（本文第一章为绪论）。方法:本研究主要采用了一种新型的Canpatrol（?）CTCs分型检测平台对肿瘤患者外周血CTCs进行分析。第二章研究中对南方医院2014年12月1日至2016年12月31日期间利用该方法进行CTCs分型检测的551例肿瘤患者血样结果进行总结分析,同时收集患者性别、年龄、肿瘤分期及肿瘤特异性血清标志物等临床病理特征资料,分析CTCs分型检测结果与这些参数的关联性。第三章中主要利用功能分类基因芯片技术比较高转移和低转移前列腺癌细胞株PC-3M 1E8和PC-3M 2B4中糖代谢基因表达谱的差异,并通过荧光定量PCR和Western blot技术同时检测芯片的差异表达基因在其他几种具有不同转移潜能的前列腺癌细胞（LNCAP、PC-3及DU145细胞）中的表达,以筛选肿瘤转移相关的糖代谢特征基因。第四章中利用Canpatrol（?）CTCs检测平台分别检测前期筛选验证的肿瘤转移相关糖代谢基因在肝细胞癌、肺癌、宫颈癌等肿瘤患者外周血CTCs中的表达情况,进一步从中选择高代谢型CTCs的联合检测标志物,用于前列腺癌和乳腺癌患者血液高代谢型CTCs表达特征的分析。结果:第二章研究中共分析了 551例肿瘤患者血样检测结果,主要包括肝细胞癌（195例）、鼻咽癌（38例）、肺癌（114例）、结直肠癌（74例）、骨肉瘤（35例）、肾癌（18例）和其他肿瘤（77例）。以CTCs≥3个/5mL外周血为CTCs阳性判断标准,各肿瘤CTCs阳性率为61%～80%（肝细胞癌75%、肺癌61%、鼻咽癌63%、结直肠癌68%、骨肉瘤80%、肾癌72%、其他肿瘤64%）,CTCs阳性患者的CTCs计数中位数范围为5～10个/5mL,分布范围为3～86个/5mL。此外,在380例CTCs阳性的样本中,检测到3种类型CTCs的例数分别为E型202例、H型338例和M型235例,其总体阳性率分别为E型53%、H型89%、M型62%。同时对肝细胞癌、鼻咽癌等患者CTCs的EMT分型与临床病理特征进行分析,发现外周血CTCs的数量及表达M型标志物CTCs的比例与患者的转移状态、临床分期和血清肿瘤标志物的水平相关。第三章研究中利用功能分类基因芯片筛选了 39个高转移细胞PC-3M 1E8和低转移细胞PC-3M 2B4的差异表达基因,经荧光定量PCR和Western blot验证和在LNCAP、PC-3、DU145三种细胞之间二次筛选,最终确定了 HK2（己糖激酶2）、PDP2（丙酮酸酶磷酸酶催化亚基2）、G6PD（葡萄糖-6-磷酸脱氢酶）、PGK1（磷酸甘油酸激酶1）、PHKA1（磷酸酶激酶α1）、PYGL（糖原磷酸化酶）、PDK1（丙酮酸脱氢酶激酶1）、PKM2（M2型丙酮酸激酶）、ALDOA（果糖二磷酸醛缩酶A）和ENO1（烯醇化酶1）十个肿瘤转移相关的代谢特征基因,且它们与几种细胞中EMT相关标志物（Vimentin、β-catenin、N-cadherin）和肿瘤干细胞相关标志物（CD44、CD133、OCT4、ALDH1）的表达水平有一定的关联性。第四章研究中首先检测了上述肿瘤转移相关的代谢特征基因在64例肿瘤患者（包括10例肝细胞癌、21例宫颈癌、8例肺癌、8例鼻咽癌、9例食管癌、8例肾癌）外周血CTCs中的表达情况,结果发现在多种实体肿瘤患者血液中均检测到高表达上述代谢标志物的CTCs,总阳性率为16%至84%,且在不同EMT分型的CTCs中表达特点不一。它们在E型、H型和M型三种类型CTCs中的阳性率分布范围分别为0～100%（G6PD最高,为100%）、21%～96%（G6PD最高,为96%）和0～86%（PYGL最高,为86%）。其中,PGK1、PYGL和PDK1在M型CTCs中的阳性率高于在E型CTCs中的阳性率,且HK2、G6PD、PGK1和PYGL的阳性表达与CTCs的EMT分型关系密切（P<0.05）。进一步利用G6PD+PGK1联合检测CTCs的高代谢状态并初步分析前列腺癌和乳腺癌患者外周血CTCs的代谢特征,发现在伴发远处转移的前列腺癌和乳腺癌患者中,外周血CTCs计数水平高于无转移的患者,且M型CTCs的比例也相对升高。同时,转移性前列腺癌和乳腺癌患者外周血高代谢型（G6PD+PGK1 阳性）CTCs的阳性率在H和M型CTCs中较E型CTCs中高,且与前列腺癌患者的血清tPSA、fPSA水平及肿瘤Gleason评分存在一定的相关性,也与乳腺癌患者的血清CA153、CEA水平及肿瘤组织ki67表达水平存在一定的关联。结论:1.M型标志物在肝细胞癌、肺癌、鼻咽癌等肿瘤患者外周血的CTCs中的表达非常常见,同时检测这部分细胞可以提高CTCs的捕获率和检测准确性。表达M型标志物的CTCs比例升高与肿瘤患者的临床分期和转移相关,分析外周血CTCs的EMT表型特点有助于临床肿瘤患者病情和转移的辅助诊断。2.肿瘤转移相关的糖代谢特征标志物在肝细胞癌、肺癌、鼻咽癌等肿瘤的某些CTCs中呈高表达状态,且与CTCs的EMT表型分型特点相关,而高代谢型CTCs的比例与前列腺癌和乳腺癌患者的转移和血清肿瘤标志物水平存在一定的关系,因此分析CTCs的代谢功能状态可以为肿瘤患者疾病进展和转移监测提供有益信息。
二、转移性肺癌中TPEN蛋白的表达及其临床意义（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、转移性肺癌中TPEN蛋白的表达及其临床意义（论文提纲范文）
（2）缺氧诱导外泌体miR-31-5p对肺腺癌侵袭转移的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 附录 英文缩略词 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一章 缺氧来源外泌体对肺腺癌细胞侵袭转移的影响 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 材料和方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 外泌体miR-31-5p调控肺腺癌侵袭转移的机制研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 肺腺癌患者血浆来源外泌体miR-31-5p的表达及临床意义 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 长链非编码RNA GCC2-AS1 在肺腺癌中的作用及预后意义 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 外泌体在肺癌中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间学术成绩及获奖情况 |
| 致谢 |
（3）SALL4在非小细胞肺癌中表达的临床意义及作用分子机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 SALL4在肺癌中表达及其临床意义 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 SALL4对NSCLC细胞生物学功能的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三部分 SALL4调控NSCLC细胞生物学功能分子机制的研究 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 SALL4在恶性肿瘤中调控作用的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
| 缩略词 |
| 致谢 |
（4）长链非编码RNA SFTA1P在非小细胞肺癌中的作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 第一章 长链非编码RNA SFTA1P在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二章 长链非编码RNA SFTA1P对非小细胞肺癌生物学行为的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 长链非编码 RAN 作为肺癌潜在生物标志物的研究进展 |
| 参考文献 |
| 作者简历 |
| 致谢 |
| 学位论文数据集 |
（5）miR-339-5p在非小细胞肺癌中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表(以字母顺序排列) |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 miR-339-5p在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及临床意义 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 miR-339-5p对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系生物学行为的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 miR-339-5p对非小细胞肺癌(NSCLC)体内实验的研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 BCL6作为miR-339-5p直接靶基因的研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述 miRNA在肺癌中作用的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（6）HER-2在非小细胞肺癌中的表达和临床意义（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 检测方法 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 HER-2蛋白在不同组织类型中表达情况 |
| 2.2 HER-2蛋白表达与性别和年龄相关性分析 |
| 3 讨论 |
（7）EB病毒对胃癌中Caveolin-1表达的调控作用和机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 1 仪器、试剂和耗材 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 主要试剂和耗材 |
| 1.3 试剂配制 |
| 2 细胞系以及胃癌和癌旁组织标本 |
| 2.1 细胞系 |
| 2.2 胃癌及癌旁石蜡包埋组织标本 |
| 3 细胞系中CAV-1 基因mRNA以及蛋白表达检测 |
| 3.1 实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测mRNA表达 |
| 3.2 Western blotting检测细胞系中CAV-1 蛋白表达 |
| 4 免疫组化检测胃癌及癌旁组织中CAV-1 蛋白表达 |
| 4.1 实验步骤 |
| 4.2 结果观察及判断 |
| 5 EBV-miR-BART1-3p转染及CAV-1 表达检测 |
| 5.1 EBV-miR-BART1-3p转染 |
| 5.2 CAV-1 蛋白表达检测 |
| 6 CAV-1 基因甲基化检测 |
| 6.1 细胞系及组织样本DNA提取 |
| 6.2 DNA亚硫酸盐处理 |
| 6.3 甲基化检测 |
| 7 CAV-1 RNAi慢病毒转染 |
| 7.1慢病毒载体转染目的细胞预实验 |
| 7.2慢病毒载体转染目的细胞正式实验 |
| 7.3 稳定感染细胞的筛选 |
| 7.4 转染细胞目的蛋白CAV-1 表达鉴定 |
| 8 细胞生物学实验 |
| 8.1 CCK-8 检测细胞增殖 |
| 8.2 流式细胞检测细胞周期 |
| 8.3 平板克隆形成实验 |
| 8.4 凋亡诱导实验 |
| 8.5 细胞迁移和侵袭实验 |
| 9 统计学分析 |
| 结果 |
| 1 EBV对CAV-1 表达的抑制作用 |
| 1.1 EBV阳性和阴性细胞系中CAV-1 的表达 |
| 1.2 EBVaGC和 EBVnGC组织中CAV-1 的表达 |
| 2 EBV-miR-BART1-3p对 CAV-1 表达的调控作用 |
| 3 EBV诱导CAV-1 启动子和第一外显子甲基化 |
| 3.1 EBV阳性和阴性胃癌细胞中CAV-1 启动子及第一外显子区甲基化状态 |
| 3.2 EBVaGC和 EBVnGC组织中CAV-1 启动子甲基化状态 |
| 3.3 5-Aza-dC作用EBV阳性细胞系中CAV-1 的表达 |
| 3.4 EBV阳性和阴性胃癌细胞中DNMTs的表达 |
| 4 抑制CAV-1 表达对胃癌细胞生物学行为的影响 |
| 4.1 CAV-1 siRNA有效抑制CAV-1 在胃癌细胞系中的表达 |
| 4.2 抑制CAV-1 表达促进细胞增殖 |
| 4.3 抑制CAV-1 表达增强胃癌细胞抗凋亡能力 |
| 4.4 抑制CAV-1 表达促进胃癌细胞迁移和侵袭 |
| 5 胃癌和癌旁组织中CAV-1 的表达及与临床病例参数的相关性 |
| 5.1 配对胃癌和癌旁组织中CAV-1 的表达 |
| 5.2 CAV-1 表达与胃癌病人临床病理参数的关系 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 致谢 |
（8）LncRNA FEZF1-AS1在非小细胞肺癌中的表达及其作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 FEZF1-AS1在非小细胞肺癌中的表达及其生物学作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 FEZF1-AS1 作为ceRNA调控mi R-320e/940-靶基因参与非小细胞肺癌进展的机制研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 FEZF1-AS1 对非小细胞肺癌中mi R-516b-5p-ITGA11 表达调控作用的研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 LncRNA在肺癌中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）胸膜转移性肺癌环状RNA表达谱及其临床意义（论文提纲范文）
| 材料与方法 |
| 一、实验材料 |
| 二、研究方法 |
| 三、生物信息学分析 |
| 四、统计学方法 |
| 结果 |
| 一、识别差异表达的circRNA |
| 二、聚类分析circRNA表达谱的差异 |
| 三、胸膜转移性肺癌中差异表达circRNA的筛选 |
| 四、可能与circRNA相互作用的miRNA |
| 讨论 |
（10）循环肿瘤细胞上皮—间质转化表型检测及糖代谢特征分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 循环肿瘤细胞与肿瘤恶性转移 |
| 1.2 循环肿瘤细胞检测技术 |
| 1.3 循环肿瘤细胞检测的临床应用 |
| 第二章 循环肿瘤细胞EMT分型检测技术应用分析 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.3 研究结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 肿瘤转移相关的糖代谢差异基因筛选及验证 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 外周血循环肿瘤细胞代谢特征分析及其临床意义 |
| 4.1 研究对象 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词表 |
| 在读期间已发表和待发表论文 |
| 致谢 |
四、转移性肺癌中TPEN蛋白的表达及其临床意义（论文参考文献）
- [1]SRPX2在非小细胞肺癌中的表达及与pERK1/2蛋白表达的关系[J]. 黄蓓蕾,陈芳. 中国医师杂志, 2021(10)
- [2]缺氧诱导外泌体miR-31-5p对肺腺癌侵袭转移的影响及机制研究[D]. 余凤强. 福建医科大学, 2021(02)
- [3]SALL4在非小细胞肺癌中表达的临床意义及作用分子机制的研究[D]. 栗家平. 苏州大学, 2020(06)
- [4]长链非编码RNA SFTA1P在非小细胞肺癌中的作用[D]. 周玫余. 贵州医科大学, 2020(04)
- [5]miR-339-5p在非小细胞肺癌中的作用及机制研究[D]. 胡早秀. 昆明医科大学, 2019
- [6]HER-2在非小细胞肺癌中的表达和临床意义[J]. 吴淑红,荣福,欧阳雁弟. 中国现代药物应用, 2019(11)
- [7]EB病毒对胃癌中Caveolin-1表达的调控作用和机制研究[D]. 贺荟静. 青岛大学, 2019(03)
- [8]LncRNA FEZF1-AS1在非小细胞肺癌中的表达及其作用机制研究[D]. 宋姮. 河北医科大学, 2019(02)
- [9]胸膜转移性肺癌环状RNA表达谱及其临床意义[J]. 赵云峰,张明周,游雅婷,钱澜兰,郭亮,吴学玲. 中华肺部疾病杂志(电子版), 2017(06)
- [10]循环肿瘤细胞上皮—间质转化表型检测及糖代谢特征分析[D]. 陈静. 南方医科大学, 2017(01)